,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,二、实验原理,1.血球计数板法,利用计数板上有,固定体积和精确刻度,的两个计数室进行计数，是常用的在显微镜下对,细胞数目,进行计数的方法。,具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。,（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm盖上盖玻片后，容积为0.1mm,3,。,（2）计数室刻度的规格,1625型：,16个中方格，每个中方格分25个小格；,2516型：,25个中方格，每个中方格分16个小格,。,二、实验原理,1,计数室,计数室,2,微生物实验显微镜直接计数法课件,3,（3）计数和计算方法,我们采用的是2516的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：,计算：1个计数室的总菌数=A/525B,1g（ml）样品中的总菌数=A/525101000B,=50,000AB个,5个方格的总菌数,稀释倍数,（3）计数和计算方法5个方格的总菌数稀释倍数,4,2.测定生长量的其他方法,平板菌落计数法、干重法和比浊法等。,（1）,平板菌落计数法,（2）干重法（,适合浓度较高的样品,）,取一定量菌液中,离心或过滤，分离菌体,烘干至恒重(温度可采用105、,100,或80),称重。一般干重为湿重的10%,-20%,。,2.测定生长量的其他方法,5,微生物实验显微镜直接计数法课件,6,（3）比浊法,在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，,菌数越多，吸光值越大。,因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。,该法适合测定浓度较高的样品。,（3）比浊法,7,三、实验材料,1.菌种：酵母菌（,Saccharomyces cerevisiae,）悬液(已稀释100倍),2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。,四、实验步骤,1.检查计数板,检查计数板是否有破损。,2.镜检计数室,在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。,三、实验材料,8,3.加样品,在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。,注意不可有气泡产生。,3.加样品,9,4.显微镜计数,静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。,5.清洗血球计数板,计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。,4.显微镜计数,10,五、注意事项,1.加样前,先摇匀菌液,，计数室中不可有气泡产生；,2.,菌液浓度,以每小格有5-10个菌体为宜。,3.计数时，,格线上的菌体,只数上方和右边线上的；,4.如遇酵母出芽，,芽体大小达到母细胞的一半时,，作为两个菌体计算；,5.,清洗计数板时,切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。,6.一个样品要从,两个计数室中计得的平均值,来计算。,五、注意事项,11,特别注意,血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！,特别注意 血球计数板均有编号，一人一个，务必,12,精品课件,！,精品课件！,13,精品课件,！,精品课件！,14,显微直接计数结果,六、作业,100,100,5个中格总数,显微直接计数结果六、作业1001005个中格总数,15,