单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,无忧,PPT,整理发布,P,o,w,e,r,B,a,r,中国专业PPT设计交流论坛,植入前遗传学诊疗新进展,preimplantation genetic diagnosis(PGD),s latest progress,主讲：吴振楠 041101,组员：王芳，吴明瑶,植入前遗传学诊断,第1页,PGD定义，应用及分类,植入前遗传学诊疗(preimplantation genetic diagnosis/PGD)是,辅助生殖技术,与遗传学诊疗技术相结合一个植入前诊疗技术，为遗传病高危夫妇提供尽可能大选择范围，把对一些疾病发觉和诊疗时机提前到胚胎发育最早阶段，阻断一些单基因疾病及染色体异常疾病发生是辅助生殖技术一个主要方面。,PGD常规方法,当前应用于PGD常规方法有,聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR),和,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridizationFISH),植入前遗传学诊断,第2页,惯用PCR类型有巢式PCR、多重PCR、荧光PCR、荧光定量PCR等。PCR扩增后，用于后续基因诊疗方法主要有：依据特异性目标条带有没有做出诊疗，主要用于由基因缺失而引发疾病诊疗。多态性分析，即在致病基因附近寻找几个与其紧密连锁DNA多态性位点。经过连锁分析进行诊疗和携带者检测。等位基因寡核苷酸特异探针(allelespecific oligonucleotide。ASO)斑点杂交及反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)。单链构象多态性(singlestrand conformation polymorphism analysis。SSCP)及变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gelelectrophoresis，DGGE)等,植入前遗传学诊断,第3页,FISH是用带有荧光标识特异性探针与染色体结合后，在荧光显微镜下观察特定染色体情况。惯用于PGDFISH探针有染色体记数探针(CEP)、染色体特异单一序列探针(CSI)等，针对不一样需要能够选取不一样探针。,植入前遗传学诊断,第4页,除了上述方法外，一些新方法、新技术不停出现并应用到临床PGD中。,一、微阵列比较基因组杂交,二、微测序技术,三、多重置换扩增,植入前遗传学诊断,第5页,一、微阵列比较基因组杂交,微阵列比较基因组杂交(comparative genomie hybridization，CGH)CGH原理是提取待测与对照基因组DNA，标识不一样荧光后以1：1百分比混合，与正常人中期染色体杂交。依据荧光不一样判定待检测基因组中对应序列拷贝数改变。CGH可检测出一些不常见异常，如5号与9号染色体三体，其发生率在l 000次自然流产中不足1。这也间接说明，一些未被识别非整倍体异常一样对胚胎发育含有致死性。,CGH在PGD应用有两种方式：单卵裂球CGH和第一极体CGH.,因CGH需要3-4 d才能出结果，考虑到体外受精治疗周期中移植窗口期限制,拟施行CGH卵裂球在活检后就需要对胚胎进行冻存，所以冻融后胚胎存活数目标下降是当前单卵裂球CGH主要缺点（缺点）。,而第一极体在胞浆内配子注射后取出，即当日，这么便有足够时间等候CGH结果以挑选正常卵母细胞受精胚胎。这种对卵母细胞间接细胞遗传学分析，可检出在减数分裂I期分离过程异常造成非整倍体，如三倍体或单倍体等，这也正是造成早期流产主要原因。第一极体CGH即使防止了胚胎冻融（优点），但对第一极体检测不能检测卵母细胞减数分裂期及精源性异常。另外，第一极体CGH不能检测出嵌合性胚胎，但经过对第二极体检测则能部分填补这点缺点。（缺点）,植入前遗传学诊断,第6页,二、微测序技术,微测序技术，又称为单核苷酸引物延伸法(single nucleotide primer extension，SnuPE)，是一个有各种用途新技术，已经广泛应用于法医学、人口遗传学等领域。,其原理是设计一对针对突变位点特异性引物，,退火,后直接结合于突变位点附近，同时加入与野生型及突变型模板互补一个荧光双脱氧核苷酸，分别用不一样颜色标识4种双脱氧核苷酸，经过多轮延伸与链终止过程，产生许多带有荧光标识核苷酸片段，经毛细管电泳从而实现对模板序列推导。,微测序技术含有快速、敏感特点，结合毛细管电泳技术能够一次实现对多个突变位点检测而实现高通量分析。微测序技术开始主要用于检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)突变位点。,植入前遗传学诊断,第7页,三、多重置换扩增,多重置换扩增(multiple displacementamplification，MDA),MDA是一个基于酶促反应而不依赖热循环DNA体外等温扩增技术，可用于质粒、细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)及全基因组DNA扩增。认为用MDA进行全基因组扩增(whole genome amplification，WGA)是当前效率最高全基因组扩增方法。基因组中不一样位置各个位点都能经过MDA实现相同扩增效率。Hellani等报道首例应用MDA诊疗,地中海贫血,及囊眭纤维化PGD。以后用于其它疾病报道逐步增多，如Marfan综合征等。,MDA缺点有嵌合性DNA重排，包含序列倒位、序列重新拼结等。用于PGD时，MDA主要缺点是等位基因脱手13(allele dropout，ADO)。不一样位点ADO大致在1336左右。即使ADO发生率较高，但误诊风险仅为002，这是因为在同时分析多个诊疗性相关位点情况下，即使MDA有较高ADO率，但不可能同时干扰全部诊疗位点，从而确保其有较低误诊率。,植入前遗传学诊断,第8页,PGD安全性,PGD是建立在IVF（体外受精）基础上一项技术。除了常规体外操作外，胚胎还受到在配子或胚胎时期取材所受机械或化学刺激，以及胚胎时期取材造成胚胎物质降低等方面影响。表观遗传学研究表明，,遗传印迹,甲基化等表遗传修饰主要发生于配子发育和种植前阶段，而此期正是体外操作阶段，会干扰基因组印迹建立与维持，从而造成表观遗传学疾病。,Nekkebroeck等比较PGD，IVF和自然妊娠(natural conception，NC)单胎出生儿童2岁时在心理行为、运动发育方面情况。结果显示，PGD出生儿童与IVF或NC出生儿童在上述方面无差异，PGD对其无影响。后续研究又比较三者在情感、语言习以及孩子父母在社会压力、健康情况等方面情况，三者间也无显著差异。,植入前遗传学诊断,第9页,THANK YOU FOR LISTENLING!,植入前遗传学诊断,第10页,IVF/in vitro fertilization(试管婴儿、体外受精)又称试管婴儿，是指分别将卵子与精子取出后，置于试管内使其受精，再将胚胎前体-受精卵移植回母体子宫内发育成胎儿。试管婴儿是用人工方法让卵子和精子在体外受精并进行早期胚胎发育，然后移植到母体子宫内发育而诞生婴儿,。,一例试管婴儿,植入前遗传学诊断,第11页,退火（annealing）,两条单链多核苷酸经过互补碱基之间氢键形成双链分子过程。可发生在同一起源或不一样起源核酸链之间，能够形成双链DNA分子、双链RNA或DNA-RNA杂交分子,。,植入前遗传学诊断,第12页,地中海贫血（Thalassemia）。是一组遗传性溶血性贫血。其共同特点是因为珠蛋白基因缺点使血红蛋白中珠蛋白肽链有一个或几个合成降低或不能合成,。,植入前遗传学诊断,第13页,遗传印记（genetic imprinting）,定义：,传给子代亲本基因在子代中表示情况取决于基因来自母本还是父本现象。该现象在合子形成时已经决定，是包括基因表示调控遗传。当前发觉造成这种遗传差异有DNA甲基化、假基因作用、染色质构象等原因,。,植入前遗传学诊断,第14页,