单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第十四章 维生素类药物的分析,Analysis of Vitamines,第十四章 维生素类药物的分析 An,1,维生素A,维生素B,1,维生素C,维生素E,维生素A,2,一、结构与性质,1.结构,环己烯 多烯醇（共轭双键系统）,R=H V,A,醇(维生素A,1,)：性质活泼,R=CH,3,CO-,V,A,醋酸酯：性质稳定,第一节 维生素A的分析,一、结构与性质第一节 维生素A的分析,3,2.物理性质,淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中,V,A,醇：,max,(异丙醇)325nm,V,A,酯：,max,(环己烷)328nm,第一节 维生素A的分析,2.物理性质第一节 维生素A的分析,4,3.化学性质,日光照射裂解,空气、氧化剂、加热或金属离子等,产生环氧化物、醛、酸,三氯化锑反应,蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色,第一节 维生素A的分析,3.化学性质第一节 维生素A的分析,5,（二）鉴别,1.Carr-price反应（三氯化锑）,三氯化锑的氯仿液与V,A,作用产生蓝色,渐变成紫红色,无水：三氯化锑水解、V,A,不溶,无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用,第一节 维生素A的分析,（二）鉴别第一节 维生素A的分析,6,2.紫外法,本品加无水乙醇盐酸溶解，立即紫外扫描,326nm单一吸收峰(V,A,),水浴加热30s，迅速冷却，再扫描,348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水V,A,),第一节 维生素A的分析,2.紫外法第一节 维生素A的分析,7,三、含量测定,紫外法（三点校正法）,HPLC,第一节 维生素A的分析,三、含量测定第一节 维生素A的分析,8,1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质,1）衍生物,维生素A,2,（去氢维生素A）维生素A,3,（去水维生素A）,(一),紫外法（三点校正法）,1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质(一)紫外法（三点校,9,2）异构体,目前分离得到5个异构体,新维生素Aa(2-顺型)新维生素Ab(4-顺型),(一),紫外法（三点校正法）,2）异构体(一)紫外法（三点校正法）,10,新维生素Ac(2.4-顺型),异维生素Aa(6-顺型)异维生素Ab(2.6-二顺型),(一),紫外法（三点校正法）,新维生素Ac(2.4-顺型)异维生素Aa(6-顺型),11,3）氧化产物：环氧化物，醛，酸,4）中间体、副产品：,5）裂解产物：,6）鲸醇（Kitol）:二聚体，非生物活性,7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油,在325,328nm处均有吸收,不相关吸收或背景吸收,(一),紫外法（三点校正法）,3）氧化产物：环氧化物，醛，酸(一)紫外法（三点校正法,12,2.原理,1）维生素A最大吸收波长附近（310,340nm）,杂质吸收近似一条直线,2）物质吸收光谱的加和性,A,总,=A,VA,+A,杂质,(一),紫外法（三点校正法）,2.原理(一)紫外法（三点校正法）,13,3.三点选择,(一),紫外法（三点校正法）,(一)紫外法（三点校正法）,14,维生素A醇,1)三点：325、310、334nm,2)等吸收点：A,310,=A,334,=,3）校子公式：,A,325,（校正）=6.815A,325,-2.555A,310,-4.260A,334,(一),紫外法（三点校正法）,维生素A醇(一)紫外法（三点校正法）,15,维生素A酯,1）三点：328、316、340nm,2）波长等距：12nm,3）校正公式：,A,328,（校正）=3.52(2A,328,-A,316,-A,340,),(一),紫外法（三点校正法）,维生素A酯(一)紫外法（三点校正法）,16,4.校正公式的应用及含量计算,第一法:样品9,1,5IU/ml环己烷溶液,max326,329nm,300、316、328、340、360nm,（A,1,、A,2,、A,3,、A,4,、A,5,),计算吸收度比值,(A,1,/A,3,、A,2,/A,3,、A,3,/A,3,、A,4,/A,3,、A,5,/A,3,),计算比值差,(一),紫外法（三点校正法）,4.校正公式的应用及含量计算(一)紫外法（三点校正法）,17,吸收度比值规定值,波长（nm）,300,316,328,340,360,吸收度比值,（规定）,0.555,0.907,1.000,0.811,0.299,max,吸收度比值范围,Amax,含量（效价）,326329,0.02,Amax(不须校正),326329,0.02,3%,-3%-15%,+3%,第二法,不在326329,第二法,(一),紫外法（三点校正法）,吸收度比值规定值波长（nm）300316328340360吸,18,第二法：,a、,max,不在326,329nm,b、校正与未校正吸收度比较+3%,样品：,9,15IU/ml,(一),紫外法（三点校正法）,第二法：(一)紫外法（三点校正法）,19,max,323327nm之间,300、310、325及334nm,A,300,/A,325,0.73，计算A,325,（校正）,a、校正在未校正吸收度,土3%,以未校正吸收度计算,b、土3%，以校正吸收度计算,(一),紫外法（三点校正法）,max323327nm之间(一)紫外法（三点,20,max,不在323,327nm,或A,300,/A,325,0.73,需进一步纯化,(一),紫外法（三点校正法）,max不在323327nm(一)紫外法（三点校,21,5.