单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,检验仪器的使用与维护,检验仪器的使用与维护,第一节常用设备的使用及维护,一分光光度计,1.分光光度计的主要部件,(1)光源,1)钨丝灯。,2)氢灯或氘灯。,3)光源应该有足够的发射强度而且稳定。,(2)单色器在分光光度计中采用棱镜或光栅构成的单色器来获得纯度较高的单色光。,(3)吸收池一般分光光度计都配有各种厚度(即光程)的吸收池，有0.5cm、1cm、2cm、3cm、5cm等。,第一节常用设备的使用及维护一分光光度计1.分光光度计的,第一节常用设备的使用及维护,(4)检测器检测器是测量光线透过溶液以后强弱变化的一种装置，一般利用光电效应，将光线照射在检测器上，产生光电流进行测量。,(5)检流计光电池产生的光电流通过检流计检测出来。,2.分光光度计的使用,图2-1-1分光光度计使用的简要流程,第一节常用设备的使用及维护(4)检测器检测器是测量光线透,第一节常用设备的使用及维护,3.分光光度计使用注意事项,1)安放仪器的房间应远离电磁场，并且干净、通风、防尘。,2)安放仪器的桌子要注意防震，最好采用水泥制作，比较稳定，并且不容易受周围震动源的影响。,3)仪器的每个部分都不允许受潮，否则将会使有关的元器件损坏或性能变坏。,4)经常检验仪器的技术指标。,5)保持仪器机械运动部件活动自如，如光栅的扫描机构、狭缝的传动机构、光源转换机构等。,6)仪器的连续使用时间不能超过2h，使用后必须间歇0.5h才能再用。,7)比色皿在使用前、后必须彻底清洗。,第一节常用设备的使用及维护3.分光光度计使用注意事项1),第一节常用设备的使用及维护,二培养箱,1.培养箱的使用,1)操作人员需仔细阅读使用说明，只有在了解、熟悉了培养箱的功能后才能接通电源。,2)接通电源，把温、湿度等调整为适宜所培养微生物生长繁殖的条件。,3)在微生物培养过程中，不能出现断电现象，且尽量减少开箱，以确保培养环境的稳定。,2.培养箱的维修与保养,1)箱内的培养物不宜放置得过挤，以便于热空气对流。,2)电热式培养箱应在箱内放一个盛水的容器，以保持一定的湿度。,第一节常用设备的使用及维护二培养箱1.培养箱的使用1,第一节常用设备的使用及维护,3)对于隔水式培养箱，应注意先加水再通电，同时应经常检查水位，及时加水。,4)电热式培养箱在使用时应将风顶适当旋开，以利于调节箱内的温度。,5)仪器不宜在高压、强电流、强磁场条件下使用，以免干扰温控仪及发生触电危险。,6)勿放置易燃易爆物品，以防发生危险。,7)勿放置高酸高碱物品，以防止箱体腐损。,三超净工作台,1.超净工作台的使用,(1)安放点的选择,1)最好将其置于一间有空气消毒设施的无菌室内。,第一节常用设备的使用及维护3)对于隔水式培养箱，应注意先加,第一节常用设备的使用及维护,2)调整各脚的高度，以保证稳妥和操作面的水平。,(2)使用前的检查,1)接通超净工作台的电源。,2)旋开风机开关，使风机开始正常运转，这时应检查高效过滤器出风面是否有风送出。,3)检查照明及紫外设备能否正常运行，若不能正常运行，则通知工程部检验。,4)工作前必须对工作台四周环境及空气进行超净处理，认真做好清洁工作，并采用紫外线灭菌法进行灭菌处理。,5)净化工作区内严禁存放不必要的物品，以保持洁净气流活动不受干扰。,(3)使用,第一节常用设备的使用及维护2)调整各脚的高度，以保证稳妥和,第一节常用设备的使用及维护,1)使用超净工作台时，应先用清洁液浸泡的纱布擦拭台面，再用消毒剂擦拭。,2)接通电源，提前50min打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，30min后封闭紫外灯，开启送风机。,3)工作台面上不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。,4)操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，封闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。,5)最后开启工作台紫外灯，照射消毒30min后，封闭紫外灯，切断电源。