,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,含量方法学研究,内部培训,-,共勉,含量方法学研究,中国药典二部附录XIX A、V D,USP P1225,CDE-化学药物质量控制分析,方法验证技术指导原则,依据,ICH Q2,1,3,4,2,中国药典二部附录XIX A、V DUSP P1225CDE-,今天主要讲我们工作范围内常用的方法,1.HPLC法,2.容量法,所讲方法学验证主要HPLC法，容量法由于验证很简单，因此最后再简述,含量-试验方法,今天主要讲我们工作范围内常用的方法含量-试验方法,建立标准时要考虑的问题,Growth,2008,2007,2006,2002,2001,2000,含量方法学验证要求,Ch.P要求,建立标准时要考虑的问题Growth20082002,建立标准时要考虑的问题,Growth,2008,2007,2006,2002,2001,2000,含量方法学验证要求,ICH要求,建立标准时要考虑的问题Growth20082002,1.,为什么要做方法学验证？,2.,各验证指标目的是什么？,3.,各验证项目试验如何设计？,4.,试验结果如何在要求？,1.为什么要做方法学验证？2.各验证指标目的是什么？,项目负责人，理解、熟悉。,新人今天可能理解有困难，但是要有个概念。后期工作中再慢慢熟悉,项目负责人，理解、熟悉。,HPLC法-准确度,HPLC法-准确度,HPLC法-准确度,HPLC法-准确度,HPLC法-准确度,常见的做法是：照制剂处方（原料：混合辅料），取对照品（常用原料代替）适量，加入一定量的混合辅料中。辅料量是按处方,100%,不变，原料,80%,，,100%,，,120%,三个浓度，各制备,3,份。用对照品外标法测试混合后含量。,描述有点简单，具体操作，不理解的同事可以咨询项目负责人或者其他有经验的人。,HPLC法-准确度常见的做法是：照制剂处方（原料：混合辅料）,准确度-常见判断标准,各浓度下的平均回收率均应在,98.0%-102.0%,之间，,9,个回收率数据的相对标准差（,RSD,）应不大于,2.0%,。,ICH,和中国药典均未具体给出判断标准。,出处：,CDE,黄晓龙,-,含量测定分析方法验证的可接受标准简介（非金标准）,准确度-常见判断标准 各浓度下的平均回收率均应在98.0,准确度-原料,准确度-原料,ICH-准确度-原料,ICH-准确度-原料,吸收系数,有的做法是直接用原料分别称取,80%,，,100%,，,120%,的量，各制备,9,份溶液。来做回收率。,点评：意义不大，只要线性、精密度好，上述试验完全可论证。,建议：原料准确度，不做（我们时间很紧，且多出图，涉及原始记录、电子图谱、台账的协调统一，能少做，尽量不多做，做的越多，出错的概率就越大）。,物理常数研究,准确度,-,原料,吸收系数 有的做法是直接用原料分别称取80%，100%，1,吸收系数,物理常数研究,HPLC,法,-,精密度,吸收系数物理常数研究HPLC法-精密度,吸收系数,物理常数研究,HPLC,法,-,精密度,吸收系数物理常数研究HPLC法-精密度,吸收系数,物理常数研究,HPLC,法,-,精密度,吸收系数物理常数研究HPLC法-精密度,吸收系数,1.,重复性,-,制备,6,份供试样品溶液，测试其含量，,RSD,2.0%,，一般情况,1.5%,左右,不要想当然，随意调整称样量，将,RSD,放到,0.5%,以下（天平，量瓶，人，移液管，,HPLC,误差），实际很难做到。,2.,中间精密度,-,配制,6,份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得,12,个含量数据的相对标准差应不大于,2.0%,。,物理常数研究,HPLC,法,-,常见,试验方法和判断要求,吸收系数1.重复性-制备6份供试样品溶液，测试其含量，,吸收系数,1.,重现性,-CDE,黄晓龙文章也没有写（目前行业里非必须验证项目）,物理常数研究,HPLC,法,-,常见,试验方法和判断要求,吸收系数1.重现性-CDE黄晓龙文章也没有写（目前行业里非,吸收系数,物理常数研究,HPLC,法,-,专属性,吸收系数物理常数研究HPLC法-专属性,吸收系数,1.,空白溶剂，混合辅料干扰。,2.,已知杂质不干扰分离。,3.,强制降解试验（降解条件尽量和有关物质一致）。,CDE,黄晓龙：可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于,2.0,。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于,980,。