单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,*,流式细胞分析在临床血液学中的应用,西南医院检验科,黄君富,1,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,流式细胞分析在临床血液学中的应用西南医院检验科 黄君,1、白血病免疫分型,FAB主要依据形态学和细胞化学进行分型。,MIC方案在FAB方案基础上结合了免疫学和细胞遗传学。（M：形态学 I：免疫学 C：细胞遗传学）,2,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,1、白血病免疫分型FAB主要依据形态学和细胞化学进行分型。,免疫分型与FAB的关系,FAB分型受检查者的主观因素影响大，符合率有一定限制。,免疫标志能够提供正常细胞在演变成恶性肿瘤过程中细胞基因及抗原标志发生变化的信息，而这种变化常常是细微的，以至于常规FAB方法不能分辨。,免疫分型是MIC的重要组成部分，它是对FAB分型的补充。,3,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,免疫分型与FAB的关系FAB分型受检查者的主观因素影响大，符,属于同一种FAB型的病例，可能具有不同的免疫表型。,免疫表型在AML和ALL上与FAB的不一致并不减低免疫分型在白血病患者的应用价值，相反，免疫表型使我们对血液肿瘤细胞的生物学特征有了更深入和更精确的认识。,免疫表型对肿瘤的诊断、治疗策略的制定、预后判断及肿瘤发病机制的研究都具有重要作用。,4,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,属于同一种FAB型的病例，可能具有不同的免疫表型。4Keyl,免疫分型的两个阶段,根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。,根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B,5,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,免疫分型的两个阶段根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系,急性白血病的四大免疫类型,单表型急性白血病,表达某一个系列抗原为主的急性白血病,双表型/双克隆急性白血病,未分化型急性白血病,6,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,急性白血病的四大免疫类型单表型急性白血病6Keylab of,急性白血病的免疫学系列分型,类 型,系 列 积 分,B系 T系 粒单系 巨核系 红系,1.单表型,纯B-ALL 2 0 0 0 0,纯T-ALL 0 2 0 0 0,纯AML 0 0 2 0 0,纯AML-M6 0 0 2 2 2,纯AML-M7 0 0 2 2 2,7,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,急性白血病的免疫学系列分型7Keylab of Medici,急性白血病的免疫学系列分型,类 型,系 列 积 分,B系 T系 粒单系 巨核系 红系,2.单表型为主,My,+,B-ALL 2 0 2 0 0,My,+,T-ALL 0 2 2 0 0,Ly,+,AML 2 2 2 2 2,T,+,B-ALL 2 2 0 0 0,注:My,+,:,髓系抗原阳性;Ly,+,:淋系抗原阳性,8,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,急性白血病的免疫学系列分型8Keylab of Medici,急性白血病的免疫学系列分型,类 型,系 列 积 分,B系 T系 粒单系 巨核系 红系,3.,双表型/双克隆型,T/B 2 2 0 0 0,T/M 0 2 2 0 0,B/M 2 0 2 0 0,4.,未分化型,AUL 2 2 2 2 2,9,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,急性白血病的免疫学系列分型9Keylab of Medici,B细胞系ALL的免疫分型,亚型,CD19,CD20,HLA-DR,CD10,CyIg,SmIg,FAB分型,早前B-ALL,+,+,L1,L2,前B-ALL,+,/+,+,+,+,L1,普通B-ALL,+,+/,+,+,L1,L2,成熟B-ALL,+,+,+,+/,/+,+,L3,10,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,亚型CD19CD20HLA-DRCD10CyIgSmIg,T细胞系ALL的免疫分型,亚型 CD7 CD2 TdT FAB分型,早前T-ALL +L1,L2,T-ALL +L1,L2,11,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,T细胞系ALL的免疫分型11Keylab of Me,免疫分型的价值,确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和ALL的分化阶段。,鉴定AML的特征。,对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型。,诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、M,0,等。,12,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,免疫分型的价值确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和,诊断双表型/混合细胞型急性白血病。,鉴别诊断ALL伴有髓系抗原表达（My+）或AML伴有淋系抗原表达（Ly+）。