,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,医学微生物学实验二,基础医学院病原生物学教研室,医学微生物学实验二基础医学院病原生物学教研室,1,主要内容,革兰染色（,Grams stain,）,培养基及接种,主要内容革兰染色（Grams stain）,2,革兰染色（,Grams stain）,Gram stain-,由丹麦细菌学家革兰(,Hans Christian Gram),创建的一种鉴别染色法。,原理,程序,结果,意义,革兰染色（Grams stain）Gram stain,3,革兰染色原理,细胞壁结构不同,等电点差别,革兰染色原理 细胞壁结构不同,4,革兰染色程序,程序:,涂片 干燥 固定 染色 镜检,革兰染色程序 程序:,5,染色过程及结果,革兰染色,采用4种试剂分4步：,结晶紫,碘液,95%乙醇,复红,（初染）（媒染）（脱色）（复染）,革兰阳性菌,革兰阴性菌,（菌体为紫色）,（菌体为红色）,1,min,水洗,1,min,水洗,30,s,水洗,1,min,水洗,染色过程及结果 革兰染色 采用4种试剂分4步：1min 水,6,革兰染色意义,鉴别细菌,帮助临床选择用药,理解细菌的致病作用,革兰染色意义鉴别细菌,7,培养基及接种,培养基制备（示教）,培养基接种,细菌的培养方法,培养基及接种培养基制备（示教）,8,基础培养基制备（示教）,1.培养基的概念：,将适合于细菌生长繁殖的各种营养物质用人工的方法配制而成的营养基质,。,基础培养基制备（示教）1.培养基的概念：,9,2.培养基的制备过程,以牛肉膏汤培养基为例（液体）,成分：,牛肉膏3克,蛋白胨10克,氯化钠5克,蒸馏水1000毫升,调配,加热融化,过滤,调,pH,分装,高压灭菌,无菌检测,冰箱备用,2.培养基的制备过程以牛肉膏汤培养基为例（液体）调配加热融化,10,肉汤培养基,取1000毫升肉浸液，加入10克蛋白胨和5克氯化钠 经上述步骤制成。,其营养价值较牛肉膏汤要高。,但因肉浸液制作烦琐，而牛肉膏汤培养基制作简单，故常用。,肉汤培养基取1000毫升肉浸液，加入10克蛋白胨和5克氯化钠,11,固体、半固体琼脂培养基,琼脂,：属于凝固剂，其化学成份主要是酸性多糖。其特点是当温度达到98以上可融化于水，45以下则凝固。,半固体琼脂培养基,：取100毫升,pH7.8,的肉汤或牛肉膏汤培养基加入0.30.5琼脂制成。,固体琼脂培养基,：取100毫升,pH7.8,的肉汤或牛肉膏汤培养基加入23克的琼脂制成。,固体、半固体琼脂培养基琼脂：属于凝固剂，其化学成份主要是酸性,12,培养基的种类,按照培养基的用途可分为,五类,。,按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体,三类,。,培养基的种类按照培养基的用途可分为五类。,13,厌氧培养基,基础培养基,营养培养基,选择培养基,鉴别培养基,厌氧培养基基础培养基营养培养基选择培养基鉴别培养基,14,培养基按照物理性状分类,液体培养基 固体斜面培养基 半固体培养基,固体平板培养基,培养基按照物理性状分类 液体培养基,15,培养基接种,固体平板培养基,固体斜面培养基,液体培养基,半固体培养基,培养基接种固体平板培养基,16,固体平板培养基,用途：分离混杂的细菌,接种方法：连续平行划线法和分区划线法,生长现象：呈菌苔和菌落样生长,固体平板培养基用途：分离混杂的细菌,17,1,连续平行划线法,涂基线,划线,划线完毕，将琼脂平板培养基复盖皿盖，并在培养皿底玻璃上，用蜡笔注明接种菌名、接种者姓名及班级、日期等，将培养皿倒置放在37,孵育箱培养，以避免培养过程中凝结水自皿盖滴下，同时可以保持琼脂表面的湿润。,1连续平行划线法涂基线,18,平行划线法的示意图,A B,是最常使用的、最基本的方法，其中图,B,常用于含菌量较少的标本。,平行划线法的示意图A B是最常使用的、最基本的方法，其中图B,19,2分区划线法,基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线前要烧灼接种环，以杀灭环上留剩的菌液。,用于含菌量较多的混杂标本。,本次试验要求同学掌握细菌分离培养的分区划线法,。,2分区划线法基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线,20,固体平板培养基,用途,接种方法,生长现象,固体平板培养基用途,21,细菌在固体平板培养基上的,生长现象,细菌在固体平板培养基上呈菌苔或菌落样生长。,观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色、溶血环等性状。,细菌在固体平板培养基上的生长现象细菌在固体平板培养基上呈菌苔,22,细菌在固体平板培养基上呈菌苔和菌落样生长,细菌在固体平板培养基上呈菌苔和菌落样生长,23,细菌在固体培养基中的生长情况,光滑型菌落,S,型,粗糙型菌落,R,型,粘液型菌落,M,型,细菌在固体培养基中的生长情况光滑型菌落S型粗糙型菌落粘液型菌,24,固体斜面培养基,用途：观察细菌的培养特性、生化反应、保存菌种。,接种方法：连续划线法。,生长现象：呈菌苔样生长。,固体斜面培养基用途：观察细菌的培养特性、生化反应、保存菌种。,25,操作手法,操作手法,26,斜面接种法,斜面接种法,27,固体斜面培养基,接种后细菌生长现象,固体斜面培养基接种后细菌生长现象,28,液体培养基,用途：增菌及检测生化反应。,接种方法：研磨接种。,生长现象：浑浊、沉淀、菌膜样生长。,液体培养基用途：增菌及检测生化反应。,29,液体培养基接种法,液体培养基接种法,30,细菌在液体培养基中的生长现象,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,细菌在液体培养基中的生长现象菌膜菌沉淀均匀浑浊对照,31,半固体培养基,用途：检测细菌动力、生化反应。,接种方法：接种针穿刺法,生长现象：,沿穿刺线生长-,无动力。,沿穿刺线扩散生长（呈云雾状或羽毛状）-,有动力。,半固体培养基用途：检测细菌动力、生化反应。,32,穿刺培养的生长特征,穿刺培养的生长特征,33,细菌在半固体培养基中的生长现象,A、,有动力,B、,无动力、,C、,空白对照,细菌在半固体培养基中的生长现象A、有动力 B、无动力、,34,细菌的培养方法,普通培养法,二氧化碳培养法,厌氧培养法,细菌的培养方法普通培养法,35,普通培养箱 厌氧罐 厌氧袋,普通培养箱 厌氧罐 厌氧袋,36,厌氧培养箱,厌氧培养箱,37,Thank You!,Thank You!,38,细菌的细胞壁,（,cell wall,）,1.,化学组分：聚糖骨架,革兰,肽聚糖,peptidoglycan,四肽侧链,阳性,五肽交联桥,菌,磷壁酸,techoic acid,革兰,肽聚糖,peptidoglycan,阴性,脂多糖,lipopolysaccharide,LPS,菌,脂质双层：内有,OMP,外膜,脂蛋白,细菌的细胞壁（cell wall）,39,G,+,菌肽聚糖结构,G+菌肽聚糖结构,40,G-,菌肽聚糖结构,G-菌肽聚糖结构,41,革兰阳性菌细胞壁结构,革兰阳性菌细胞壁结构,42,革兰阴性菌细胞壁结构,外,膜,革兰阴性菌细胞壁结构外,43,