单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,山西家族性乙肝,HLA-DRB1,和,HBV,基因型与临床关系的研究,2,目前，全球约有,4,亿人感染乙肝病毒,(HBV),，我国占,1/3,，达,1.2,亿，其中,70,80,以上具有家庭聚集性，包括家庭内水平传播和垂直感染。临床观察到生活在同一家庭中有血缘关系的家庭成员其感染,HBV,与否以及感染,HBV,后的转归也有所不同。,第一部分 研究背景和意义,宿主因素,病毒因素,HBV,感染的转归,环境因素,4,一、宿主因素,研究发现人类白细胞抗原（,human leukocyte antigen,HLA,）是目前所知的最具有高度多态性的、与疾病有明确关系的遗传系统。,HLA-,、,和,类基因。,研究的报道,HLA-,类基因（,DRB1,）与,HBV,感染感染结局有关，且不同地区、不同种族,HLA-,（,DRB1,）基因型报道不同。,5,山西地区,张德梅等报道了该区汉族,正常人群,HLA-DRB1,位点的等位基因多态性分布以,HLA-DRB1*15,、,HLA-DRB1*09,、,HLA-DRB1*12,、,HLA-DRB1*04,、,HLA-DRB1*07,常见，而乙肝人群的,HLA-,DRB1,基因多态性分布以及与,HBV,易感性和抗性如何？尚无研究。,6,乙肝家庭成员中正常人与,HBV,感染者其,HLA-,DRB1,基因型分布是否有差异？家族性乙肝患者其抗病毒治疗的疗效是否与,HLA-,DRB1,基因型有关？目前尚未见有关报道。,7,二、病毒因素,目前可将,HBV,分为,A,H,共,8,个基因型。,认为,HBV,基因型与临床疾病谱、疾病的进展以及抗,HBV,治疗反应等方面可能相关：在,B,、,C,型为主的地区，,C,型与严重肝病相关。,山西省乙型肝炎的基因型以及占绝大多数乙肝比例的家族性乙肝基因型的分布及其与临床类型关系如何？尚不清楚。,8,三、抗病毒治疗,抗病毒是慢乙肝治疗的关键，药物有干扰素和核苷类似物。有学者报道,a,干扰素治疗慢乙肝无应答与,HLA-DRB1*04,呈正相关，与,HLA-DRB1*0301,，,HLA-DRB1*0505,呈负相关。还有研究发现，,HLA-A2,，,HLA-CW1,，,HLA-DRB14,，,HLA-DRB4,与慢性乙型肝炎患者服用拉米呋啶疗效可能有关联，同时临床观察发现，同一家族中的不同患者使用相同的抗病毒药物后，其临床疗效也有不同，我们推测抗病毒疗效可能也受免疫因素的影响。,本研究以,具有共同遗传背景的家族性乙肝人群,为研究对象,，,首先进行临床流行病学调查，继之进行了,HLA-DRB1,基因多态性与山西地区家族性乙肝的预后和抗病毒疗效的相关性研究，从,宿主方面,阐述了,HLA-DRB1,基因位点分布与家族性乙肝的相关性；然后进行了,HBV,基因型与家族性乙型肝炎相关性以及家族性乙型肝炎抗病毒近期疗效关系的研究，从,病毒方面,阐述了,HBV,基因型与家族性乙型肝炎相关性，为家族性乙型肝炎预后以及抗病毒的疗效的判断提供分子生物学水平的理论依据。,10,家,族,性,乙,肝,人,群,HLA-DRB1,多态性,HBV,基因型,分布情况,与临床转归关系,与抗病毒疗效的关系,临床流行病学调查,第二部分 研究内容,11,诊断标准,病毒性肝炎：,病毒性肝炎防治方案,家族性乙肝：,指,HBV,感染者的母亲或（和）父亲,HBV,标志物阳性以及同胞中至少有一人为,HBV,标志物阳性者。,排除标准：,家族性乙肝家庭中的所有成员均排除经输血或血制品途径引起的,HBV,感染，排除合并有其它肝炎病毒感染。