,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,药物分析实验,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,实验八 维生素B,1,片含量测定的方法验证,设计性实验,实验原理,维生素B1又称盐酸硫胺 thiamine hydrochloride，化学名称为氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐,性 质,溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶,硫色素反响：,紫外吸收特性：Amax=246nm,与生物碱沉淀试剂反响,氯化物特性：,特征性鉴别,含量测定,氯化物检查,原理,特征性鉴别硫色素反响,维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。见刘文英主编?药物分析?第六版，P258,含量测定,维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，,实验方法,鉴别反响,取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，那么荧光复现。,含量测定,1.精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg，标示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml量瓶中 加盐酸溶液91000约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 枯燥滤纸过滤精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中，盐酸溶液91000定容至刻度，摇匀 得到供示品溶液。,含量测定,2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml量瓶中，盐酸溶液91000定容至刻度，摇匀 得到对照品溶液。,3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分别测定吸光度，计算即得。,实验内容与要求,鉴别试验,吸收波长选择,精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD%,重复性试验：引用其他组同学数据称样量，吸光度计算标示量%，计算RSD%,稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD%,加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验,含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。,如何引用？,线性关系和范围,分析方法的验证,1,精密度试验,2,重现性试验,3,加样回收试验,4,稳定性试验,5,线性与范围,精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量瓶中 加盐酸溶液91000少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液91000至刻度，摇匀将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量并用C做A的回归曲线。,线性关系,序号,1,2,3,4,5,浓度,（mg/ml）,测定值,稳定性试验,精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量瓶中 加盐酸溶液91000少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.,RSD 2.0%，那么需要重新选取时间点进行计算，直到RSD 2.0%，否那么要尽快测定,精密度试验,目的,检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度,要求,用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，,浓度与信号值要在线性范围内,RSD 2.0%,仪器分析,同批、同法,序号,时间,(min),信号值,平均,信号值,RSD,（%）,RSD,（%）,1,2,3,4,5,6,7,稳定性试验,重现性试验,目的,考察样品溶液制备方法的可靠程度,要求,同批样品按相同方法制备样品溶液，至少,6,份,浓度与信号值均要在线性范围内,RSD 2.0%,仪器分析,重现性试验(例如),试验,序号,称样量,（g）,测定值,（mg）,含量,（mg/g）,平均含量（mg/g）,RSD,（%）,1,0.1666,22.04,132.29,134.53,0.3%,2.0%,2,0.1667,24.82,148.89,3,0.1669,21.90,131.22,4,0.1742,23.54,135.13,5,0.1667,20.86,125.13,6,精密度试验例如,实验,序号,信号值,平均值,RSD,1,0.512,0.510,0.2%,(2.0%),2,0.508,3,0.511,4,0.509,5,0.510,6,0.509,加样回收率试验,目的,考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,要求,设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率,RSD 2.0%,加样回收试验,序号,称样量,（g）,待测组分含量,（mg）,对照品加入量,（mg）,测得量（mg）,回收率（%）,平均加样回收率（%）,RSD,（%）,1,0.16,65.28,2,0.2500,15.0,27.2,100.1,3,0.2512,4,0.2509,53.04,5,0.2500,15.0,29.8,98.6,6,0.2500,7,0.2504,42.84,8,0.2500,15.0,33.1,100.0,9,0.2510,取含量测定时一半的称样量，,0.5g/2,98102%,撰写方法学验证论文,线性与范围:设计对照品溶液的浓度,精密度试验,稳定性试验 根据实验测定数值进行计算,重复性试验,加样回收试验:,设计称样量、对照品参加量,含量测定：根据实验测定数值进行计算,