单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五章,免疫,凝集试验 (agglutination test),第五章 免疫凝集试验 (,1,定义：,颗粒性抗原,(可溶性抗原与载体颗粒,结合成致敏颗粒后)与,相应抗体,发生,特,异性,反应，在适当,电解质,存在下，形成,肉眼,可见,的,凝集块,。,第一节 概述,定义：第一节 概述,2,发生机制：,特异性；分两阶段进行。,IgM的凝集作用,IgG。,不完全抗体：,与相应抗原结合，但不形,成可见的凝集现象。,主要为IgG类抗体。,发生机制：特异性；分两阶段进行。,3,凝集反应的类型：,直接凝集反应。,间接凝集反应。,Coombs试验。,凝集反应的应用：,抗原或抗体的,定性,检测,抗体的,半定量,检测,凝集反应的类型：直接凝集反应。,4,第二节,直接,凝集反应,（,direct agglutination test）,定义,：,颗粒性抗原+相应抗体肉眼可见的凝集块,其中的抗原,(agglutinogen),：,凝集原,(细菌,RBC,等),抗体,(agglutinin)：,：,凝集素,常用方法,：,玻片法：,试管法：,微量血凝反应板法：,第二节 直接凝集反应（direct agglu,5,直接凝集反应,凝集原,凝集素,直接凝集反应凝集原凝集素,6,一、玻片凝集试验,(slideagglutination test),玻片法,：,定性,试验。,常用,已知Ab,，测定,未知Ag,(,待检样本,),。,结果判读：,已知Ab,未知Ag,凝集，阳性(+)。,不凝集，阴性,(-),。,方法评价：,特异性强;简便、快速;敏感度,低,。,应用：,ABO血型鉴定。,细菌的鉴别与分型,。,一、玻片凝集试验(slideagglutination,7,抗 A,抗 B,1.已知抗体,2.未知抗原 (待检RBC),3.结果：,不凝集,4.结论：,凝集,受检者血型为：,A型,ABO血型的鉴定,抗 A抗 B1.已知抗体2.未知抗原 (待检RBC)3.结,8,细菌的鉴别,材料：,玻片1张/1人，待检菌，已知诊断血清，接种环,方法：,轻摇玻片，12分钟后观察,结果判定：,出现乳白色凝集块属阳性反应,结论：,待检菌为？,NS待检菌诊断血清,NS待检菌,细菌的鉴别材料：玻片1张/1人，待检菌，已知诊断血清，接种环,9,二、试管凝集试验,(tube agglutination test),试管法,：,半,定,量,试验。,常用,已知Ag,，测定,未知 Ab,(,待检血清,),。,方法评价：,特异性易受影响；敏感性不高。,应用：,多用以测定,抗体的含量,（,效价、滴度,）。,肥达氏反应,、,外斐氏反应,、,交叉配血试验,。,二、试管凝集试验(tube agglutination,10,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,弃掉0.5,试管凝集试验原理,结果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,0.50.50.50.50.5弃掉0.5,11,结果观察：,观察管底是否有凝集现象。,完全凝集（）,：凝集块完全沉于管底，液体澄清。,75%凝集（）,：凝集块沉于管底，液体稍混。,50%凝集（）,：凝集块沉于管底，液体混浊。,以上结果均为,阳性,，均出现,肉眼明显可见的凝集,。,25%凝集（弱阳性）,：液体混浊。,阴性：,无变化。,结果判读：,以产生,明显凝集,现象（,“”）,的,最高稀释度,作为,Ab,的效价（含量）。,结果观察：观察管底是否有凝集现象。,12,间接凝集试验：,用人工方法将可溶性抗原(或,抗体）,吸附或偶联于载体,上，使之成为,致敏,载体颗粒,，再与相应抗体（或抗原）作用，,在适宜电解质的参与下，出现的凝集现象。,优点：,敏感度比直接凝集反应,高,28倍,，,亦明显高于沉淀反应。,第三节 间接凝集反应,(indirect agglutination test),间接凝集试验：用人工方法将可溶性抗原(或优点：敏,13,载体(carrier):,试验体系中,与免疫无关,的颗粒。,对载体的要求：,不溶于水，在NS中性质稳定，无化学、血清学活性。,大小均一，短时间内不致下沉。,能够直接吸附或偶联抗原或抗体，且不影响其活性。,致敏：,抗原(或抗体)偶联于颗粒表面的过程。