,12,抗病毒疗效判断标准,:,完全应答、,部分应答,有效,无应答,无效,13,关键技术,HLA-DRB1,基因多态性检测,聚合酶链反应,-,序列特异性寡核苷酸探针技术,（,PCR-SSO,）,HBV,基因分型,聚合酶链反应,-,限制片段长度多态性,（,PCR-RFLP,）,14,聚合酶链反应,-,序列特异性寡核苷酸探针技术（,PCR-SSO,）,与流式细胞技术,静脉抗凝血,提取基因组,DNA,PCR,扩增,与包被有不同系列探针的磁珠杂交,ACCUMatch,软件分析,流式仪检测,SAPE,标记,15,包被探针的磁珠,每个样本,DNA,与磁珠上探针杂交情况不同，可以有不同的荧光信号值，当磁珠通过,Luminex200,流式仪时，磁珠表面上的荧光特征被扫描、识别，测定磁珠的荧光信号，用相应的软件进行分析，得出,HLA,分型结果。,聚合酶链反应,-,限制片段长度多态性（,PCR-RFLP,）,第一次扩增,第二次扩增,HBV DNA,提取,HBV,前,S,区,DNA PCR,扩增,酶切,PCR,扩增,HBV,前,S,区,DNA PCR,扩增,紫外灯下观察扩增产物电泳图,标本血清,17,筛选符合家族性乙肝的家庭,77,个进行流行病学，其中母亲单方,HBsAg,阳性的家庭,55,个，父亲单方,HBsAg,阳性的家庭,22,个；检测的子女数共计,159,人，男性,106,人，女性,53,人。年龄最小者,3,岁，最大者,62,岁，平均年龄,31,岁。,一、山西地区家族性乙肝临床流行病学调查,第三部分 研究结果,18,子女,HBsAg,检测结果,父母,HBsAg,检测结果,地域,性别,父,(-),母,(+),父,(+),母,(-),农村,城市,男,女,阳性,91,43,102,32,92,42,阴性,11,14,7,18,14,11,P0.05,P0.05,表,1,父母不同,HBsAg,携带情况、不同地域及不同性别的子女,HBsAg,检测结果,2,=5.24,2,=22.63,2,=1.52,临床转归,父母,HBsAg,检测结果,合计,构成比（,%,）,父,(-),母,(+),父,(+),母,(-),正常者,11,14,25,15.72,HBV,携带者,41,20,61,38.36,慢乙肝,39,19,58,36.48,肝硬化,11,4,15,9.44,合 计,102,57,159,100.00,P0.05,表,2,父亲,HBsAg,阳性与母亲,HBsAg,阳性其子女不同转归的比较,2,=5.40,，,20,二、,HLA-DRB1,基因多态性与家族性乙肝预后及阿德福韦酯抗乙肝病毒近期疗效相关性研究,研究对象,分组：,健康对照（,CON,）组,41,例,慢性无症状携带（,ASC,）组,80,例,慢性乙型肝炎（,CHB,）组,107,例,肝硬化（,LC,）组,65,例,肝癌（,HCC,）组,2,例（略去）,表,1,ASC,、,CHB,、,LC,和,CON,组,HLA-DRB1,基因频率比较,HLA-,DRB1,CON,组（,41,例）,ASC,组（,80,例）,CHB,组（,107,例）,LC,组（,65,例）,PN,AF,（,%,）,PN,AF,（,%,）,PN,AF,（,%,）,PN,AF,（,%,）,01,03,04,07,08,09,10,11,12,13,14,15,16,1,3,13,4,1,13,3,10,7,3,8,16,0,1.2,3.7,15.9,4.9,1.2,15.9,3.7,12.2,8.5,3.7,9.8,19.5,0,4,4,11,17,5,28,6,13,21,0,16,33,2,2.5,2.5,6.9,10.6,3.1,17.5,3.8,8.1,13.1,0,10,20.6,1.3,3,6,17,28,12,38,7,18,33,0,18,31,3,1.4,2.8,7.9,13.1,5.6,17.8,3.3,8.4,15.4,0,8.4,14.5,1.4,5,4,10,20,8,21,3,9,16,2,15,15,2,3.8,3.1,7.7,15.4,6.2,16.2,2.3,6.9,12.3,1.5,11.5,11.5,1.5,注：、,、均代表其,p,0.05,HLA-DRB1*07,等位基因频率在,CHB,组及,LC,组,(13.1%,15.4%),明显高于正常对照组（,4.9%,），而,ASC,组、,CHB,组及,LC,组之间两两比较无统计学差异,22,表,2 ASC,、,CHB,及,LC,组间年龄比较,组别,例数,(n),年龄,F,值,P,值,ASC,CHB,LC,80,107,65,31.511.27,35.213.84,47.49.90,33.38,0.01,进一步进行两两比较，,ASC,组及,CHB,组与,LC,组间差异有统计学意义。