,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精选版课件ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精选版课件ppt,*,PCR,技术原理及人,SRY,基因扩增,1,精选版课件ppt,DNA,的结构,2,精选版课件ppt,DNA,的复制,模板：基因组,DNA,原料：游离的核苷酸,A,、,G,、,C,、,T,催化剂：,DNA,聚合酶,需要的条件：,活细胞内的微观环境,3,精选版课件ppt,DNA,的复制,4,精选版课件ppt,体内,in vivo,体外,in vitro,DNA,的复制,5,精选版课件ppt,PCR,技术的发明,Kary B.Mullis,Californian highway,6,精选版课件ppt,Khorana(1971),等提出在体外经,DNA,变性,与适当引物杂交,再用,DNA,聚合酶延伸,克隆,DNA,的设想。,1983,年,Mullis,发明了,PCR,技术,使,Khorana,的设想得到实现。,1988,年,Saiki,等将耐热,DNA,聚合酶（,Taq,）引入了,PCR,技术。,1989,年美国,Science,杂志列,PCR,为十余项重大科学发明之首,比喻,1989,年为,PCR,爆炸年,Mullis,荣获,1993,年度诺贝尔化学奖。,7,精选版课件ppt,8,精选版课件ppt,PCR,技术的特点,1,）高度的灵敏性,2,）特异性,3,）操作简便易行,4,）用途广泛,30,轮循环扩增量达,2,30,个拷贝（,10,9,拷贝）,9,精选版课件ppt,生命科学：,DNA,重组、转基因生物,医学工程：基因疫苗、产前诊断,疾病诊断：艾滋病、禽流感,法医学：血迹、精斑等痕迹,DNA,考古学：远古人类、猛犸,DNA,PCR,技术的应用,10,精选版课件ppt,人的性别决定,11,精选版课件ppt,人的性别决定,Father Mother,22pairs+XY,22pairs+XX,22+X,22+Y,22+X,sperm,egg,22pairs,+,X,X,22pairs,+,X,Y,Girl,Boy,12,精选版课件ppt,1959,年生物学家发现,Y,染色体决定人（和老鼠）的男性特征,;,1975,年，,Wachtel,等提出,Y,染色体上有一个组织相容性抗原的基因,H-Y,和男性决定有关,;,1987,年,David Page,认为,Y,染色体上一个特定的基因,ZFY,是决定男性的基因,;,1988,年,澳大利亚的,Sinclair,实验室发现袋鼠类的,ZFY,基因不在,Y,染色体上，而是在常染色体上,;,1990,年，澳大利亚女科学家,Marshall Graves,和英国的,Lovell-Badge,两个实验室发现另外一个基因,SRY,。,13,精选版课件ppt,人的性别决定,Y,SRY,男性,14,精选版课件ppt,利用,PCR,技术检测,SRY,基因,男性，有,SRY,阳性结果,女性，无,SRY,阴性结果,应用：奥运会运动员的性别鉴定,犯罪现场血痕、毛发的性别鉴定,野生动物的性别鉴定,男 女,15,精选版课件ppt,总体积,25,l,Buffer,缓冲液,dNTP,原料,Primer,引物,DNA,分子 模板,Taq,酶,DNA,聚合酶,反应体系,16,精选版课件ppt,移液器（,pipette,）,枪头（,tips,）,反应管（,tube,）,17,精选版课件ppt,95 3min,；,94 30s,、,52 30s,、,72 30s,30,个循环；,72,延伸,5min.,18,精选版课件ppt,核酸电泳,1.,根据欲分离,DNA,片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液。,19,精选版课件ppt,2.,放入到微波炉内加热熔化,20,精选版课件ppt,3.,冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固。凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内,21,精选版课件ppt,4.,向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面,1mm,为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去。,22,精选版课件ppt,5.,在,DNA,样品中加入,10,体积的载样缓冲液（,loading buffer,），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内。,23,精选版课件ppt,6.,接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记,DNA,样品由负极往正极泳动,(,靠近加样孔的一端为负,),；根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳。,24,精选版课件ppt,7.,电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置。,25,精选版课件ppt,