,第一节常用设备的使用及维护1)使用超净工作台时，应先用清洁,第一节常用设备的使用及维护,6)按时用风速计测量工作区内的均匀风速，若发现其不符合技术标准，则应调节调压器手柄，改变风机输入电压，使工作台处于最佳状况。,7)每月进行一次维护检查，并填写维护记录。,(4)清洁,1)每次使用完毕，立即清洁仪器，悬挂标志，并填写仪器使用记录。,2)取样结束后，先用毛刷清理工作区的杂物和浮尘。,3)用细软布擦拭工作台表面污迹、污垢，目测无清洁剂残留，并用清洁布擦干。,4)要经常用纱布蘸上酒精将紫外灯表面擦干净，保持其表面清洁，否则会影响杀菌能力。,第一节常用设备的使用及维护6)按时用风速计测量工作区内的均,第一节常用设备的使用及维护,5)效果评价:设备内外表面应该光亮、整洁，没有污迹。,2.超净工作台使用注意事项,1)保持室内干燥和清洁。,2)在使用超净工作台前应开紫外灯15min以上照射灭菌，但照射不到之处仍是有菌的。,3)新购买的和久置未用的超净工作台除用紫外灯等照射外，最好能进行熏蒸处理，然后在机器处于工作状态时在操作区的四角及中心位置各放一个打开的营养琼脂平板，2h后盖上盖并置于37培养箱中培养24h，计算出菌落数。,四高压蒸汽灭菌锅,1.高压蒸汽灭菌锅的使用,第一节常用设备的使用及维护5)效果评价:设备内外表面应该光,第一节常用设备的使用及维护,(1)设备的检查检查门开关是否灵活，橡胶圈有无损坏及是否平整。,(2)加水检查锅内蒸馏水量是否充足，若不充足，则将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。,(3)放置待灭菌物品放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。,(4)加盖盖上锅盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，确保不漏气。,(5)加热灭菌用电炉或煤气加热，同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。,(6)降温取物在达到灭菌所需时间后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降。,第一节常用设备的使用及维护(1)设备的检查检查门开关是否,第一节常用设备的使用及维护,(7)无菌检查将取出的灭菌培养基放入37温箱内培养24h，经检查无杂菌生长，即可待用。,2.高压蒸汽灭菌锅使用注意事项,1)锅内的水必须用蒸馏水或纯化水。,2)锅盖螺栓必须对称拧紧。,3)一定要在放气阀排出大量蒸汽后再关闭灭菌锅。,4)当到达设定的灭菌时间时，必须等到压力表归零后再打开灭菌锅。,5)在灭菌锅超过最大耐受压力后，放气阀会自动弹开，此时不能保证锅内物品完全灭菌，需从新灭菌。,第一节常用设备的使用及维护(7)无菌检查将取出的灭菌培养,第二节微生物检验的基本技术,一微生物检验器皿消毒灭菌方法,1.常用概念,(1)灭菌灭菌是采用强烈的理化因素杀死物体表面及内部的所有微生物(包括病原微生物和非病原微生物)繁殖体及芽孢的过程。,(2)消毒消毒是用较为温和的理化因素仅杀死物体表面或内部一部分对人或动、植物有害的病原微生物，而对被消毒的对象基本无害的措施。,(3)无菌无菌是指不含活的微生物。,(4)防腐防腐是利用理化因素完全抑制微生物的生长繁殖，防止食品、生物制品等霉变腐败的措施。,(5)商业无菌经过适度的杀菌后，不含有致病性微生物，也不含有在通常温度下能繁殖的非致病性微生物的状态叫做商业无菌。,第二节微生物检验的基本技术一微生物检验器皿消毒灭菌方法,第二节微生物检验的基本技术,2.常用的消毒与灭菌方法,(1)加热灭菌利用加热方法进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。,1)干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微生物及其芽孢的说法叫干热灭菌法。,烘箱热空气灭菌：将耐热待灭菌物品放于鼓风干燥箱内，利用热空气进行灭菌的方法。由于空气的传热性和穿透力不及饱和蒸汽，再加上菌体在脱水情况下不易被热能杀死，所以烘箱热空气灭菌需要较高的温度和较长的时间，一般于160加热2h。