单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,可见分光光度计性能检查,卫生检验学教研室,王茂清,可见分光光度计性能检查 卫生检验学教研室,1,1、掌握可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器,的使用,2、熟悉仪器的主要性能和技术指标,3、了解可见分光光度计的基本结构,一、实验目的,1、掌握可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器 一、实验目,2,二、实验原理,紫外可见分光光度法是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的,吸收特征和吸收程度,，对物质的组成进行定性或,定量,及结构分析的方法。,Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。,A=bC,二、实验原理 紫外可见分光光度法是根据物质的分子,3,为了确保可见分光光度计分析的灵敏度和准确度，需要定期对仪器鉴定，通过对一些特定技术指标的评价，可以了解仪器是否处于良好状态。,不同型号仪器的技术指标所能达到的标准不同，可以按照仪器说明书中的标准，采用特定方法评价进行评价。,为了确保可见分光光度计分析的灵敏度和准确度，需要定期对,4,1、开机：,打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约0.5h。,2、选择测量模式：,在初始化完成之后，系统默认进入光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按MODE键进行切换。,三、仪器的使用方法,1、开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约,5,3、设置测量波长,：,在测量界面下，按GOTO 键，在数字键盘上键入波,长数值，按ENTER键,4、设置吸收池模式和个数,：,按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。,（1）按上翻键，设置吸收池类型：,3、设置测量波长：,6,（,2）按下翻键，设置吸收池个数,例如：如果实验需要6个吸收池进行测量，那么吸收池类型应设置为8CELL，吸收池个数设为6,。,注意：,设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳,（2）按下翻键，设置吸收池个数注意：设定的吸收池个数不应大于,7,5、,自动校零：,按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面。在1号吸收池中放入空白溶液，按Zero键进行空白校正。,注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正,5、自动校零：注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成,8,6、,测量样品,：,从,2,号吸收池开始，依次放入样品，按,START,键，仪器测量全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值。读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值,7、结束测量：,按,SHIFT/RETURN,键，从读数界面返回测量界面，关闭电源,6、测量样品：从2号吸收池开始，依次放入样品，按START键,9,1、试剂,：,氯化钴溶液：,2000、6000、10000g/ml,亚硝酸钠溶液：,50g/L,2、器材,：,T6,新悦可见分光光度计,1cm,玻璃吸收池,镜头纸,滤纸,洗瓶,一次性吸管,四、试剂与器材,1、试剂：氯化钴溶液：2000、6000、10000g/m,10,五、实验步骤,1、波长校正,2、波长重现性检定,3、线性误差检查,4、透光度重现性检定,5、杂散辐射率,6、吸收池的配套性检定,7、稳定度检测,五、实验步骤1、波长校正,11,1、,波长校正（波长准确度检定）,：,开机，预热,按,SHIFT/RETURN,按数字键,9,系统自动检测内置镨钕玻璃片,808.0nm,的特征波长，时间大约1min。检测完成后，系统显示实测波长值,1、波长校正（波长准确度检定）：开机，预热按SHIFT/RE,12,（1）,实测值与808.0nm的差值大于1nm时，应进行校正：在,默认的“yes”状态下，按ENTER键，系统将进行校,正，然后返回系统应用界面,（2）,实测值与808.0nm差值小于1nm时，无须校正：,按下翻键，切换至“no”，再按ENTER键，系统直接返,回系统应用界面,（1）实测值与808.0nm的差值大于1nm时，应进行校正：,13,以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶(6000g/ml)在,506、508、510、512、514，516nm,处的吸光度。从一个波长方向，逐一作3次测量，记录吸光度值，做吸收光谱图，波长为横坐标，吸光度值为纵坐标。选择最大吸收峰波长测量值，代入公式计算波长重复性,(0.2nm,)。,2、,波长重现性检定,：,以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶(6000g/ml),14,3、,线性误差检查,：,以蒸馏水为参比，测量2000、6000、10000g/ml氯化钴溶,液于,514nm,处的吸光度，重复测定,3,次，记录吸光度值，取,其平均值代入公式计算,3、线性误差检查：,15,按SHIFT/RETURN键，从读数界面切换至测量界面。,（1）设置波长：514nm,（2）设置吸收池个数：4个,（3）空白校正,（4）测量：将氯化钴溶液分别倒入2、3、4号吸收池中，按START键开始测量，记录读数。,具体步骤,：,按SHIFT/RETURN键，从读数界面切换至测量界面。具,16,计算线性误差公式,：,计算线性误差公式：,17,4、,透光度重现性检定,：,以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶液（6mg/ml）,510nm,的透,光度（英文缩写T），重复,7,次，记录读数。,技术指标：T 0.15,4、透光度重现性检定：技术指标：T 0.15,18,以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2,360nm,处的透光度，即为仪器在此波长处的杂散辐射率,技术指标：杂散辐射率,0.1,5、,杂散辐射率,：,以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2 360n,19,在同一工作条件下，同一光径吸收池分别注入蒸馏水，测定各吸收池在,700nm,处的透光度。凡透光度值之差不大于,5%,的吸收池可以配套使用,6、,吸收池的配套性检定,：,在同一工作条件下，同一光径吸收池分别注入蒸馏水，测定,20,（2）,光电流稳定度（100%）：调节透光度为透光度为,100时，观察3min，记录读数。示值的最大漂移,量，即为光电流稳定度,100%：,0.5%/3min,7、稳定度检测,（1）,零点（0%）稳定度：吸光度为0，观察3min，,记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度,0%,：,0.3%/3min,（2）光电流稳定度（100%）：调节透光度为透光度为7、,21,思考题,：,1.,了解,吸收光谱,2.Lambert_Beer定律的适用条件和影响因素,思考题：,22,预习,实验二 原子吸收分光光度法测定发中锌含量,预习重点,：,1、湿法消化,2、标准曲线,预习,23,