Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,医学微生物学,（,细菌感染的实验室诊断及消毒灭菌,）,严杰，教授医学博士,Department of Medical Microbiology and Parasitology,Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou,P.R.China,医学微生物学（细菌感染的实验室诊断及消毒灭菌）严杰，教授,标本的采集与送检：,（,1,）采集标本应注意,无菌操作,，尽量避免杂菌污染。,（,2,）根据患者病程、细菌在体内分布及从人体排出途径的不同，采集相应的标本。一般情况下，应在病变最明显部位采集标本。,（,3,）使用抗生素之前采集标本，否则应在分离培养时加入药物拮抗剂。采集标本时不可用消毒剂，必要时可用生理盐水冲洗，擦干后取材。,（,4,）,标本必须新鲜，采集后及早送检。在送检过程中，除少数不耐寒的脑膜炎球菌等细菌需保温外，多数菌的标本均需冷藏送运。,（,5,）检测特异性抗体时尽量采取急性期与恢复期,双份血清,。第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后,2,3,周采取。血清标本放,4,或,-20,保存，试验前血清标本,56,处理,30,分钟以灭活补体。,细菌感染的实验室诊断,标本的采集与送检：细菌感染的实验室诊断,标本染料、荧光染色后,直接显微镜检查,。,细菌的分离培养与鉴定：,菌落,(colony),：,采用分离划线接种法将细菌临床标本接种于固体培养基上，经过培养后出现肉眼可见、单个细菌分裂繁殖形成的细菌集落,(,纯种细菌,),。,不同细菌大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐或不整齐、溶血情况等均可能有所不同，,有助于鉴定细菌,。,染色镜检、,生化试验、血清学试验,(,已知抗体测抗原,),药物敏感试验：,选择敏感抗生素。,细菌标本常规病原学检查,标本染料、荧光染色后直接显微镜检查。细菌标本常规病原学检查,多聚酶链反应,(polymerase chain reaction,，,PCR),：提取细菌临床标本总,DNA,或,RNA,，采用,16 S RNA,编码基因或其他靶基因特异性引物对进行,PCR,或,RT-PCR,扩增，反应产物用溴乙锭染色的琼脂糖凝胶电泳观察，目前多采用封闭式实时荧光定量,PCR,或,RT-PCR,检测。,PCR,优点与缺点：,优点是快速、敏感、特异，缺点是不能获得活菌。,细菌标本分子生物学检查：,PCR/RT-PCR,多聚酶链反应(polymerase chain react,血清学检查,(serological examination),：,病原菌侵入人体可刺激机体免疫系统产生特异性血清抗体，抗体水平可随细菌感染过程逐渐升高价升高。用已知的抗原检测病人体液（主要为血清）中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某些感染性疾病的诊断或辅助诊断。,多数血清学诊断通常采取患者双份血清，一份在疾病的急性期，另一份在恢复期（一般为,2,6,周后），当第二份抗体效价较第一份,升高,4,倍及以上,才有诊断价值。,单份血清,检查结果根据该病,效价判断标准,进行判定。,IgM,出现早、消失快，可用于血清学早期诊断。,方法：,ELISA,、直接或间接凝集试验、中和试验等。,血清学检查或诊断,血清学检查(serological examination,人工主动免疫：,接种疫苗，是预防传染病常用方法，免疫力出现慢但维持时间长,。,疫苗种类：,目前使用的有全菌死疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、类毒素疫苗。,人工被动免疫：,主要是抗毒素,(,外毒素中和抗体,),。免疫力出现快但维持时间短。抗毒素是动物血清，使用前做皮试防止发生过敏反应。,抗生素治疗：,青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类。,细菌对抗生素可产生耐药性，临床使用抗生素时应遵守如下原则：,选择敏感抗生素；,剂量合适；,长期使用时交替用药；,联合用药。,细菌感染的防治原则,人工主动免疫：接种疫苗，是预防传染病常用方法，免疫力出现慢但,灭菌,(sterilization),：杀灭所有微生物的方法，包括病原微生物、非病原微生物及芽胞。