单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第一章植物组织培养根本理论与操作技术,1,本章主要教学内容,一、组织培养实验室的设计与主要设备,二、培养基及其配制,三、无菌技术,四、组织培养植株再生的途径,五、植物组织培养中常见问题及解决方法,2,第一节,组织培养实验室的设计与主要设备,3,教学目的与要求,（1）掌握组培室的功能布局与设计要求,（2）掌握组培常用的实验仪器设备及使用,（3）掌握调控组培的主要环境条件,4,组织培养实验室场所的选择,植物组织培养需要一个无菌的环境。因此，选择场所时应远离闹市和主干道，周围无污染源，阳光充足、交通便利。,5,准,备,室,配药室,贮藏室,接种室,培养室,组培实验室,炼苗室,一、组培室的根本组成,6,培养室,培养室,培养室,门,厅,走廊,准备室,缓冲室,接种室,洗涤室,配药室,案例1：实验室平面设计,7,功能：用于玻璃器具的清洗、枯燥和贮存；接种材料冲洗；培养基配制、分装、高压灭菌等。,设计要求：通风、洁净、易清洗，水、电来源方便。,配备：水槽；塑料筐；枯燥箱；晾干架；纯水机、高压锅等。,1、准备室,面积：,根据规模，一般40m,2,。,8,电炉,纯水发生器,9,蒸气压力灭菌器,10,酸度计,11,磁力搅拌器,恒温水浴锅,冰箱,12,功能：,培养基母液的配制、药品贮藏等。,配备：,工作台；冰箱、各类天平、酸度计、药品橱、移液器、各类玻璃容器等。,2、配药室,要求：枯燥、洁净。,13,药品橱,工作台,14,电子天平,电光分析天平,托盘天平,15,3、贮藏室,功能：贮藏各种上玻璃器皿、日用品等。,结构：明亮、枯燥。,面积：根据需要而定,16,4、接种室,功能,：,用于植物材料的无菌接种、培养物的转移、试管苗的继代等。,结构：,缓冲室,+,接种室,面积：,尽量越小越好，一般,10,20m2,17,配备：,空气交换机、超净工作台、搁架、医用平车、解剖镜、紫外灯、酒精灯、各种接种器械等。,设计要求:,地面平坦无缝、顶棚及墙壁密闭光滑，干爽安静，清洁明亮，配置横拉门，门窗严密。,18,单人单面水平送风,双人单面水平送风,19,枯燥箱,人工气候箱,显微镜,20,21,5.培养室,配备：,培养架、照明设备、定时器、空调器、干湿温度计、换气扇等。,面积：,根据规模而定,功能：,人工条件下培养接种物及试管苗的场所。,设计要求：,恒温、恒湿，地面平坦、清洁明亮。,22,培养室,23,5、炼苗室,功能：,提供组培苗炼苗的环境。,要求：,能够控温调湿、控光通风。,面积：,根据规模来定。,24,二、设备和器材,1、玻璃器皿,2、器械用具,3、仪器设备,25,（一）对玻璃器皿要求：,1、耐腐蚀；,2、耐高温、高压；,3、透明度好；,4、便于接种。,1、玻璃器皿,26,三角瓶：100、250、500ml或用250ml罐头瓶代替。,培养皿：6、9、12cm,试管：18180mm或20200mm,量筒：10、50、100、500、1000ml,烧杯：50、100、200、500、1000ml,容量瓶：100、200、500、1000ml,试剂瓶（棕色）：50、100、250、500、1000ml,移液管：0.2、0.5、1.0、2、5、10ml,微量移液器,玻璃棒、酒精灯,（二）玻璃器皿的规格：,27,(1)、镊子类：接种、转移材料或别离茎尖用，以100ml三角瓶为培养瓶，可用20cm长。,2、器械用具,28,2、器械用具,(2)、剪刀类：医用剪刀，剪切割外植体或继代培养时别离材料。,(3)、解剖刀：切割芽、茎段、愈伤组织等，继代时别离材料，也可用于微小外植体的接种等。,(4)、解剖针：转移细胞或愈伤组织，微茎尖别离及接种等。,29,2、器械用具,(5).其它：,周转筐、搪瓷盘、移液管架、玻璃棒、酒精灯、试管架等。,30,细菌过滤器,31,三、培养条件,1.一般控制252C。,2.植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20；月季2527；番茄28。,（一）、温度,32,（二）、光照,1.光强,影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。,有的材料愈伤组织的诱导需光或需暗；,光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。,33,不同波长的光对细胞的分裂和器官的,分化有影响。,2.光质,白光促进小花天竺葵愈伤组织的生长，蓝光则无作用。,如：,红光促进杨树愈伤组织的生长,蓝光阻碍其生长;,34,3.光照时间,根据植物生物学特性决定,;,光照长短对试管内花的形成有重要影响；,在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加，而促进生长。,35,(三)、湿度,1.瓶内的湿度：,主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长缓慢；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。,36,2.环境湿度:,过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。,一般为7080%。,(三)、湿度,37,1.培养基适宜PH值5.0-6.5，一般为5.65.8；可用0.1M的NaOH和HCl溶液进行调整。,(四)、pH值,2.H值影响培养基的硬度。,3.灭菌之前，培养基的H要比标准提高0.20.3个单位。,PH6.5,培养基会变硬,PH5.0,培养基不易凝固,38,(五)、气体(必要条件),1.培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。,可用棉塞或特制的封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉塞易使培养基枯燥，夏季易引起污染。,39,2.培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。,固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。,液体培养时，可考虑采取振荡培养的方式，以增加通气性。,(五)、气体(必要条件),40,2、个大气压以上就对生长有阻碍作用，5个大气压生长就完全停止，个大气压细胞就不能生存。,(六)、渗透压,1、1-2个大气压促进生长。,培养基中添加白糖可有效提高培养基的渗透压。,41,实训一,在参观完学院的植物组织培养室后，你认为有存在什么问题？如果给你一块空地，请你设计一个合理的组培实验室以及需要配置的仪器设备。,？,42,