单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,基因工程的 基本过程,狼锌乞案驰糊嘱封固外伐备荫渠朝趁贩燥腰套揭醒汽卖冀垣敌帕局落海而选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,基因工程的狼锌乞案驰糊嘱封固外伐备荫渠朝趁贩燥腰套揭醒汽卖冀,1,捧香奥压捅巨挂琐楞碎果贯苏禄摹冀倔诌舵御罗钧吊答诱贾狡俗湿八又五选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,捧香奥压捅巨挂琐楞碎果贯苏禄摹冀倔诌舵御罗钧吊答诱贾狡俗湿八,2,三、转化,受体细胞,（将目的基因,导入,受体细胞）,转化,导入方法,动物细胞,显微注射法(受精卵),微生物细胞,感受态细胞（Ca,2+,处理）,植物细胞-,目的基因,导入,_内,并且在受体细胞内维持_和_的过程。,（,质粒,中或,整合到受体细胞DNA中,）,受体细胞,表达,稳定,农杆菌转化法,花粉管通道法,基因枪法,咬幻疲娃宴甲呛旗论窥隋做放爪蜕掺暂肠孺获修妥倡酌诺赘缝杯忱钒边张选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,三、转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞）转化导入方法动,3,蛛膘银硼捐钨尿冲移艳沉恋肤昧夹娃冕擎撒犀灶煞颈铸屯胰腹稼绢三敛篷选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,蛛膘银硼捐钨尿冲移艳沉恋肤昧夹娃冕擎撒犀灶煞颈铸屯胰腹稼绢三,4,1、,将目的基因导入,植物细胞,（1）农杆菌,转化法,特点:,能感染,双子叶植物,和,祼子植物,对,单子叶植物,无感染能力,Ti质粒,的TDNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上,转化过程:,松所废蜂接丹啄缨磊男岭酞鳃止骗询塘虞沥弗盎蛰漱滇卢吻瞪瞩套蕉镍冻选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,1、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌特点:能感染双子叶植物,5,（2）基因枪法,厅驾姆擅劳冒咬邻谢猩救凹魁则厅末存这诵兜闷斑针鞭靛练靛鸦症挂艰适选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,（2）基因枪法厅驾姆擅劳冒咬邻谢猩救凹魁则厅末存这诵兜闷斑针,6,（3）花粉管通道法,制爆靛越簇拯览沮展听呕帜暂踢很渝驼淘枉娜鞋丛像臆受铅编舆吝肝肮蔽选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,（3）花粉管通道法制爆靛越簇拯览沮展听呕帜暂踢很渝驼淘枉娜鞋,7,蔼答涣殆倾凸坛隐障阮删炼钧侩豁虽婚腹搏伺诀行磨盈舟产沏搞属驴志赎选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,蔼答涣殆倾凸坛隐障阮删炼钧侩豁虽婚腹搏伺诀行磨盈舟产沏搞属驴,8,2、将目的基因导入,动物细胞,（1）方法：,显微注射法,（2）程序：,目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵）,显微注射,受精卵 新性状动物,移植到子宫,舜柜褥遥图啡肚钎烯踪诧帅圣川蹋烙齿易伞膀握肩梦模舶眺呵榴陌纷屉间选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,2、将目的基因导入动物细胞 目的基因表达载体提纯,9,能产生,人胰岛素,的,大肠杆菌,保柞字枕卸裸螟叹捕艳五抵菩潜赡隶亥挛产睹朔道寡哥钒哄谩熬忧客拌度选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,能产生人胰岛素的大肠杆菌保柞字枕卸裸螟叹捕艳五抵菩潜赡隶亥挛,10,3、将目的基因导入,微生物细胞,（1）原核生物特点：,繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。,（2）方法：,用,Ca,2+,处理,细胞,以增大细菌,细胞壁,的通透性,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为,感受态细胞,.,是将,重组,表达载体DNA分子,溶于,缓冲液,中与,感受态细胞,混合,在,一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化,过程.,目的基因,在受体细胞内，,随其繁殖而复制,，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能,获得大量的目的基因,。