灭菌时间可根据被灭菌物品体积进行适当调整。此方法适用于对体积较大的玻璃、金属器皿和其他耐干燥物品进行灭菌，如培养皿、锥形瓶、吸管、烧杯、金属用具等。这种方法的优点是能使灭菌物品保持干燥。,第二节微生物检验的基本技术2.常用的消毒与灭菌方法(1),第二节微生物检验的基本技术,图2-1-2吸管的包扎流程,图2-1-2,火焰灼烧灭菌：将待灭菌物品在酒精灯火焰上灼烧以杀死其中的,第二节微生物检验的基本技术图2-1-2吸管的包扎流程图,第二节微生物检验的基本技术,微生物的灭菌方法。这是一种最简便、快捷的干热灭菌方法，但只适用于体积较小的金属器皿或玻璃仪器，如接种环、接种针、试管口或玻璃棒的灭菌。,2)湿热灭菌法：一种用煮沸或饱和热蒸汽杀死微生物的方法。,高压蒸汽灭菌法。利用高压蒸汽灭菌锅内温度高于100的蒸汽杀灭微生物的方法称为高压蒸汽灭菌法。其原理是水的沸点随着蒸汽压力的增加而升高，加大压力是为了提高水的沸点。在密闭系统中，蒸汽压力增高，温度也随着增高，从而提高杀菌效力。,第二节微生物检验的基本技术微生物的灭菌方法。这是一种最简便,第二节微生物检验的基本技术,间歇灭菌法。利用常压蒸汽反复多次进行灭菌的方法称为间歇灭菌法。该方法主要适用于一些不宜高压灭菌的培养基的灭菌，如糖类、明胶、牛奶等。此方法是在常压下加热到100，维持3060min，以杀死微生物营养体，冷却后，于适宜温度(37)下培养1天，次日再用相同的方法灭菌，如此反复3次，即可达到灭菌目的。适温培养的目的是诱导未死亡的芽孢萌发成耐热性差的营养体，便于在下次灭菌时将其杀灭。其缺点是手续麻烦，时间长。,巴斯德消毒法。该方法适用于在高热下易被破坏营养成分的食品，如牛奶、啤酒、果酒和酱油等。该方法把液体物质在较低的温度下消毒，既可杀死液体中致病菌的营养体，又不破坏液体物质中原有的营养成分。典型的温度时间组合有两种：63，30min；72，15s。巴斯德消毒法在食品工业上常被采用。,第二节微生物检验的基本技术 间歇灭菌法。利用常压蒸汽反复,第二节微生物检验的基本技术,(2)煮沸消毒法直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15min，即可杀死细菌的全部营养体和部分芽孢。,(3)紫外线杀菌法紫外线是一种短波光，大剂量为杀菌剂，小剂量为诱变剂。,(4)过滤除菌法过滤除菌法是指将含菌的液体或气体通过一个称为细菌滤器的装置，使杂菌受到机械的阻力而留在滤器或滤板上，从而达到去除杂菌的目的。,二操作环境无菌要求及消毒方法,1.无菌室,(1)无菌室使用要求,第二节微生物检验的基本技术(2)煮沸消毒法直接将要消毒的,第二节微生物检验的基本技术,1)工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用(灭过菌)的工作服、鞋、帽子、口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。,2)无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。,3)处理和接种食品标本时，不得随意出入无菌间，若需要传递物品，则可通过传递窗传递。,4)在检验工作中将样品及无菌物打开后，操作者在操作时应与样品及无菌物保持一定距离。,5)禁止在无菌室内谈笑，尽量少走动。,6)定期对实验室内的沉降菌进行计数，以检查无菌实验室内微生物的生长繁殖动态。,第二节微生物检验的基本技术1)工作人员进入无菌室前，必须用,第二节微生物检验的基本技术,(2)无菌室消毒要求,1)紫外线杀菌：每次打开紫外灯2030min，就能达到空间杀菌的目的。,2)甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40甲醛10mL、高锰酸钾8mL，进行熏蒸。,3)化学消毒剂喷雾：根据无菌室的净化情况和空气中含有的杂菌种类，可采用不同的化学消毒剂。,2.超净工作台,三检验操作的无菌要求及技术,1.操作人员无菌操作的整体要求,1)动作要轻，不能太快，以免搅动空气而增加污染；应轻取轻放玻璃器皿，以免其破损后污染环境。,第二节微生物检验的基本技术(2)无菌室消毒要求1)紫外线,第二节微生物检验的基本技术,2)操作应在近火焰区进行。,3)接