,致敏颗粒,（sensitized particle),:吸附有已知抗,原或抗体的颗粒。,载体(carrier):试验体系中与免疫无关的颗粒。对载体的,14,载体,可溶性抗原,致敏,致敏颗粒,NS,凝集颗粒,间接凝集试验示意图,间接凝集试验示意图,载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒 间,15,一、常用载体种类及其处理方法,红细胞：,新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。,聚苯乙烯胶乳颗粒,：,可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒。,活性炭：,SPA：,一、常用载体种类及其处理方法红细胞：,16,二、间接凝集反应类型,根据致敏用的试剂和反应方式分为：,2.反向间接凝集试验,(reverse indirect agglutination test,),3.间接凝集抑制试验,(,indirect agglutination inhibition test,),1.(正向)间接凝集试验,（indirect agglutination test),4.协同凝集试验,(,coagglutination test,),二、间接凝集反应类型根据致敏用的试剂和反应方式分为：2.反向,17,载体,可溶性抗原,致敏,致敏颗粒,NS,凝集颗粒,（正向）间接凝集试验,用特异性,抗原致敏载体,，检测标本中的相应抗体的方法。,待测抗体,结果判读,：凝集，阳性(+)。,不凝集，阴性(-)。,载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒,18,反向间接凝集试验,用特异性,抗体致敏载体,，检测标本中的相应抗原的方法。,载体,已知抗体,致敏,致敏颗粒,NS,凝集颗粒,待测抗原,结果判读,：,凝集，阳性(+)。,不凝集，阴性(-)。,反向间接凝集试验用特异性抗体致敏载,19,间接凝集抑制试验,待测抗原,已知抗体,特异结合,抗原抗体复合物,NS,致敏颗粒,用,抗原致敏载体及相应抗体,作为诊断试剂，用于检测标本中是否存在与致敏载体相同的抗原。,无凝集颗粒为,阳性,间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体特异,20,间接凝集抑制试验,待测抗原,已知抗体,无结合,抗原抗体分散,NS,致敏颗粒,有凝集颗粒为,阴性,间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体无结,21,原理,协同凝集试验,SPA,能与血清中的,IgG类抗体的Fc段非特异性结合,，而两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍然保持正常的抗体活性，与特异性抗原相遇时，能出现特异的凝集现象。,应用,微生物的快速诊断、定种及定型；以协助传染病的早期诊断。,原理协同凝集试验 SPA能与血清中的IgG类抗体的Fc段,22,原理图,IgG,SPA,SPA-IgG,待测抗原,SPA-IgG-待测抗原凝集颗粒,混合,加入,原理图IgGSPASPA-IgG 待,23,原理,二、间接血凝试验(被动血凝试验),将可溶性抗原(或抗体）,吸附人的“O”型血红细胞或绵羊或家兔的红细胞,，制成致敏血红细胞,与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质参与下，出现红细胞凝集现象。,RBC为载体,：,动物，或人的“0”型血RBC,醛化红细胞,：,用,戊二醛,处理，成团，不易摇散；吸附大，耐温，耐冻融。,致敏红细胞保存时间短，易变脆、溶血、被污染，因此在致敏前醛化。,致敏醛化红细胞：,用Ag/Ab直接或化学联结，与RBC作用，吸附于RBC的过程。,（indirect hemagglutination test),原理二、间接血凝试验(被动血凝试验)将可溶性抗原(或抗,24,红细胞,抗原,致敏,致敏红细胞,NS,红细胞凝集,间接血凝试验,间接血凝试验原理,待测抗体,红细胞抗原致敏致敏红细胞NS红细胞凝集,25,结果示意图,-,+,+,+,+,+,结果判断:,效价？