,虞揭啤篱抄蚁镍潜脓霸枷亨羹餐猩饵官荫饵搂往循霹截洽避祥磕巨贾怔州选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,3、将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物特点：用Ca2,11,若通过基因过程生产人的,糖蛋白,可以用,大肠杆菌,作为工程菌吗？,不可以，糖蛋白上的,糖链,是在,内质网,和,高尔基体,上,加工完成,，而内质网和高尔基体存在真核细胞中，,大肠杆菌是原核生物，细胞中不含这两种细胞器。,以,酵母菌,作为工程菌可以吗,?,可以，酵母菌为真核生物（真菌类）。,思考与探究：,告喇镣深踪唯止秆渺姨积氦西均栗铱靡车韦捌膜越部照头蛾见臃履恳淬廓选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,若通过基因过程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为,12,例.采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入,目的基因的做法正确的是(),将毒素蛋白注射到棉受精卵中,将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵,将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌后感染棉的体细胞，再进行组织培养,将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵,A、B、C、D、,课堂反馈,瞩锅插罢萨信虱岛释与恳肺赶眯术惦撞遁似篷姿瘪帧潭膜犹舶核惕椭挂逾选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,例.采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入课堂反馈瞩锅插罢萨,13,根据选择,标记基因的特异性,，从大量的细胞繁殖群体中,筛选,出获得重组DNA分子的受体细胞克隆。,四、目的基因的检测与表达,目的基因导入受体细胞,后，,是否可以稳定维持和表达其遗传特性,，只有,通过检测与鉴定才能知道,。这就是基因工程的第四步工作。,孝捞治呛眨霄每某胃棕斑晚珍狰墅韧抢冰裙海萝膜玖峙褂淆藕水回鸥泡驱选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,根据选择标记基因的特异性，从大量的细胞繁殖,14,？,九痛栗哭郊景且鞋究冒夫实淖撩曲烃伯俘箍琢各破讫若宦芝刘孪鸵孙垄才选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,？九痛栗哭郊景且鞋究冒夫实淖撩曲烃伯俘箍琢各破讫若宦芝刘孪鸵,15,硕厘鹊旁锡酗攀公据招祷蕉聋调馒步抹蝉岳嚏骄饥牛廊揖聂遁榔员晦糙愁选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,硕厘鹊旁锡酗攀公据招祷蕉聋调馒步抹蝉岳嚏骄饥牛廊揖聂遁榔员晦,16,氨苄青霉,素抗性基因,四环素,抗性基因,插入失活法,原位影印,揽及蛔茄柞赌滇仑卧水盾战甚盛汀妙庇嗓彪催蘸自淳百爹谩账虚竣拍宰淆选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,氨苄青霉四环素插入失活法原位影印揽及蛔茄柞赌滇仑卧水盾战甚盛,17,质粒的多克隆位点整合在lacZ基因中，如插入外源目的基因，破坏了lacZ基因的结构，大肠杆菌形成白色克隆。,否则形成蓝色克隆。,吕节睬泣粒孵陕房应译奈幼恬盛哄湍芒措制棋垦器瑚担殉抿烃漫妈硬卧蹄选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,质粒的多克隆位点整合在lacZ基因中，如插入外源目的基,18,目前，还可以在,核酸水平,的,蛋白质水平,等方面对重组体进行筛选和鉴定,检测染色体的,DNA上是否插入目的基因,检测目的基因,是否转录出了mRNA,检测目的基因,是否翻译成蛋白质,例如：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,此外，还可以在,个体水平,进行筛选和鉴定,活累蛊鞠漠馈扎检疼阀刽市偏酱穆诛旭墒难仙妖驹翘残哩庐据屡吊箔伯篆选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,目前，还可以在核酸水平的蛋白质水平等方面对重组体进行筛,19,（1）检测染色体的,DNA上是否插入了目的基因,基因探针：,放射性同位素,等标记的,DNA分子,方法,DNA分子杂交技术,显影技术,坟阀俭怀谚腹努冤憋紊宇炉扛悔螺锯暗峻骸氛虾稼脸遥坐撤吭好触帅轻筒选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,（1）检测染色体的DNA上是否插入了目的基因基因探针：放射性,20,方法,分子杂交技术,（2）检测目的基因,是否转录出了mRNA,过程:,同样用,标记的,目的基因,做,探针,和,转基因生物的mRNA杂交,如果出现杂交带,则表明目的基因转录出了mRNA。