单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,蛋白质连接技术,蛋白质交联系指将,小分子,物质（如药物、半抗原等）或,大分子,物质,(,如酶、蛋白毒素等,),以,共价键,的方式,连接于蛋白质分子,，以制备人工抗原、酶标抗体、载体释放药物、抗体导向药物和免疫毒素等。,交联方法,游离氨基,游离羧基,苯基,酚基,巯基,羟基,咪唑基,吲哚基,胍基,重氮化法,：,蛋白质 连接分子,酚羟基的邻位,、,咪唑环,、,吲哚环,含芳香胺的化合物,副反应多，故一般限于人工抗原的制备,戊二醛法：,连接两个伯胺,最温和的交联反应之一，可在,440,温度范围，,pH6.08.0,的缓冲水溶液中进行，但是缓冲组份中不得含有氨基化合物,，,本交联方法易形成相同蛋白间的连接；产物的均二性较差。因此，多用于酶标抗体的制备,。,过碘酸盐氧化法,：,蛋白质 连接分子,氨基 邻二醇,比较温和，可在常温和中性,pH,的条件下进行,混合酸酐法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 羧基,碳二亚胺法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 羧基,由于碳二亚胺的缩合反应没有选择性；易形成蛋白分子间的自身聚合，产生非均一性产物；先将含羧基的药物或半抗原分子与,EDC,反应，活化羧基后，再加入蛋白反应物，可以减少蛋白分子交联,活泼酯法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 羧基,多元酸酐法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 氨基、羟基,二异氰酸酯法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 氨基,偶氮苯甲酸法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 苯基,O,羧甲基羟胺法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 酮基,对,-,肼基苯甲酸法,：,叠氮化法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 羧酸甲酯衍生物,氯乙酸钠法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 羟基,亚胺酸酯法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 氨基,卤代硝基苯法,：,蛋白质 连接分子,氨基、羟基、巯基 氨基、羟基、巯基,Mannich,反应法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 酮、酚类,苯醌法,：,蛋白质 连接分子,氨基、羟基、巯基 氨基、羟基、巯基,E11man,试剂法,：,两分子蛋白的连接,E11man,试剂即,5,5,二硫,2,，,2,双硝基苯甲酸,(DTNB),，该试剂可以与巯基作用,马来酰亚胺基类活泼酯法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 巯基,SPDP,试剂法,：,异型双功能交联剂,N-,羟基琥珀亚胺基,-3,(2-,吡啶基二硫,),丙酸酯,(SPDP),蛋白质 连接分子,伯氨基 巯基、氨基,苯丁酸氮芥衍生物法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 氨基,卤代乙酰衍生物法,：,连接基团：氨基、巯基,双马来酰亚胺试剂法,：,连接两个巯基,三氯三嗪试剂法,：,蛋白质 连接分子,伯氨基 羟基,必须注意，第一个分子中不能含有氨基及巯基等亲核性较强的基团，否则，易形成自身聚合,