,鉴别急性白血病与其他造血系统和非造血系统恶性肿瘤。,根据一些特殊的免疫表型特征诊断与某核型异常相关的亚型。如：M3/t(15;17);M2/t(8;21);M4Eo/inv(16)等。,13,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,诊断双表型/混合细胞型急性白血病。13Keylab o,慢性白血病免疫分型,慢性粒细胞性白血病主要用于急变期的分型（同急性白血病免疫分型）。,慢性淋巴细胞性白血病除了鉴别是T还是B淋巴细胞型外，还用于与反应性淋巴细胞增多症的鉴别，以及与部分淋巴瘤的鉴别诊断。,一些少见的白血病如：毛细胞白血病、浆细胞白血病、恶性组织细胞性白血病等的诊断与鉴别诊断。,14,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,慢性白血病免疫分型慢性粒细胞性白血病主要用于急变期的分型（,2、再生障碍性贫血的研究,AA是一组由不同发病机制介导的骨髓造血功能障碍综合征，其发病机制复杂，目前尚未完全明了，但越来越多的临床和实验证据表明，免疫介导的造血抑制AA最常见的病理机制之一。而且，具有免疫表型异常（如：CD4/CD8倒置，CD8+、活化T细胞或,TCR,异常增高等）的患者，临床表现相对严重，但免疫抑制治疗相对有较好的疗效。,15,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,2、再生障碍性贫血的研究 AA是一组,常用的淋巴细胞表面标志物,淋巴细胞亚群,T细胞：,CD3,+,、,TCR,/,CD4,+,(Th/Ti),CD8,+,(Ts/Tc),B细胞：,CD19,+,NK细胞：,CD3,-,CD16,+,CD56,+,16,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,常用的淋巴细胞表面标志物淋巴细胞亚群16Keylab of,淋巴细胞亚群细分：,T细胞：,Ts：CD8,+,CD28,-,Tc：CD8,+,CD28,+,Th：CD4,+,CD29,+,Ti：CD4,+,CD45RA,+,B细胞：,B1：CD5,+,CD19,-,B2：CD5,+,CD19,+,17,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,淋巴细胞亚群细分：17Keylab of Medicine,活化淋巴细胞亚群：,活化总T细胞：CD3,+,/HLADR,+,静止总T细胞：CD3,+,/HLADR,-,活化CD4+细胞：CD4,+,/HLADR,+,活化CD8+细胞：CD8,+,/HLADR,+,活化诱导分子：CD69,白细胞介素2低亲和力受体：CD25,CD25,+,/CD3,+,：活化T细胞,CD25,-,/CD3,+,：静止T细胞,18,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,活化淋巴细胞亚群：18Keylab of Medicine,根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同,CD4+:,Th1:CD4+IFNr+,Th2:CD4+IL4+,Th0:CD4+IFNr+IL4+,CD8+:,Tc1:CD8+IFNr+,Tc2:CD8+IL4+,Tc0:CD8+IFNr+IL4+,19,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同 CD4+:19Ke,Th1,细胞：,介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。,Th2细胞：,介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1,和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。,Th1/Th2,细胞平衡偏移多见于,：,感染症、自身免疫病、过敏症、排斥反应、免疫缺陷、肿瘤恶化等。检测Th1/Th2细胞平衡主要是分析疾病发生发展的状况，为临床调整Th1/Th2细胞平衡偏提供正确的治疗依据,。,20,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细,3、血栓与止血,血小板糖蛋白,血小板质膜糖蛋白,GPa：CDw49b GPa：CD61,GPb：CD42b GP：CD36,GPc：CDw49f GP：CD42a,GPa：CD29 GPb：CD41,GPa：CD31,血小板颗粒膜糖蛋白,颗粒：CD62P(GMP140、PADGEM),颗粒：溶酶体完整膜糖蛋白 CD63,溶酶体相关膜糖蛋白-1 LAMP-1,溶酶体相关膜糖蛋白-2 LAMP-2,21,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,3、血栓与止血血小板糖蛋白21Keylab of Medic,活化血小板检测,CD62P，CD63,GPb/a复合物(CD41/61),GP(CD36),PAC-1,Thrombospondin,血小板内钙离子,22,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,活化血小板检测22Keylab of Medicine,遗传性血小板功能缺陷性疾病诊断,巨血小板综合症(BSS),GP Ib-,(CD42a,/,CD42b)缺陷或缺乏,血小板无力症(CT),GP,b/a(CD41,/,61)缺陷或缺乏,贮存池疾病,-SPD下降,23,Keylab of Medicine School of Su Zhou University,遗传性血小板功能缺陷性疾病诊断23Keylab of Med,4、CD34的绝对计数,随着近年来外周血造血干细胞移植病例的日益增多，外周血造血干细胞的流式定量越来越成为一个突