单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,特殊显微镜的使用(3),荧光显微镜的原理及其应用,实验目的,掌握荧光显微镜的原理和使用方法,二、实验原理,荧光显微镜(fluorescence microscope)是荧光显微,术的基本装置。荧光显微术是利,定波长的光,通常是波长短的紫外光和蓝紫光)照射被检样,品,激发荧光物质发出可见的荧光。通过物镜和,目镜的成像、放大,以供检视和拍摄。荧光显微,镜具特殊光源,提供足够强度和波长的激发光,诱发荧光物质发出荧光。视场中所见的像,主要,是样品的荧光映像,特殊显微镜的使用(3),1,某些物质经波长较短的光线照射后,分子被激活,吸收能,呈激发态。其能量部分转化为热量或,用于光化学反应外,相当一部分则以波长较长的,光能形式辐射出来,这种波长长于激发光的可见,光称作荧光。生物体内有些物质受激发光照射后,接发出的荧光,称为自发荧光(如叶绿体中,的叶绿素分子受激发所发出的火红色的荧光);,本身不发荧光,在吸收荧光染料之后所,发出的荧,菱絮次霛誚、當用的光料积持￥橙,细胞内大部分物质经短光波照射后,可发出较弱,的自发性荧光。有些细胞成分与能发出荧光的有,机化合物荧光柔料结合。激发后呈现一定颜,色的荧光,借以对组织进行细胞化学的观察和研,究,某些物质经波长较短的光线照射后,分子被激活,2,2.1荧光显微镜的基本装置及其光路,荧光显微镜因制造厂家、型号的不同,结构,各异,但主要构件,基本相同,2.1.1光源:采用高压汞灯。汞灯能以最小的表面,发出最大数量的紫外光和蓝光,且光亮度大,度,汞灯的构,光黯体,中间为一球形石英玻璃,有两个钨电极,内充汞滴和少量氩氖,汞灯装在牢固的灯室中,有调中、聚焦和集光装,置。使用中严禁频繁启闭,点亮后欲暂停使用时,不可切断电源,可用光阀阻断光路,后,不能立刻点亮,经510min,汞灯冷却后再,通电点亮。,HBO200W汞灯的发射光谱为200600nm,其中在365nm和435nm处有两个高峰。,2.1荧光显微镜的基本装置及其光路,3,2.2.2滤色镜系统:荧光显微术的滤色镜,按用途,或功能,主要分为下列两类,激发滤色镜(exciter filter):激发滤色镜的作,用,在于为被检样品的荧光染料提供最佳波段的,激发光。荧光染料均有一定的吸收光谱(激发峰,值),利用滤色镜对光线选择吸收的能力,选用,其透射光谱,恰为荧光染料的最大吸收光谱(激,发高峰)的激发滤色镜,以便从汞灯发出的广谱,光波中,选择透过最宜波段的光线供用。,激发滤色镜加放于汞灯和二向色镜(dichotic,mirror)之间,物镜之前。滤镜的型号不同,数量,较多,可按不同需要选用,2.2.2滤色镜系统:荧光显微术的滤色镜,按用途,4,阻断滤色镜(barrier filter):阻断滤色镜,位于物镜之上,二向色镜和目镜之间,用,以阻断或吸收光路中的激发光或某些波长,较短的光线,以防伤害眼睛,使荧光透过,选用的原则,以能完全阻断或吸收波长短,于所需荧光的光线,并透过样品发出的荧,光。所以,阻断滤色镜的选用,应视荧光,染料的荧光光谱而定,以能最大限度地透,过荧光和阻断短波光,阻断滤色镜(barrier filter):阻断滤色镜,5,荧光显微镜原理和使用方法课件,6,荧光显微镜原理和使用方法课件,7,荧光显微镜原理和使用方法课件,8,荧光显微镜原理和使用方法课件,9,荧光显微镜原理和使用方法课件,10,荧光显微镜原理和使用方法课件,11,荧光显微镜原理和使用方法课件,12,荧光显微镜原理和使用方法课件,13,荧光显微镜原理和使用方法课件,14,荧光显微镜原理和使用方法课件,15,荧光显微镜原理和使用方法课件,16,荧光显微镜原理和使用方法课件,17,荧光显微镜原理和使用方法课件,18,荧光显微镜原理和使用方法课件,19,荧光显微镜原理和使用方法课件,20,荧光显微镜原理和使用方法课件,21,荧光显微镜原理和使用方法课件,22,荧光显微镜原理和使用方法课件,23,荧光显微镜原理和使用方法课件,24,荧光显微镜原理和使用方法课件,25,