生物效价和换算因子,（Biological potency and conversion factor,CF）,1IU=0.344g V,A,醋酸酯,1IU=0.300g V,A,醇,1g V,A,醋酸酯:2.90710,6,IU/g,1g V,A,醇:3.3310,6,IU/g,(一),紫外法（三点校正法）,5.生物效价和换算因子(一)紫外法（三点校正法）,22,(一),紫外法（三点校正法）,(一)紫外法（三点校正法）,23,换算因子：,单位百分吸收系数所相当于的效价,V,A,酯百分吸收系数=1530,V,A,醇百分吸收系数1820,CF(酯)=2.90710,6,/1530=1900,CF(醇)=3.3310,6,/1820=1830,(一),紫外法（三点校正法）,换算因子：(一)紫外法（三点校正法）,24,6.注意问题,仪器波长校准,半暗室快速进行,(一),紫外法（三点校正法）,6.注意问题(一)紫外法（三点校正法）,25,色谱柱：硅胶为填充剂,流动相：正己烷-异丙醇（997：3）,检测波长：325nm,系统适应性试验：维生素A醋酸酯主峰与,其顺式异构体峰的R应大于3.0。,进样5次RSD3.0%。,(二),HPLC,色谱柱：硅胶为填充剂(二)HPLC,26,第二节,维生素B,1,(,Vit B,1,),Vit B,1,Thiamine Hydrochloride,第二节 维生素B1(Vit B1)Vit B1Thiami,27,NaOH,H,2,O,NaOHH2O,28,环合,O,2H,硫色素,Thiochtome,环合O2H硫色素Thiochtome,29,结构特点与鉴别,噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH,2,缩合生成,具有荧光的硫色素,，后者,易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光,，该反应又,称为硫色素荧光反应。为维生素B,1,所特有。,结构特点与鉴别 噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化,30,生成沉淀反应,分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂,(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀,维生素B,1,在碱性加热条件下反应放出H,2,S,与Pb(Ac),2,试液形成黑色PbS。,生成沉淀反应分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂,31,含量测定 Assay,硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid,Gravimetry,非水溶液滴定法 Non-aqueous,Titrimetry,硫色素荧光法 Thiochrone Fluoremetry,含量测定 Assay硅钨酸重量法 Silicotu,32,第三节,维生素C(,Vit C),6,1,2,3,4,5,第三节 维生素C(Vit C)612345,33,L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸,有生物活性 有生物活性 无生物活性,-,2H,+2H,H,2,O,OH,-,(H,+,),L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸,34,50,蓝色,H,2,O,-,3H,2,O,糠醛,-,CO,2,戊糖,50蓝色H2O-3H2O糠醛-CO2戊糖,35,鉴别,利用其还原性,硝酸银（银镜）,2.6-二氯靛酚(褪色）,高锰酸钾（褪色）,亚甲蓝（蓝色褪去）,磷钼酸（钼蓝）,斐林氏溶液（红色氧化亚铜）,鉴别,36,（1）与硝酸银反应,本品加水溶解加硝酸银试液,银黑色沉淀（ChP、BP采用）,（1）与硝酸银反应,37,（2）2，6二氯靛酚反应,本品加水溶解2,6二氯靛酚试液,颜色消失（ChP采用）,（2）2，6二氯靛酚反应,38,含量测定,碘量法,2,6-二氯靛酚法,含量测定碘量法2,6-二氯靛酚法,39,第五节,维生素E(,Vit E),R,1,R,2,Vit E(dl-Tocopheryl Acetate),第五节 维生素E(Vit E)R1R2Vit E(,40,鉴别,1.本品无水乙醇溶解硝酸，75加热,鲜红色，逐渐转为橙红色。,鉴别,41,2.本品醇制KOH，煮沸,游离生育酚,乙醚提取,联吡啶、三氯化铁乙醇液,深红色,2.本品醇制KOH，煮沸,42,第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines课件,43,ChP V,E,中检查,生育酚,取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加,二苯胺,T.S.1滴，用,硫酸鈰,滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml,ChP VE 中检查生育酚 取Vit E 0.,44,第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines课件,45,固定液：5%SE30柱 温：25510检测器：FID内 标：十六酸十六醇酯,14.54V,E,24.40内标,固定液：5%SE30柱 温：25510检测器,46,