单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,新版微生物的实验室培养,新版微生物的实验室培养,第1页,微生物包含哪五类：,病毒,细菌,放线菌,真菌,原生动物,特点：,结构都相当简单,个体多数十分微小,.,通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有甚至没有细胞结构,.,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,一、基础知识：,(,一,),微生物,新版微生物的实验室培养,第2页,菌落：,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有一定形态结构子细胞群体，叫做菌落,。,菌落是判定菌种主要依据。,新版微生物的实验室培养,第3页,菌落,细菌菌落特征因种而异,新版微生物的实验室培养,第4页,思索：,1,什么是培养基,?,2,依据不一样划分标准培养基有哪些种类？,3,培养基普通含哪些营养物质？,4,什么是选择培养基，请举例,5,什么是判别培养基？请举例,新版微生物的实验室培养,第5页,一、基础知识：,（二）培养基,大家按照微生物对营养物质不一样需求，配置出供生长繁殖营养基质。,（1）按物理状态分：,固体培养基,和,液体培养基、半固体培养基,。其中固体培养基用于菌种保留及分离、判定菌落、活菌计数等，半固体培养基可观察微生物运动，液体培养基常见于发酵工业。,（2）按功效分：,选择培养基,和,判别培养基,。,（3）按成份分：,天然培养基,和,合成培养基,。,1.,培养基类型和用途,新版微生物的实验室培养,第6页,选择培养基,加入青霉素培养基,:,加入高浓度食盐培养基,:,不加氮源无氮培养基,:,不加含碳有机物无碳培养基,:,将允许特定种类微生物生长，,同时抑制或阻止其它种类微生物,生长培养基,两种方法：,新版微生物的实验室培养,第7页,判别培养基,（培养基加入某种化学药品或指示剂而与目标菌株代谢产物发生特定颜色反应。,判别培养基,：,如在检验饮用水中是否含有大肠杆菌培养基中加入伊红,美蓝指示剂后，伊红,-,美蓝就会与大肠杆菌代谢中产生有机酸反应，,生成深紫色络合物，并带有金属光泽。,新版微生物的实验室培养,第8页,2,、原理：,刚果红染色法（,CR,）,刚果红,纤维素,红色复合物,纤维素酶,纤维素分解菌,红色消失,出现透明圈,透明圈,新版微生物的实验室培养,第9页,不论哪种培养基，普通都含有,水,、,碳源,、和,氮源,、,无机盐,、,等,营养物质，,另外还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,比如,:,生长因子,(,即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气,、,二氧化碳,、,渗透压,等,要求。,培养基成份,新版微生物的实验室培养,第10页,二、消毒和灭菌,1,消毒和灭菌区分,2,常见消毒方法并举例,3,常见灭菌方法并举例,新版微生物的实验室培养,第11页,1,、,煮沸消毒法,:,100,煮沸,5-6min,2,、巴氏消毒法：,70-75,下煮,30min,或,80,下煮,15min,3,、化学药剂消毒法,:,用,75%,酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒,;,氯气消毒水源,4,、紫外线消毒,(1),消毒方法：,3.,常见消毒与灭菌方法,新版微生物的实验室培养,第12页,1,、灼烧灭菌,2,、干热灭菌：,160-170,下加热,1-2h,。,3,、高压蒸气灭菌：,100kPa,、,121,下维持,15-30min.,(2),灭菌方法：,新版微生物的实验室培养,第13页,三、试验操作,1.,制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）,新版微生物的实验室培养,第14页,1,计算,2,称量,3,溶化,4,调,pH,：,5,分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引发污染。