,消毒,(disinfection),：杀灭病原微生物的方法，但不一定能杀死非病原微生物，一般不能杀灭芽胞。消毒剂。,抑菌,(bacteriostasis),：抑制体内或体外细菌生长繁殖的方法。如抗生素。,防腐,(antisepsis),：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。防腐剂。,无菌,(asepsis),：不存在活的微生物。,无菌操作：,防止微生物进入人体或物品的操作技术。,消毒与灭菌,灭菌(sterilization)：杀灭所有微生物的方法，,干烤,：用干烤箱,160,加热,2 h,可达到灭菌效果，适用于耐高温的玻璃器皿等物品。,高压蒸汽灭菌法：,使用高压蒸汽灭菌器,121,加热,15,20 min,可达到灭菌效果。,煮沸法：,细菌繁殖体在沸水中,5 min,可被杀死。,巴氏消毒法：,61.1-62.8,加热,30 min,和,72,加热,15 s,，目前主要用于酒类、疫苗的消毒。,常用消毒与灭菌法,干烤：用干烤箱160加热2 h可达到灭菌效果，适用于耐高温,紫外线消毒法：,以,265,266 nm,紫外线能使,DNA,一条链中相邻的两个胸腺嘧啶形成二聚体，干扰了,DNA,复制与转录而导致细菌死亡。,紫外线穿透力弱，仅用于空气和物体表面消毒。,常用消毒与灭菌法,紫外线消毒法：以265266 nm紫外线能使DNA一条链中,电离辐射：,常用,60Co,对一次性医用塑料制品进行灭菌，也可用于食品、药品和生物制品的灭菌（工业用）。,滤过除菌法：,0.22 m,孔径滤器可除去细菌，,0.10 m,孔径可除去支原体。,低温抑菌法：,抑菌不杀菌。,真空冷冻干燥法：,细菌悬液冻结，负压使水分升华后干燥，可长期保存菌种。,化学消毒剂：,75%,乙醇,，其他浓度高、时间长、效果好。,常用消毒与灭菌法,电离辐射：常用60Co对一次性医用塑料制品进行灭菌，也可用,生物安全：病原微生物危害等级标准及其适用实验室,分类,病原微生物实验室生物安全管理条例,分级,实验室生物安全通用要求,（,GB19489-2004,）,适用实验室,四类,在一般情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。,级,不会导致人类致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子（低个体危害，低群体危害）,BSL-1/P1,三类,能够引起人类或动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。,级,能引起人或动物发病，但一般情况下对人、动物和环境不会引起严重危害或导致严重疾病，并且传播风险有限的病原微生物（中等个体危害，有限群体危害），具备有效药物，部分种类有疫苗。如肠道杆菌和肠道病毒等。,BSL-2/P2,二类,能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。,级,能引起人类或动物严重疾病，但通常不能因偶然接触而在个体间传播的病原微生物（高个体危害，低群体危害），有药物进行有效治疗、多数种类有疫苗。如结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶氏菌、布氏菌、霍乱弧菌、问号钩端螺旋体、立克次体、,HIV,、,SARS-CoV,、,HBV,等。,BSL-3/P3,一类,能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。,级,能引起人类或动物严重疾病，一般无有效药物和疫苗，容易直接或间接或因偶然接触在人与人、人与动物、动物与动物之间传播的病原微生物（高个体危害，高群体危害）。如天花病毒、,Ebola,病毒、黄病毒、马尔堡病毒等。,BSL-4/P4,生物安全：病原微生物危害等级标准及其适用实验室 分类病原微,11,细菌感染临床标本的采集与送检注意事项。,血清学检查或诊断原理及双份血清检测结果判断标准,。,人工主动免疫和被动免疫差异及其主要生物制品。,菌落、灭菌、消毒、无菌操作概念。,干烤和高压蒸汽灭菌法达到灭菌效果的温度与时间。,紫外线消毒原理及其使用范围。,本章要点,细菌感染临床标本的采集与送检注意事项。本章要点,Thank you!,Thank you!,