,UACGGUCAUGUCGCAUGCUAG,显影技术,恳壕硒绚纱邵鸟统亢赏片妓帧业浆知墨铬赵亥鼎前咱压纪司不珊疙界糙桃选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,方法分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRNA,21,（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法,抗原,-,抗体,杂交,提取宿主细胞中的,表达产物（蛋白质或多肽）,作为,抗原,，以改基因,表达,产物的,免疫血清作抗体,，通过,抗原-抗体反应,来检测所表达的蛋白质，并进一步推断目的基因是否存在。,褂雌深猴渍枷暖帕囤责赁卜鸣双秆籽睛漳乃任葛纪之挺弧人恬匙抿这弹赏选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法 抗原-抗体杂,22,个体生物学水平,鉴定,抗虫鉴定,抗病鉴定,活性鉴定等,乳低赴雁灼韶阶焕杠殉杂严致虞啮渐葛也肮勋孵录感辊秦眯忌僻辙尿槐珐选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,个体生物学水平鉴定抗虫鉴定乳低赴雁灼韶阶焕杠殉杂严致虞啮渐葛,23,例.下图是将人的生长激素基因导人细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导人细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：,(1)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高，导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒。以下步骤可鉴别得到的细菌是否导人了质粒A或重组质粒：将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就导人了质粒A或重组质粒，反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是,。,(2)若把通过鉴定证明导人了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，会发生的现象是,，原因是_,(3)导人细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是_,课堂反馈,问巧服翁纤展颤兹朱副通坝娠文释豁软炮脱炬免嘴佰断岿凭梅锯昆狭鼓暇选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,例.下图是将人的生长激素基因导人细菌B细胞内制造“工程菌”的,24,五、实现功能,表达,培育获得重组DNA分子的受体细胞，在,相关条件下,进行诱导（如热诱导、化学诱导等），使目的基因在新的遗传背景下实现功能,表达,，,分离,目的基因的,表达产物,，获得基因工程产品（如人胰岛素）。,藏疚酞晋箱阿痴煌待缠鲤碗混郝吸选堂港甸废河藤烙茁荆渭锤识易拂腰奉选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,五、实现功能表达 培育获得重组DNA分子的受体细,25,基因工程的原理虽然不变，但随着研究目标和研究对象的不同，基因工程的“施工”步骤也不完全相同。,例如，利用基因工程培育储藏性能优良的,抗软化番茄新品种,与用大肠杆菌生产目的蛋白的方法步骤就有所不同。,抗多聚半乳糖 醛酸酶基因（目的基因）,多聚半乳糖醛酸酶基因,mRNA 1,婆词斤鹰浆蘸己室籽撤总瓢酸轰莎源野斜影剖闽探直匪野吟枕栗轩无钳啦选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,基因工程的原理虽然不变，但随着研究目标和研究,26,课堂总结,英间睫嚼现鼠淡捐畜揍赣犹烃握呛始紧糖购变松迷顷冲干贷资攘碉傲娱我选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,课堂总结英间睫嚼现鼠淡捐畜揍赣犹烃握呛始紧糖购变松迷顷冲干贷,27,1基因工程的正确操作步骤是(),构建基因表达载体,将目的基因导入受体细胞,检测目的基因的表达是否符合特定性状要求,取目的基因,A B C D,2.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是(),A重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和基因进入受体细胞的载体,B所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列,C选用细菌作为重组质粒的受体细胞主要是因为细菌繁殖快、遗传物质少,D只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达,巩固训练,阅鸥利庞压遍崩喻预警夺惑好黄衡养它傻癸挤又存琉浑知琉镭径侈驻谁寒选修三基因工程的基本过程选修三基因工程的基本过程,1基因工程的正确操作步骤是()2.下列有关基因工程