单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床免疫学检验,免疫检验自动化分析仪,免疫比浊分析的临床应用,如免疫球蛋白,IgG,、,IgA,、,IgM,、；补体,C3,、,C4,；,血浆蛋白,AAT,、,TRF,、,A1M,、,CER,、,HPT,、,PAB,、,ALB,；,炎性反应蛋白,SAA,、,CRP,；,载脂蛋白,APO,、,ABI,；,尿蛋白系列,小分子治疗药物,检,范,围,测,血浆、体液中特种蛋白,概括：,免疫比浊测定原理，以及影响免疫比浊的因素。,原理：,免疫当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。,影响因素：,抗原抗体的比例，反应体系中保持抗体过量；,抗体的质量，要选择特异性强、效价高、亲和,力强的多抗；,抗原抗体反应的溶液，合适的,PH,（,6.5,8.5,）,和离子强度；,使用增浊剂可增强检测信号。,免疫比浊分析技术发展,自动化免疫比浊,两,个,阶,段,测定抗原抗体形成后的阶段,散射,(,终点,),比浊,测定抗原抗体结合的峰值,速率,散射比浊,免疫比浊法分类,当一束光,线通过溶,液受到光,散射和光,吸收两个,因素的影,响而使光,的强度减,弱,透射比浊法,:,在光源的光路方向（,0,0,）,测量透射光强度和被检测,溶液微粒浓度关系的方法。,散射比浊法,:,在光源的光路方向（,5,0-,96,0,）,角的方向上测量透射光强度,和被检测溶液中微粒浓度关,系的方法。,一、散射免疫比浊分析原理,散射比浊法：,在液相中可溶性抗原、抗体特异性结合，形成一定大小的复合物粒子，当入射光沿水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或折射，发生偏转,.,散射光的强,度与复合物的含量成正,比，即待测抗原越多，,形成的复合物越多，散,射光就越强。,影响散射信号的因素,(,了解,),如入射光的波长、偏振、,微粒大小、浓度、质量、,以及检测点的距离。,颗粒直径,比,入射光波,长,小,的多，,散射光的分布比较均匀。,颗粒直径接近入射光的波长，,其散射光的分布呈明显不均匀,Rayleigh,散射,Mile,散射,（一）散射颗粒与散射光,Rayleigh,原理,：即散射光的强度与复合物的量呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反比。,在散射比浊中，,增加,抗原,-,抗体复合物的体积,，,减小,入射光的波长,，,扩大,散射光夹角,等因素，均可增加检测的敏感度。,（二）反应物含量与散射浊度,Heidelberger,曲线,即当抗体量恒定时，形成的抗原抗体复合物的反应与散射,信号响应值的上升呈正比。同时，散射信号随抗原抗体,反应时间增加而曲线上升。,当抗原量与响应值上升到一极限时，再增加抗原量，,使散射响应值迅速下降,散射比浊测定时，,一定要保证,抗体过量,。,二、定时散射比浊分析,（一）基本原理,1.,是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，,“,在抗原抗体反,应几秒钟后开始测定峰值信号,”,。,2.,目的是排除抗原抗体反应的,不稳定性，降低检测误差,。,3.,采用抗体过量，以获得颗粒产生的最强的散射光信号。,时间,检测分两个,在预反应时段，,加小量样本与,抗体反应，,测定第一次散,射光信号值,加全量样本，约反应,2,分钟后，第二次测定散射光信号,信号峰值,计算机处理,转换为样,品浓度,（二）,抗原过量检测,抗体过量,在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常,血清的,50,倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与,抗体的结合。,对抗原过量进行阈值限定,先测定预反应时段抗原,-,抗体复合物的散射光信,号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超,过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。,采用两项保证措施：,三、速率散射比浊分析,三、速率散射比浊分析,（一）基本原理,是测定抗原抗体结合反应的动态过程。,所谓速率，是在,单位时间内,抗原抗体结合形成,复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的,速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态,的速率比浊分析。,当仪器测定到某一时,间内形成速率下降时，,即出现,速率峰,，该峰,值的高低，即代表所,测抗原的量。,四、免疫透射比浊分析,（一）基本原理,当光源的光路（角度与正前方夹角为,0,0,时），通,过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复,合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。,透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。,检测器,检测器,光源 透镜 滤光片,平光线,散,射,光,透射光,散射比浊、透射比浊光路图,实验要求（了解）,溶液中形成的复合物分子应足够大,(35-100nm),溶液中形成的复合物分子要足够多,控制抗原抗体反应的温度和时间,加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间,应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量,将标准品稀释至少,5,个浓度测定，以吸光度值,(A),为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标,准曲线，,