,方法评价：,敏感性较强、简便、快速、成本低廉,结果示意图-+,26,三、颗粒免疫凝集试验,胶乳颗粒凝集试验,明胶颗粒凝集试验,碳颗粒凝集试验,甲苯胺红颗粒凝集试验,应用:,类风湿因子检测等,三、颗粒免疫凝集试验 胶乳颗粒凝集试验应用:,27,原理,胶乳凝集试验,将可溶性抗原(或抗体）,与胶乳结合,后，直接与,待测标本,中相应抗体（或抗原）发生凝集反应。,方法评价：,1.胶乳颗粒的性能比,RBC稳定、均一性好,2.与抗原结合的能力,及凝集性能不如RBC,（indirect hemagglutination test),应用:,类风湿因子检测等,原理胶乳凝集试验 将可溶性抗原(或抗体）与胶乳结合后，直,28,三、颗粒免疫凝集试验,胶乳颗粒凝集试验,明胶颗粒凝集试验：,抗HIV抗体、抗精子抗,体检测,碳颗粒凝集试验：,炭疽、鼠疫、马副伤寒性,流产等诊断,甲苯胺红颗粒凝集试验：,献血员筛选、梅,毒的辅助诊断,应用:,类风湿因子检测等,三、颗粒免疫凝集试验 胶乳颗粒凝集试验应用:,29,原理,第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验,(Coombs试验),机体受某些抗原刺激后产生“,不完全抗体,”，其与相应抗原结合后,不出现可见的凝集现象,，但能封闭抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。,类型,1.直接法,2.间接法,方法：将人球蛋白，注入异种动物，获得,抗球蛋白,。此种抗体加入表面结合有不完全抗体的红细胞的复合物中，就能,出现可见的凝集现象,。,原理 第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验(Coom,30,是检测,抗红细胞不完全抗体,的一种非常经典的方法。,RBC不完全抗体(IgG),RBC不凝集。,RBC不完全抗体,(一抗),抗球蛋白抗体,(二抗),RBC凝集。,常用方法：,直接,Coombs,试验：检测RBC上的不完全抗体。,间接,Coombs,试验：检测游离在血清中的不完全抗体。,是检测抗红细胞不完全抗体的一种非常经典的方法。,31,直接法,作用：,检测,红细胞表面结合的不完全抗体,。,临床意义：,新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断。,RBC为Rh,+,7S的IgG,体内发生,+,抗IgG,体外测试,抽血,直接法作用：检测红细胞表面结合的不完全,32,间接法,作用：,检测,游离在血清中的不完全抗体,。,临床意义：,输血前的交叉配血、不相溶输血后的抗体检测。检测母体 Rh（D）抗体有助于及早发现及避免新生儿溶血症。,RBC为Rh,+,不完全抗,体?,+,抗IgG,体外测试,间接法作用：检测游离在血清中的不完全抗,33,第五节 自身红细胞凝集试验,原理、灵敏度类似于间接血凝试验。,基本原理是抗人O型红细胞的单克隆抗体能与任何种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应，这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体，可用于检测标本中的抗原；如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体。,第五节 自身红细胞凝集试验 原理、灵敏度类似于间接血凝试验,34,区别点：,RBC为,受检者新鲜RBC,。,所用抗体为,双功能抗体,(即能结合红细胞，也能结合待检抗原)。,反应特点：,1.受检标本为,全血,，不需分离血清。,2.采,手指血或耳垂血,，立刻检测出结果。,3.已成功应用于抗HIV抗体、HBsAg的检测。,临床免疫学检验-ppt课件-第5章-凝集反应,35,临床免疫学检验-ppt课件-第5章-凝集反应,36,概念,三、冷凝集试验,冷凝集素是红细胞某些抗原的,自身抗体,，只能在低温时与其相应的抗原结合。,(cold agglutination test),冷凝集反应在,4,时最强烈，红细胞凝集最明显；温度升高后，抗原抗体复合物解离，凝块消失。,意义,原理,冷凝集素增高常见于：单核细胞增多症和支原体肺炎。恶性淋巴瘤呈现慢性增高。,概念 三、冷凝集试验冷凝集素是红细胞某些抗原的,37,冷凝集试验原理,抗原决定簇隐含，不能与抗体结合,混,合,暴露的抗原决定簇与抗体结合,混,合,37,4,37,冷凝集试验原理抗原决定簇隐