,物理常数研究,HPLC,法,-,专属性常见操作和要求,吸收系数1.空白溶剂，混合辅料干扰。物理常数研究HPL,吸收系数,1.,强制降解试验，各破坏样品色谱图，不要和有关物质降解色谱图有明显冲突。,比如：有关物质试验降解,5%-10%,的杂质，保留时间在主峰之前，那么含量即便浓度降低若干倍，但也应有想匹配杂质量相应，不能杂质未检出。,或者有关物质没有降解，而含量却应为污染或其他因素，反而有很大的色谱峰。,总之，含量做完试验后，尽快与有关物质对比，查阅。不要最后整理才发现,物理常数研究,HPLC,法,-,专属性,-,注意事项,吸收系数1.强制降解试验，各破坏样品色谱图，不要和有关物质降,吸收系数,1.,必要的时候，有关物质色谱条件，可做主峰出来后，截断作为含量的色谱条件。含量可以不必再做降解试验。,2.,有关物质和含量溶剂（稀释剂）不一样时，溶液稳定性需要分别做，如果溶剂一样，可考虑共用。,物理常数研究,HPLC,法,-,专属性,-,注意事项,吸收系数1.必要的时候，有关物质色谱条件，可做主峰出来后，截,吸收系数,物理常数研究,HPLC,法,-,线性,吸收系数物理常数研究HPLC法-线性,结论：在,0.040mg/ml0.238mg/ml,浓度范围内，浓度和峰面积呈良好的线性，回归方程为,y=16140627.2295 x-123144.6016,，相关系数为,0.9994,。,结论：在0.040mg/ml0.238mg/ml浓度范围内,吸收系数,试验方法：以供试品溶液浓度做为,100%,，分别制备,50%,（,60%,）、,80%,、,100%,、,120%,、,150%,（,140%,）。,要求：可接受的标准为：回归线的相关系数（,R,）不得小于,0.998,，,Y,轴截距应在,100,响应值的,2,以内，响应因子的相对标准差应不大于,2.0%,。,物理常数研究,HPLC,法,-,线性常见方法和要求,吸收系数试验方法：以供试品溶液浓度做为100%，分别制备50,HPLC,法,-,范围,HPLC法-范围,HPLC,法,-,范围,-,操作方法和要求,试验方法：现在是和线性同时进行。,CDE 黄晓龙文章-未提试验方法和如何判断。,CHP，ICH也只有概念，范围，没有具体的试验做法和判断标准,HPLC法-范围-操作方法和要求试验方法：现在是和线性同时,HPLC,法,-,耐用性,HPLC法-耐用性,HPLC,法,-,耐用性,-,试验方法和要求,试验方法：1.柱温改变：室温、标准温度、+2-5,。（注意 色谱柱最高耐受温度，药典：不超过60），,2.流速改变：等度条件0.2ml/min（0.1）,梯度条件0.1ml/min（预估）,3.pH改变：0.2,4.波长改变：2nm或者（,5nm,）,5.流动相比例变化5%（低比例溶剂）,6.不同厂家或批号色谱柱,建议：选择1.3.6进行试验,HPLC法-耐用性-试验方法和要求试验方法：1.柱温改变：,验证,验证结束？,验证,HPLC,法,-,系统适用性？,建议：,进样精密度,HPLC法-系统适用性？建议：进样精,中国药典格式,-,含量,中国药典格式-含量,HPLC,法,-,系统适用性,HPLC法-系统适用性,含量,-,进针问题,含量检验：常见方法有2种,1.对照品和样品各制备2份溶液，分别进2针。（双样双针）,2.对照品和样品各制备2份溶液，2份对照先各进一针，平行后，第二份对照品溶液再进4针，计算RSD1.5%，供试品溶液制备2份，各进1针，最后第二分对照品溶液再进1针，6针对照品溶液再计算RSD1.5%。计算含量,个人建议使用方法2.因为能拿出依据。,三批样品测试含量方法1:16针,方法2:13针,含量-进针问题 含量检验：常见方法有2种,容量法-含量,1.理论支持,2.重复性试验-6份样品（条件允许：同时附3份样品的滴定突跃曲线）,3.滴定当量的验证（线性）80%,90%，100%，110%，120%,4.电位滴定校正颜色,建标准：滴定液通常情况消耗：6-8ml左右,NaOH滴定液22ml左右,容量法-含量1.理论支持,含量方法学研究-课件,闻道有先后，术业有专攻,大家相互学习，共同进步,正因为一些方法学验证项目国家只给了个概念，没有给具体操作方法，因此各家公司具体做验证，试验多少都会有差异。,我们有些员工可能在其他公司，有些验证项目，具体试验，可能和我们要求有所不同，但是无论怎么做，只要已经完成的验证试验数据，能支撑这个方法的成立，即便少做部分，或者部分做的不好，CDE是个综合考量。如果你有更好的方案，可以提出，我们会欣然接受的。,另：从来没有听说过那家线性做的不好，退审了，或者那家试验结论写的不好，CDE退审。,闻道有,Thank You!,谢谢大家！,Thank You!谢谢大家！,