单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,总复习,总复习,1,基因工程,1 基因工程概论,2 天然DNA的制备,3 分子克隆工具酶,4 分子克隆载体,5 表达载体,6 PCR技术及其应用,7 目的基因的制备,8 基因克隆的筛选策略,10 细菌基因工程,11 酵母基因工程,12 植物基因工程,13 动物基因工程,14 基因工程的安全,9 转基因及其表达,基因工程1 基因工程概论2 天然DNA的制备3 分子克隆工,2,1 名词解释,基因工程、遗传工程、DNA重组、基因克隆,、基因操作,2 简要回答下列问题,1）简述基因工程研究发展历史。,2）简述基因工程研究的主要内容。,3）说明基因工程的理论基石和技术基础。,4）简述基因工程的主要应用领域。,5）用5个词描述基因工程的过程。,第1章 概论,1 名词解释第1章 概论,3,1 名词解释,DNA变性；DNA复性；,Tm值,2 简要回答下列问题,1）举例说明浓缩DNA或RNA的方法。,2）简述DNA与基因工程有关的主要特性。,3）简要说明天然DNA的主要提取过程。,第2章 天然DNA的制备,1 名词解释第2章 天然DNA的制备,4,1 名词解释,限制性核酸内切酶；同裂酶；同尾酶；限制性核酸内切酶星活性；限制性图谱；平末端；粘性末端；衔接头；连接子,2 简要回答下列问题,1）基因工程中常用的酶有哪些？各有何的用途？,2）何谓定向克隆？如何进行？,3）说明限制性核酸内切酶产生Star活性的原因及其克服措施。,第4章 分子克隆工具酶,1 名词解释第4章 分子克隆工具酶,5,1 名词解释,载体，克隆载体，表达载体,质粒，cccDNA(,scDNA,)，松弛型质粒，严谨性质粒，附加体，选择标记，转化子，重组子，cosmid，噬菌粒载体，YAC，PAC，BAC，MAC，基因打靶，定位整合平台，定位整合克隆载体，穿梭载体，结合型质粒，非结合型质粒，迁移作用，显性质粒，隐蔽质粒，组织特异性表达载体，分泌型表达载体，诱导型表达载体，报告载体，反义表达载体，RNAi,2 简要回答下列问题,1）按来源可将基因克隆载体分为哪几类？并说明各自的主要特点。,2）作为克隆载体必须具备的主要条件是什么？,3）作为表达载体必须具备的主要条件是什么？,4）如何鉴定转化子、重组子和转基因生物？,第4、5章 分子克隆载体,1 名词解释第4、5章 分子克隆载体,6,1 名词解释,PCR,RT-PCR,定量PCE,反向PCR,RACE,TAIL-PCR,巢式PCR,2 简要回答问题,特殊PCR主要有那些?各自的原理是什么?,如何设计PCR引物?,3 分析讨论,试述PCR反应的原理与应用.,第6章 PCR技术及其应用,1 名词解释第6章 PCR技术及其应用,7,1 名词解释,SSH、RDA、DDRT-PCR、ESTs、酵母双杂交,、,cDNA文库、基因组文库,2 简要回答问题,1）简述cDNA文库构建的原理与步骤,2）简述基因组文库构建的原理与步骤,3）简述,酵母双杂交的原理与步骤,3 分析讨论,试述分离和筛选目的基因的主要方法和原理.,第7、8章 目的基因制备与筛选策略,1 名词解释第7、8章 目的基因制备与筛选策略,8,一、名词解释,受体细胞、感受态细胞、转化子、重组子、,-互补,、目的重组子、转基因沉默、启动子、增强子、终止子、绝缘子、反义子、SD序列、外显子、内含子、融合蛋白、,表达标签蛋白、包涵体、RNAi、MicroRNA,二、思考题,1 简述转基因的主要方法与原理。,2 简述在基因工程主要表达受体中提高表达效 率的策略。,3 简述重组子的筛选与分子鉴定的主要方法和原理。,4 说明原核与真核生物基因表达调控的特点。,5 说明转基因沉默的机制与克服措施。,第9章 转基因及其表达,一、名词解释第9章 转基因及其表达,9,1 名词解释,融合表达,融合蛋白,分泌表达,包涵体,转导,转化，转染，表面展示.,2 简要回答下列问题,试述促进转基因在大肠杆菌中表达的策略。,简述原核生物基因工程常用的载体和受体细胞。,简述细菌基因工程的主要应用。,简述外源基因在细菌中的主要表达形式及优缺点,。,第10章 细菌基因工程,1 名词解释第10章 细菌基因工程,10,1 名词解释,YEp;YIp;YRp;YCp;营养缺陷型,2,简答题,简要描述表面展示和酵母双杂交的原理。,酵母基因工程的主要宿主有哪些?,酵母基因工程的载体有哪些?各有和特点?,酵母转基因的方法有哪些?,为什么说酵母是一个非常重要的基因工程宿主?,3 分析和讨论,如何在酵母中实现高效分泌表达?,第11章 酵母基因工程,1 名词解释第11章 酵母基因工程,11,1 名词解释,植物整体转化,全能性,组成性表达启动子,组织转星星表达启动子,诱导表达启动子,花蕾浸泡转化法,清洁DNA转化,Ti质粒,卸甲Ti质粒,双元载体系统,2 解答题,植物转基因的方法主要有那些?,植物转基因的载体主要有那些?,如何利用农杆菌进行植物遗传转化?,转基因植物的主要成就有哪些?,3 分析讨论题,如何控制转基因在转基因植物中的表达?,第12章 植物基因工程,1 名词解释第12章 植物基因工程,12,1 名词解释,胚胎干细胞,限制性内切酶介导的整合,插入载体,替代载体,稳定表达，瞬时表达，脂质体转化，乳腺生物反应器,2 简答题,进行动物细胞转基因的目的是什么?主要载体有哪些？转基因方法有哪些？,怎样获得转基因老鼠？,如何获得转基因蛙?,转基因羊乳腺生物反应器是如何获得的?,3 分析讨论,如何实现在高等动物中细胞中的高效稳定表达?,第13章 动物基因工程,1 名词解释第13章 动物基因工程,13,1 名词解释（10个30分）,2 填空题（有的话20分）,3 载体填图（10分）,4 匹配题（10分）,5 简答题（10分或30分）,6 设计题,（20分）,考试题型,1 名词解释（10个30分）考试题型,14,1.,酵母,2,质粒复制原点,2.,3,4.,5.6.,1.酵母2质粒复制原点 2.3,15,1、启动子 受体细胞,NOS启动子 农杆菌,SV40早期启动子 哺乳动物,玉米ubiquitin-1启动子 高等植物,2、选出适合扩增图示序列之间DNA的PCR引物。,3、载体或载体源 受体细胞,Ti质粒 烟草,pYES2 牛,腺病毒 大肠杆菌,pBR322 酵母,人类,1、启动子,16,