单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,煮辞州大学,皮层神经元细胞原代培养,煮辞州大学,1,可主要内容:,4,实验原理准备工作实验步骤影响因素,可主要内容:,2,1实验原理,细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之,可分为原代培养和传代培养两种。,原代培养:将动物机体的各种组织从机体中取,出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用,EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适,的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,1实验原理,3,2,实验准备,仪器、材料与试剂,无菌操作台,培养箱,实验仪器,培养板,青霉素瓶,离心机,计数板,冰盒,滤器(200目自制),手术器械,新生鼠,材料与,试剂,DMEMF12培养基(20%血清),025%胰酶,多聚赖氨酸,碘酒,75%酒精,PBS,阿糖胞苷,2,4,2,实验准备,实验前准备工作,培养板包被,制备冰盒,培养基,阿糖,胞苷配制,=,-,0.1%多聚赖氨酸包被,2,5,实验步骤,要点,细节决定成败,细心,耐心,实验步骤,6,2,实验步骤,胰酶消化法,1准备:取名种2滑奋的培用品宽涂华台面紫绯,擦拭手及台面,2布局,点燃酒精灯,安装吸管帽;准备离心管;平皿及器,械放置妥当,2,7,2,实验步骤,布局,剥离血管及筋膜,广器减,酒精,PBS,PB,BS,断头,剪碎组织块,冰盒,取脑,分离皮层神经,清洗血液,元,2,8,实验步骤,3断头取脑:超净台内,断头取脑,置于盛有PBS的培养皿,内,洗涤3次,弃除表面残余血迹,迅速置于无,菌的生理盐水冰浴上,4剥离软脑膜:剥离大脑皮层至预冷的PBS中,用两把无齿弯,镊仔细剥离软脑膜和血丝,剥离干净后用PBs,液洗23遍,实验步骤,9,实验步骤,5剪碎,将大脑皮层转移到另一装有PBS的平皿中,用,手术剪将其剪成小块(1mm3),用PBS液洗,三次,转移至离心管中离心1000rpm5min。,6消化:加入025%胰蛋白酶,放入37培养箱消化,20min,中间翻转振荡一次。使细胞分离,实验步骤,10,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,11,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,12,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,13,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,14,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,15,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,16,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,17,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,18,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,19,大鼠皮层神经元细胞原代培养课件,20,