单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,主要内容,研究背景,研究目的,研究内容及结果分析,小结与讨论,展望,致谢,研究背景,化石能源的储量有限，且其大量消耗会带来严重的环境问题,，,生物能源以其原料多样、可再生性和对环境友好的特点被世界各国重视和开发利用。,新型的能源作物。,的一大障碍。,方法之一。,研究背景,木质素代谢及调控的相关研究,到目前，已经分离鉴定出一系列参与到木质素代谢调控中的转录因子，例如拟南芥，烟草，玉米，水稻，杨树等中的,NST,、,MYB,、,MYC,、,SND,、,VND,、,LIM,等，,）。,木质素的合成涉及复杂的网络,(,Naoumkina,Zhao,et al,.2010,),。通过转录因子调控木质素特异合成途径中酶的活性，进而调控木质素的合成，可以更好的实现对木质素的控制。这是因为未直接改变关键酶，对其涉及的其他代谢通路的影响可能会相应减少。,转录因子,1,研究背景,LIM,转录因子,结构特征：,LIM,转录因子在结构上都含有一个及以上,LIM,结构域（,LIM domain,），为高度保守的锌指结构域，保守氨基酸序列为,CX,2,CX,17 19,HX,2,CX,2,CX,16 20,CX,2,C/H/D,。该结构域存在于细胞核和细胞质中，也可以在两者之间穿梭往来。,功能：,在脊椎动物中属于,CRPs,亚家族，主要参与：,细胞分化；细胞骨架的构建和转录调控；,在植物中主要分为两大类：,在花粉中特异性表达的,PLIM1,和,PLIM2,；,在植物体内广泛分布的,WLIM1,和,WLIM2,。,研究背景,前期工作,查找到与,同源性最高,，,克隆到,cDNA,全长。,在多个,bmr,突变体中上调表达。,构建过表达载体并浸染拟南芥,（硕士论文，,2012,）,研究目的,研究内容及结果分析,聚类分析,研究内容及结果分析,亚细胞定位,pBI221GFP,载体示意图,载体构建过程,研究内容及结果分析,亚细胞定位,洋葱表皮瞬时表达分析,研究内容及结果分析,亚细胞定位,拟南芥原生质体瞬时表达分析,研究内容及结果分析,体外转录激活实验,pGBKT7,载体图,酵母表达载体,构建,研究内容及结果分析,体外转录激活实验,SD-Trp,：,SD-Trp-His-Ade,：,酵母在单缺、,三缺培养基上生长情况,研究内容及结果分析,过表达拟南芥纯系的筛选,研究内容及结果分析,过表达拟南芥中表达量分析,研究内容及结果分析,过表达拟南芥木质素含量测定及,Wiesner,染色,*,*,Lignin content(ODgDW),拟南芥过表达株系同野生型木质素含量测定,木质素染色分析：,(A),放大倍数,100,(B),放大倍数,200,研究内容及结果分析,过表达拟南芥株系中木质素代谢途径,Marker,基因表达量分析,研究内容及结果分析,过表达拟南芥株系中木质素代谢途径转录因子表达量分析,小结与讨论,的报告基因转录激活活性,；,表明该基因确实对木质素的合成有影响，其具体的作用机制还需进一步探究,。,的拟南芥过表达虽然木质素合成都受到抑制，但其调控的基因却有差异，,展望,；,；,；,转录因子,2,研究背景,结构特征：,功能：,研究背景,基因背景,在,SSH,文库与基因芯片结果中出现六次，且全部都表现为上调表达,，暗示该基因可能参与木质素的调控。,。,（博士论文，,2010,）,基因在多个,bmr,突变体中表达上调。,研究目的,研究内容及结果分析,过表达拟南芥中表达受抑制基因启动子区分析,表达受抑制各基因启动子区作用元件分析,研究内容及结果分析,重组蛋白的表达与纯化,原核表达载体,PET-32a,载体图,小结与展望,；,；,。,致谢,敬请各位老师,批评指正！,