分装三角烧瓶量以不超出三角烧瓶容积二分之一为宜。,6,灭菌,7,倒平板,操作步骤,新版微生物的实验室培养,第15页,倒平板技术,新版微生物的实验室培养,第16页,2、纯化大肠杆菌,接种方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,平板划线法,:,经过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线操作,将聚集菌钟逐步稀释分散到培养基表面,.,在数次画线后,能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体,这就是菌落,.,微生物接种技术,新版微生物的实验室培养,第17页,新版微生物的实验室培养,第18页,新版微生物的实验室培养,第19页,新版微生物的实验室培养,第20页,微生物恒温培养,微生物恒温培养,新版微生物的实验室培养,第21页,【,典例解析,】,例,1,关微生物营养物质叙述中，正确,A.,是碳源物质不可能同时是氮源,B.,凡碳源都提供能量,C.,除水以外无机物只提供无机盐,D.,无机氮源也能提供能量,答案：,D,新版微生物的实验室培养,第22页,编号,成份,含量,粉状硫,10g,（,NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,例,3,右表是某微生物培养基成份，请据此回答：,（,1,）右表培养基可培养微生物类型是,。,（,2,）若不慎将过量,NaCl,加入培养基中。,如不想浪费此培养基，可再加入,.,自养型微生物,含碳有机物,新版微生物的实验室培养,第23页,（,3,）若除去成份，加入（,CH2O,），该培养基可用于培养,。,（,4,）表中营养成份共有,类。,（,5,）不论何种培养基，在各种成份都溶化后分装前，要进行是,。,（,6,）右表中各成份重量确定标准是,。,（,7,）若右表培养基用于菌种判定，应该增加成份,。,固氮微生物,3,调整,pH,依微生物生长需要确定,琼脂（或凝固剂）,新版微生物的实验室培养,第24页,二 尿素细菌分离,选择性培养基：将允许特定种类微生物生长，,同时抑制或阻止其它种类微生物,生长培养基。,新版微生物的实验室培养,第25页,培养基配方三,KH,2,PO,4,1.4g Na,2,HPO,4,2.1g,MgSO,4,7H,2,O 0.2g,葡萄糖,10.0g,尿素,1.0g,琼脂,15.0g,培养基配方二,KH,2,PO,4,3g,MgSO,4,7H,2,O 3g,NaNO,3,2g,葡萄糖,10.0g,尿素,3.0g,琼脂,15.0g,培养基配方一,KH,2,PO,4,3g,Na,2,HPO,4,1.4g,NaNO,3,2g,MgSO,4,7H,2,O 3g,葡萄糖,10.0g,琼脂,15.0g,新版微生物的实验室培养,第26页,二 统计菌落数目,思索：,1,用什么方法？,2,普通选择菌落数在什么范围内？,平板,1,平板,2,平板,3,平均数,242,250,310,平板,1,平板,2,平板,3,平均数,202,86,198,平板,1,平板,2,平板,3,平均数,21,32,25,平板,1,平板,2,平板,3,平均数,102,98,120,新版微生物的实验室培养,第27页,三 设置对照,目标：排除试验组中非测试原因对试验结果影响，,提升试验结果可信度。,请设计：,1,判断培养基中是否有杂菌污染,2,判断选择培养基是否有筛选作用,新版微生物的实验室培养,第28页,纤维素酶：,纤维素酶：,C,1,酶,C,X,酶,葡萄糖苷酶,纤维素,C,1,酶、,C,X,酶,纤维二糖,葡萄糖苷酶,葡萄糖,组成上：复合酶,功效上：水解酶,课题,3,分解纤维素微生物分离,新版微生物的实验室培养,第29页,试验设计,土壤取样,选择培养,梯度稀释,涂布判别,选圈菌落,新版微生物的实验室培养,第30页,以下关于细菌叙述，错误是（）,A,硝化细菌能以,NH3,作为氮源和能源物质,B,一些细菌能够利用光能固定,CO2,合成有机物,C,生长因子是一些细菌生长过程中需要,额外补充营养物质,D,含伊红和美蓝试剂培养基不能用来签,别牛奶中大肠杆菌,D,新版微生物的实验室培养,第31页,