,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,病 毒 学,病 毒 学,1,第四章 理化因子对病毒的作用,适度的理化因子作用：有助于保持病毒的感染性,在“质”和“量”上控制理化因子：可导致病毒发生变异，获得病毒的突变体,剧烈的理化因子作用：病毒失去感染力，被灭活,不同病毒因其结构和组成不同，对理化因子的作用可呈现不同的反应（敏感或有抗性）,病毒的特征性表现，是病毒鉴定的一个重要依据,对选择有效消毒方法、病毒材料或毒种的保存、筛选疫苗、病毒提纯均有意义。,第四章 理化因子对病毒的作用适度的理化因子作用：有助于保,2,1.温度（T）,（1）病毒耐冷怕热,大多数病毒55-60几分钟到几十分钟灭活；0 下可保持稳定，特别是干冰温度和液氮温度下能长期保持感染性。,不同温度下，病毒感染的半衰期不同：,60 以秒计，37 以分计，20 以小时计，4 以天计，-70 以月计，-196 以年计,不同病毒对热的抵抗力不同，甚至有明显差别，有包膜病毒对热的抵抗力较裸露的二十面体病毒差。,1.温度（T）（1）病毒耐冷怕热,3,（2）热对病毒的作用机理,主要使病毒蛋白质，特别是病毒的表面蛋白质变性，结果导致病毒体不能吸附于细胞受体，或病毒不能脱壳，或病毒体中所携带的酶失活，从而影响核酸的正常逸出，失去感染性。,包膜在高温条件下可能发生降解。,（2）热对病毒的作用机理主要使病毒蛋白质，特别是病毒的表面蛋,4,一般来说，蛋白质比核酸容易因热变性。核酸位于病毒体内部，热的作用已被蛋白质外壳缓冲；但在70以上温度可使双链核酸发生链性分离，随后在核酸的糖-磷酸骨架的某处断裂。,轻度加热（40-50 ）：蛋白质的完整性发生破坏，丧失感染性，但常继续保持免疫原性。,更高温加热（60 以上）：蛋白质发生凝固，感染性和免疫原性均丧失。,一般来说，蛋白质比核酸容易因热变性。,5,（3）温度对病毒的灭活作用受周围环境的影响,蛋白质、Ca,2+,、Mg,2+,存在可提高某些病毒的热稳定性；它们在1M浓度的盐类溶液中，甚至50加热1h也不灭活。,蛋白酶和核酸酶存在可提高热对病毒的灭活作用,冻融，特别是反复冻融，常可使许多病毒发生较大程度的灭活。,（3）温度对病毒的灭活作用受周围环境的影响蛋白质、Ca2+、,6,（4）病毒的保存方法,快速低温冷冻,病毒悬液中+灭活的正常动物血清或其它蛋白保护剂，迅速冷冻到-70,或-196,。,含病毒的组织材料（病料）,直接低温冷冻,+50%甘油缓冲盐水，迅速冷冻到-70,或-196,。,含病毒的细菌材料+30%甘油缓冲盐水，迅速冷冻到-70,或-196,。,（4）病毒的保存方法快速低温冷冻,7,真空冷冻干燥,在真空条件下，使冰冻的病毒悬液脱水。通常是用低温脱水法，并以干燥剂或冷凝法除去冷凝器内尚未凝结的多余水汽。,常用干燥剂：P,2,O,5,、CaSO,4,、CaCl,2,、硅胶,病毒冷冻保护剂：脱脂牛乳（最常用）、灭活正常动物血清、饱和蔗糖溶液等。,真空冷冻干燥,8,（1）一般病毒耐pH以5-9为标准，5以下9以上大多迅速灭活；大多数在pH6-8保持稳定。,（2）不同种类病毒对pH变化稳定性不同（保持感染性的pH值不同）病毒鉴定指标,有的病毒耐酸，是否耐酸以pH3为标准。,（3）应用,实践中，用酸、碱溶液作消毒剂。,病毒保存中，以中性或稍偏碱为宜。,2.pH,（1）一般病毒耐pH以5-9为标准，5以下9以上大多迅速灭活,9,3.辐射,（1）种类 电离辐射 X射线,射线 很易灭活病毒,非电离辐射,3.辐射（1）种类 电离辐射 X射线,10,（2）机理,电离辐射,病毒核酸链共价键发生断裂,单链核酸对电离辐射的作用更为敏感,对病毒蛋白质也有破坏作用,引起液体介质电离所产生的H,+,、OH,-,和过氧化物等，起间接灭活作用。,紫外线,使核酸发生多种结构形式的变化，其中以形成嘧啶二聚体为主。,（2）机理,11,4.干燥,干燥效果与使用方法和病毒种类有关系。,有包膜病毒对干燥抵抗力更弱。,4.干燥 干燥效果与使用方法和病毒种类有关系。,12,5.染料的光动力作用,（1）概念：某些病毒在可见光存在的条件下，经中性红、美蓝、台酚蓝和甲苯胺蓝等染料处理就可能迅速失去感染性。