（,t,值分别为,-8.931,和,-6.208,，,P,0.01,）,23,HLA-,DRB1,ADV,有效组（,30,）,ADV,无效组（,26,）,2,P,OR,PN,AF,（,%,）,PN,AF,（,%,）,03,04,07,08,09,10,11,12,13,14,15,5,11,1,3,6,2,6,13,2,6,5,8.3,18.3,1.7,5,10,3.3,10,21.7,3.3,10,8.3,2,2,8,4,9,2,2,9,0,5,9,3.9,3.9,15.4,7.7,17.3,3.9,3.9,17.3,0,9.6,17.3,0.345,5.699,5.359,0.038,1.283,0,0.798,0.335,0.005,2.051,0.557,0.017,0.021,0.845,0.257,1.000,0.372,0.563,0.498,0.946,0.152,2.273,5.612,10.727,0.632,0.531,0.862,2.778,1.322,0.044,0.434,表,3 HLA-DRB1,等位基因频率与阿德福韦酯,疗效相关性分析,附：资料完整的,56,例患者，基因型为,C,阿德福韦酯治疗半年,24,三、,HBV,基因型与家族性乙型肝炎相关性及抗病毒近期疗效研究,25,136,例家族性乙型肝炎感染者进行,HBV,基因型检测，其中,C,型为,122,例，,B,型为,10,例，,B+C,混合型为,2,例,另有,2,例未检测出基因型。,基因型的分布情况,26,对其中,36,对父或母与子、女基因型进行比较，有,34,对皆为,C,型，一对父为,B+C,型，子为,B,型，一对母为,B,型，子为,B+C,型。,家族中连续二代基因型的变化,表,3,HBV,基因型在,ASC,、,CHB,、,LC,、,HCC,中的分布,例（,%,）,组别,例数,B,型,C,型,B+C,未确定型,无症状携带者（,ASC,）,21,2,（,9.5,）,14,（,66.7,）,5,（,23.8,）,0,（,0,）,慢性乙型肝炎（,CHB,）,98,8,（,8.6,）,82,（,88.2,）,*,2,（,2.1,）,1,（,1.1,）,肝硬化（,LC,）,25,0,（,0,）,24,（,96.0,）,0,（,0,）,1,（,4.0,）,肝癌（,HCC,）,4,0,（,0,）,4,（,100,）,0,（,0,）,0,（,0,）,注：基因型,C,中,ASC,分别与,CHB,、,LC,、,HCC,比较，,*,x,2,=15.054,；,P,0.05,，,x,2,=6.835,；,P,0.05,；,x,2,=1.852,，,P,0.05,；,CHB,、,LC,、,HCC,三组比较,x,2,=0.208,，,P,0.05,。,HBV,基因型与临床转归,28,将研究对象分为四个治疗组：,a-2b,干扰素（安福隆），,3MU,，,qod.im,；,阿德福韦酯（,ADV,代丁）,10mg,qd.po,；,恩替卡韦（,ETV,博路定），,0.5mg,qd.po,；,拉米夫定（,LAM,，贺普丁），,100mg,qd.po.,（,LAM,组人少，无法做统计分析，去除）。,疗程为,6,个月。分别于治疗前、治疗六个月检测乙肝五项、,HBVDNA,及肝功能。,29,表,4,三种抗病毒药物在基因型为,C,的患者中疗效比较,药物,例数,有效,无效,有效率,(%),IFN-a2b,2