单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实用文档,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实用文档,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实用文档,实用文档,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实用文档,实用文档,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实用文档,实用文档,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第三代测序原理,第三代测序原理,什么是,DNA,？,DNA,是,英文,D,eoxyribo,n,ucleic,a,cid,的缩写,，,中文,含义为,脱氧核糖,核酸。,脱氧核糖核苷酸的类型：,腺嘌呤（,A,）,=,胸腺嘧啶（,T,）,胞嘧啶（,C,）,=,鸟嘌呤（,G,）,DNA,分子的排列顺序是可以检测,的，从而可以解读遗传信息，即测序。,DNA,结构（视频）,什么是DNA？DNA是英文Deoxyribonuclei,什么是基因？,基因是具有遗传效应的,DNA,分子片段，由许多脱氧核苷酸按照一定的,碱基顺序构成的长链聚合物。,基,因,身高,肤色,智商,胖瘦,什么是基因？基因是具有遗传效应的DNA分子片段，由许,基因组,：一个细胞内的全套染色体为一个基因组，或是一个细胞中的全部,DNA,为一个基因组,什么是基因组？,基因组,染色体,基因,基因组：一个细胞内的全套染色体为一个基因组，或是一个细胞中的,测序技术发展史,测序技术发展史,第一代测序原理,-,Sanger,测序法,双脱氧链终止法（,Sanger,法）：,1977,年，英国人,Fred Sanger,发现，如果在,DNA,复制过程中掺入,ddNTP,，就会产生一系列末端终止的,DNA,链，并能通过电泳按长度分辨,。,不同末端终止,DNA,链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的,ddNTP,决定的。,第一代测序原理-Sanger测序法双脱氧链终止法（Sange,复制叉（,Replication fork,）,DNA ligase,：,DNA,连接酶；,DNA gyrase,：,DNA,旋转酶；,DnaB helicase,：解旋酶,SSB,：单链结合蛋白；,复制叉（Replication fork）DNA ligas,DNA,连接酶（,DNA ligase,）,功能：连接,DNA,链,3-OH,末端和另一,DNA,链的,5-P,末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的,DNA,链连成完整的链。,DNA,复制,DNA连接酶（DNA ligase）功能：连接DNA链3-,Sanger,测序法,Sanger测序法,第一代测序成果：人类基因组,2001,年,2,月份同时发表，从此有了人类基因组模板。,第一代测序成果：人类基因组2001年2月份同时发表，从此有了,ATCGAACTTCCATTGCACCAATATAG,GT,ACGTAA,ATCGAACTTCC TTGCACC,T,ATATAG,GTGT,ACGTAA,参考序列：,测序所得序列：,碱基缺失,碱基突变,碱基重复,特点：,测序长度,700-1000bp,；通量小，一次,96,个样本，每个样本,1,条序列,临床应用：,单基因病检测，如血友病、白化病、地中海贫血等,ATCGAACTTCCATTGCACCAATATAGGTAC,第二代测序原理,-,高通量测序,NextSeq 500,灵活通量,废液槽,缓冲液,化学试剂,Flow Cell,第二代测序原理-高通量测序NextSeq 500 灵活通,C,A,G,T,C,A,T,C,A,C,C,T,A,G,C,G,T,A,5,G,T,G,T,C,A,G,T,C,A,G,T,C,A,3,5,测序基础原理：,边合成边测序,(SBS),如何理解边合成边测序？,用不同颜色的荧光标记四种,dNTP,，在,聚合酶,作用下，按照碱基互补配对原则（,A,与,T,配对，,C,与,G,配对）进行链的延伸，每延伸一个碱基，碱基释放,荧光,。通过光学系统捕获荧光，从而获得碱基信息。,CAGTCATCACCTAGCGTA5GTGTCAGTCA,第三代基因测序原理及应用课件,MiSeq,建 库,2,HOURS,Cluster,1,HOURS,测 序,4,HOURS,信息分析,0.5,HOURS,一体化进行：,上样后，测序仪,自动化完成扩增和测序,二代,测序法,MiSeq建 库Cluster测 序信息分析一体化进行：上样,第三代基因测序原理及应用课件,第三代基因测序原理及应用课件,第三代测序原理,-,单分子测序,第三代测序方法与现在的测序技术相比之下的优点：,1,）更高的通量；,2,）更短的测序时间；,3,）更长的读取长度；,4,）更高的精确性，可以检测出极少的变异；,5,）需要很少的起始量；,6,）低成本。,第三代测序原理-单分子测序第三代测序方法与现在的测序技术相比,Helico BioScience,单分子测序技术,Helico BioScience 单分子测序技术,Pacific Bioscience SMRT,技术,Pacific Bioscience SMRT 技术,Oxford Nanopore Technologies,的纳米孔单分子测序技术,Oxford Nanopore Technologies 的,第三代测序原理,-,单分子测序,第三代测序方法与现在的测序技术相比之下的优点：,1,）更高的通量；,2,）更短的测序时间；,3,）更长的读取长度；,4,）更高的精确性，可以检测出极少的变异；,5,）需要很少的起始量；,6,）低成本。,第三代测序原理-单分子测序第三代测序方法与现在的测序技术相比,