单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,YANGTZE NORMAL UNIVERSITY,YANGTZE NORMAL UNIVERSITY,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,主讲：,化学化工学院,仪器分析实验,【实验目的】,1,了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理。,2,掌握荧光分析方法。,荧光法测定维生素,B,2,药物中核黄素含量,【实验原理】,维生素B2 在230490 nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526 nm左右的绿色荧光，在 pH为 67范围内荧光强度最大。基于上述性质建立核黄素的荧光分析法，选择适宜的激发波长、荧光波长和实验条件，即可进行定量测定。,在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。,I,f,=c,【实验步骤】,1.实验条件的选择,1激发光波长和荧光波长的选择,25 mL 比色管 +1.00 mL 100 gmL1 核黄素标准溶液 摇匀,固定荧光波长526 nm扫描激发波长220500 nm。,用,5%HAc,溶液稀至刻度,转移局部于,比色皿中,固定激发波长为442 nm 扫描荧光波长400700 nm 范围，确定最大荧光强度。,反复：固定激发扫发射，固定发射扫激发，确定最正确激发和发射波长。,2酸度的选择 25 mL 比色管,2标准曲线的绘制25 mL 比色管,3样品测定,1 药片,50 mL烧杯+1 片维生素B2+约 12 mL 5醋酸溶液 取下冷却+5%醋酸溶液稀至刻度，摇匀。,离心管+数mL1中的溶液。,用玻棒捣碎药片,水浴上加热，使样品完全溶解,转入,50 mL,容量瓶,离心别离,25 mL 比色管+1.00 mL 离心液用移液管准确移取+5醋酸溶液稀至刻度，摇匀 测荧光强度。,2注射液,取VB2 注射液1支，将内容物置于50 mL 容量瓶中+5%醋酸溶液稀至刻度，摇匀，即为分析液已配好。,25 mL 比色管+1.00 mL VB2 分析液用移液管准确移取+5醋酸溶液稀至刻度，摇匀。测荧光强度。,在标准曲线上查出核黄素的浓度并根据样品取样量和稀释倍数，计算出维生素B2中核黄素的含量mg片1或mg支1。,【本卷须知】,维生素,B,2,水溶液遇光易变质，标准溶液应新鲜配制，维生素,B,2,的碱性水溶液亦易变质。,【思考题】,1试述荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计在结构上有哪些不同点？,2在选择最正确激发光波长和荧光波长时，为何需要反复测量激发光谱和发射光谱？,维生素,C,的紫外光谱图,(,max,=264nm),维,C,：,100g/mL,（,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL,）,标准曲线,实验报告格式,含量为标示量的,90.0%,110.0%,范围均属允许范围。,