,（2）机理,由于这些染料易于渗透病毒体的蛋白质外壳而与核酸结合，造成核酸结构的破坏，丧失感染性；而对蛋白质无严重损害，一般能保持免疫原性。,必须在有氧的条件下进行,应置于暗处培养。,5.染料的光动力作用（1）概念：某些病毒在可见光存在的条件,13,6.化学物质,（1）脂溶剂：乙醚、氯仿和丙酮以及其它可以脱脂的化学剂,有包膜病毒因包膜上含较多脂类物质，表现对脂溶剂敏感，但对不同脂溶剂敏感程度不同,无包膜病毒（包括少数含脂质成分的无包膜病毒）对脂溶剂不敏感,乙醚灭活试验鉴别病毒有无包膜,6.化学物质（1）脂溶剂：乙醚、氯仿和丙酮以及其它可以脱脂的,14,（2）蛋白变性剂,种类：石炭酸、阴离子去污剂、非离子去污剂及尿素、胍等蛋白变性剂,机理：,SDS：解离壳体蛋白，释放出核酸，并使病毒蛋白质降解为多肽，还能溶解包膜。,吐温、脱氧胆酸钠：破坏包膜结构，保存蛋白结构和抗原性,高浓度的尿素和盐酸胍：破坏氢键和氨基酸残基的非极性侧链之间的疏水键，使病毒蛋白质变性，甚至降解为多肽。,（2）蛋白变性剂,15,（3）酶,不同的酶作用于病毒的方式不同,蛋白酶可降解包膜的糖蛋白突起及壳体蛋白,磷脂酶能降解包膜中的磷脂而破坏病毒的包膜结构,如壳体或包膜受到损伤，核酸易被核酸酶所降解,不同病毒对酶的敏感性亦有区别,大多数病毒因有壳体或/和包膜的保护，使核酸可不被核酸酶降解,病毒感染方式与病毒对酶的敏感性存在一定的联系。,（3）酶,16,（4）甲醛,机理：对核酸和蛋白质都有破坏，主要是使核酸灭活,能与A、G、C等含有胺基的碱基结合，使核酸变性。,较高浓度的甲醛对病毒体进行较长时间的处理，可与蛋白质的胺基结合，导致蛋白质硬变，同时也防碍了核酸的逸出。,应用：制备灭活疫苗,（4）甲醛,17,（5）羟胺、-丙内酯、乙基乙烯亚胺和乙酰乙烯亚胺,其高稀释液可使病毒核酸的嘌呤和嘧啶碱基发生改变，从而破坏核酸，但一般不会损伤蛋白质。,用于制备灭活疫苗,不同病毒对这些化学物质的敏感性也不同,（5）羟胺、-丙内酯、乙基乙烯亚胺和乙酰乙烯亚胺,18,（6）氧化乙烯（气体消毒剂）,一般 有包膜病毒对消毒剂抵抗力弱,无包膜病毒对消毒剂抵抗力更强,应用,10%氧化乙烯：消毒不耐热的橡胶和塑料制品,3-5%氧化乙烯：消毒实验室，处理一夜或一昼夜,（6）氧化乙烯（气体消毒剂）,19,（7）抗菌素,通常各种抗菌素和抗菌药物对病毒无作用，但有一些能不同程度地抑制病毒复制：利福霉素、放射菌素b,中草药对病毒有不同程度地抑制作用,（8）甘油,病毒保护剂；但少数病毒（如牛瘟病毒）不能在甘油盐水中长期存活。,（7）抗菌素,20,第五章 病毒的血清学性质,完整病毒体及其各种蛋白质组分,复制过程中产生的非结构蛋白,具有免疫原性和免疫,反应性的有效抗原,第五章 病毒的血清学性质完整病毒体及其各种蛋白质组分具有免,21,1.病毒特异性抗体的类型,（1）不同类型病毒诱生不同种类抗体,用不能在宿主体内繁殖的病毒体抗病毒体表面抗原的抗体,用能在宿主体内繁殖的病毒体抗病毒表面抗原抗体、抗内部抗原抗体、抗非病毒体抗原抗体,用纯化的病毒体内部蛋白组分抗这些内部抗原的抗体,1.病毒特异性抗体的类型（1）不同类型病毒诱生不同种类抗体,22,（2）中和作用和中和抗体,中和作用：有的特异性抗体与病毒体作用，能够抑制病毒的繁殖，使其失去感染性，这一现象称做中和作用。,中和抗体：能够中和病毒感染性的特异性抗体,非中和抗体：指那些不能引起中和作用的抗体,（2）中和作用和中和抗体中和作用：有的特异性抗体与病毒体作用,23,中和作用机理,中和抗体与病毒表面的抗体结合部位（或抗原决定簇）结合，可以抑制病毒的吸附、侵入、脱壳或转录等某一感染步骤，从而消除病毒的感染性。,不同病毒的抗体的中和机理可能不同，同一病毒的不同类型抗体也可有不同的中和机理。,抗体间可呈现协同作用，增强中和效应，并且补体亦能增进特异性抗体所致的病毒中和作用。但中和抗体有时可使病毒的感染持续或加重。,中和作用机理中和抗体与病毒表面的抗体结合部位（或抗原决定簇）,24,2.病毒的抗原分类,病毒体蛋白质的抗原决定簇具有特殊的一级结构和立体构型，从而决定了病毒体的抗原特异性。,2.病毒的抗原分类 病毒体蛋白质的抗原决定簇,25,