单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,0,Lynch,综合征的免疫组化筛查,Lynch综合征的免疫组化筛查,1,Lynch,综合征,常染色体显性遗传病,致病基因位于常染色体上，且单个等位基因突变即可致病,错配修复基因（,MLH1,，,MSH2,，,MSH6,，,PMS2,，,EPCAM,）发生胚系突变,免疫组化检测显示,MMR,蛋白缺失,占全部,CRC,的,3-5%,Lynch综合征常染色体显性遗传病,2,常规分子筛查方法的选择,90%,的,LS,肿瘤表现为,MSI-H,或,dMMR,10-15%,的散发性,CRC,表现为,MSI-H,或,dMMR,由于,MLH1,基因启动子的异常甲基化,单纯分子筛查不能确诊,LS,IHC,：正常情况下,MMR,蛋白均正常表达,任意一蛋白表达缺失相关基因的突变检测,MLH1,缺失排除,MLH1,启动子区高度甲基化,MSI,：,MSI-H,指,5,个微卫星标志物中存在,2,个的改变,IHC/MSI,假阴性率均约,5%-10%,常规分子筛查方法,IHC,或,MSI,均可,IHC,成本效益更优,常规分子筛查方法的选择90%的LS 肿瘤表现为MSI-H或d,3,Lynch,综合征的,IHC,特征,为何多数情况下,MLH1,和,PMS2,，,MSH2,和,MSH6,是成对,缺失,？,MLH1,和,PMS2,构成异二聚体，,dPMS2,通常由于,MLH1,突变所致,单纯,PMS2,或,MSH6,缺失,除了,PMS2,之外，,MLH1,蛋白还有其他形成二聚体的成员，因此，,PMS2,基因胚系突变不一定导致,MLH1,表达缺失。,Lynch综合征的IHC特征为何多数情况下MLH1和PMS2,4,MLH1&PMS2,表达缺失,大概占,15%,80%,是由于,MLH1,过度甲基化所致,其中,20%,可能是,LS,BRAF,突变检测,MLH1,MSH2,MSH6,PMS2,MLH1&PMS2 表达缺失大概占15%MLH1MSH2,5,MSH2&MSH6,表达缺失,大概约占,3%,大部分是由于,MSH2,和,MSH6,基因突变,经常是,LS,患者,MLH1,PMS2,MSH6,MSH2,MSH2&MSH6 表达缺失大概约占3%MLH1PMS2,6,IHC,结果解读,:MLH1,和,PMS2,IHC结果解读:MLH1和PMS2,7,IHC,结果解读,:MSH2,和,MSH6,IHC结果解读:MSH2和MSH6,8,IHC,结果解读,IHC结果解读,9,Lynch,综合征的,CRC,形态学特征,Lynch综合征的CRC形态学特征,10,MSI-H,结直肠癌组织学特征,组织学低分化,肿瘤异质性大,MSI-H结直肠癌组织学特征组织学低分化,11,形态上呈现髓样分化,低分化结直肠腺癌亚型,肿瘤细胞片状分布,核空泡状、核仁明显,淋巴细胞浸润肿瘤细胞,绝大部分,CRC,髓样亚型呈现,MSI-H,且预后比其他低分化癌好,形态上呈现髓样分化低分化结直肠腺癌亚型绝大部分CRC髓样亚型,12,重视,Lynch-like,形态特征,重视Lynch-like形态特征,13,分子筛查需要注意的问题,分子筛查策略适用于,CRC,和子宫内膜癌,其他,LS,肿瘤分子筛查有效性的数据十分有限,BRAF,突变排除,MLH1,的过度甲基化对于,CRC,以外的肿瘤并不适用,直肠癌组织中,MSH6,缺失可能是治疗后改变,IHC,异常和,/,或,MSI-H,但相关基因检测未发现胚系突变者仍有可能是,Lynch,综合征患者,体细胞,MMR,基因检测来评估体细胞突变有助于解释,Lynch-like,综合征,分子筛查需要注意的问题分子筛查策略适用于CRC和子宫内膜癌,14,免疫组化筛查相关问题,免疫组化检测技术标准化（自动,vs,手动）,标本及时标准固定、避免修复过度,IHC,检测蜡块的选择（有正常对照）,重视,lynch-like,形态学特征,免疫组化结果判读（阴性与阳性）,对于,IHC,检测结果不理想（重复或分子检测）,免疫组化筛查相关问题免疫组化检测技术标准化（自动vs手动）,15,免疫组化需重新检测各种情况,假阴性,-,阳性对照不表达,阳性对照及肿瘤细胞表达太弱,肿瘤细胞表达异质大,免疫组化需重新检测各种情况假阴性-阳性对照不表达,16,假阳性,-,肿瘤细胞阳性、正常细胞阴性,肿瘤细胞定位不准,阳性细胞定位不清晰,非特异性强染色,免疫组化需重新检测各种情况,假阳性-肿瘤细胞阳性、正常细胞阴性免疫组化需重新检测各种情况,17,肿瘤标本固定不及时,标本固定不够充分,MMR,蛋白抗体不特异,免疫组化检测前后不符的原因分析,抗原修复过度,抗体孵育时间过长,DAB,染色时间过长,肿瘤标本固定不及时免疫组化检测前后不符的原因分析抗原修复过度,18,Thank you!,Thank you!,19,Lynch,综合征,常染色体显性遗传病,致病基因位于常染色体上，且单个等位基因突变即可致病,错配修复基因（,MLH1,，,MSH2,，,MSH6,，,PMS2,，,EPCAM,）发生胚系突变,免疫组化检测显示,MMR,蛋白缺失,占全部,CRC,的,3-5%,Lynch综合征常染色体显性遗传病,20,IHC,结果解读,:MLH1,和,PMS2,IHC结果解读:MLH1和PMS2,21,IHC,结果解读,IHC结果解读,22,