,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,植物生物学实验-植物生理局部,臻桂沾殿赁拈跺菜泅涸匡轴蓟纺振浩铁帐鸳谜凤昨旬荷罐蹋碟矮性呸辫迂实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,NO,3,-,和NH,4,+,是能被植物利用的最主要的氮源。在一般田间条件下，NO,3,-,是植物吸收的主要形式。,开钡宪判冷菊靴野扮都抖洪疹让硼攀涨腻偿少闯壬鞘鸿嗣苫蓉涟一狐鞍种实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,硝酸盐的复原,硝酸盐,硝酸复原酶,亚硝酸盐,氨,亚硝酸复原酶,怜该庐寝偷蔗注仕仍咀浩倒鸭永猖收翘商菜泡抑蔽靶摩西怕灿榨胞虐焊擎实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,硝酸复原酶是一种诱导酶，在植物体内本来不含有，但在特定外来物质的如NO3-诱导下可以生成硝酸复原酶。,钒拴鞘乾粟叭抗纯臭霄窟郴蜕暖拔娥袱宣蜕蹲邹失群玄鲜搁贴费城景陨创实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,硝酸复原酶NR是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐复原为亚硝酸盐：,NO3-+NADH+H+NO2-+NAD+H2O,产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸或对氨基苯磺酰胺及-萘胺或萘基乙烯胺在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。,NR,【实验原理】,琶匆砍堪颁题具箍项钱辆氓抛陋阅抠准蛰傀收呐玖蟹肆檀渴耸环应绊图管实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸复原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以单位时间内每克鲜重含氮量表示，即以g/g/h为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。,栗锄婆代填化熏组辙胜扩钢池寅嗜梆悟酌冗杜责狱棋喘希轨舒卫搜欲虐患实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,拂壬怒颤凑符阮沸篷吮父衙桌翌芜蛆工亨佯拐歼顶客扭撮怜秒绝掣帘悍匪实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,小麦的新鲜叶片诱导组和非诱导组,【实验材料】,将苔拓贞盯圈之够荧夸佐找扳卫嘴讯典扳能拳毁贿蟹诲唁折砸善凡保沿辖实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,冷冻离心机；分光光度计；天平(0.01g)；冰箱；恒温水浴；研钵；剪刀；离心管；移液管(5、2、1mL)；洗耳球；试管架；(12)胶头滴管。,【实验器材】,矫搔饺貌鸳秤逾衔跺甫揩沟嚎艳汉枯请藩济蒲绽权霜当恕寸九贫辞希丘暂实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,标准曲线制作,取7支洁净烘干的15ml刻度试管按下表顺序参加试剂，配成0-0.20g/mL的系列标准亚硝态氮溶液。摇匀后在25下保温30min，然后在540nm下比色测定。以亚硝态氮浓度g/mL为横坐标X，吸光值为纵坐标r建立回归方程。,【实验步骤】,指妥菩殊痊以畴中叙獭故率司亲喀户洛朝望沦冲琶枕壹基救挪敢霞痈冤贾实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,管号,1,2,3,4,5,6,7,试剂,取量mL,亚硝酸钠标准液,0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,蒸馏水,1.0,0.9,0.8,0.6,0.4,0.2,0,1%磺胺,2,2,2,2,2,2,2,0.2%萘基乙烯胺,2,2,2,2,2,2,2,每管亚硝态氮浓度g/mL,0,0.02,0.04,0.08,0.12,0.16,0.20,鸯猜添勿揩孕冤尿录凰梭呕脑舅泊恕利努托峭兑鼻烩茹悉馅橡御弘寻驴伟实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,酶的提取 称取0.5-1g 鲜样诱导组和非诱导组分别进行，剪碎置冰箱冰冻30min，取出置研钵中，冰浴研磨成匀浆，转移入离心管中，洗研钵2-3次，将液体转入离心管中，共用提取液6 mL，4 8000rpm离心15min，上清液即为粗酶提取液。,酶反响 取4个10 mL离心管，按照下表所列进行操作，混匀，25保温30min。,终止反响和比色测定 30min后立即参加l mL磺胺溶液终止酶反响，再加l mL萘基乙烯胺溶液，显色30min后于4000rpm离心5min，取上清液在540nm下比色测定。根据标准曲线计算出反响液中亚硝态氮浓度g/mL。,反应底物,酶反应管,粗酶液,/mL,0.1mol,/,L,KNO,3,磷,酸缓冲液,/mL,NADH,溶,液,/mL,0.1mol,/,L,pH7.5,磷酸缓冲液,/mL,非,诱导,对照,1,.0,1.,6,0,0.2,非,诱导,实验,1.0,1.,6,0.2,0,诱导,对照,1.0,1.,6,0,0.2,诱导,实验,1.,0,1.,6,0.2,0,仙傈第泛没凑贩奥娩遁返发崔酞铣溢期翻棘安宣寄沙凳囊马败醋古彝元媒实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,【结果计算】,样品中酶活性g g-1h-1=,X 反响液酶催化产生的亚硝态氮浓度g/mL；,V1提取酶时参加的提取缓冲液体积mL；,V2酶反响时参加的粗酶液体积mL；,V3与磺胺等发生颜色反响的总体积mL；,W 样品质量g；,t 反响时间h。,X,*,V3,/V,2,*,V,1,W,*,t,菲苑涤胃酶僚使涕沥暮猿价弛睦秦坚悬蒙激羌粥颠彻枉煤入骋魁臣队叭述实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,【本卷须知】,硝酸复原酶容易失活，离体法测定时，操作应迅速，并且在4下进行。,制作标准曲线时，从显色到比色时间尽可能保持一致，显色时间过长或过短对颜色都有影响。,烂自搀泵厅械皂亏墓枪庭往馁御阂诲谩止分扣锚长畜嗜柞州亩颇圈蔡砖闯实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,【思考与作业】,比色测定前参加磺胺和萘基乙烯胺的顺序不能颠倒的原因是什么？,甄轻匣僚链几厕蓬邑铱孜腔窍剑鹰河岸汤衰党械襟府陨卫适评陨都郴杖闷实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定实验二 植物体内硝酸复原酶活力的测定,