,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,（二）原理：,培养基,是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等营养要素。,由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。,培养基的制备原则：,1.,根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基。,2.,调配好培养基营养成分的浓度和比例。,3.,控制微生物的培养条件（渗透压、,pH,、氧化还原电位等）,细菌 牛肉膏蛋白胨,放线菌 高氏,1,号,真菌 查氏、马丁氏,各类,M,土豆葡萄糖,（三）器材：,1.,药品和试剂：,牛肉膏、蛋白胨、琼脂、,NaCl,、,1M NaOH,溶液。,2.,器材：,试管、烧杯、量筒、玻璃棒、铁架台、漏斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、,pH,试纸（,5.5-9.0,）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。,（四）步骤：,以固体斜面培养基制作为例,：,计算 称量 加热融化 调,pH,过滤（可省略）,分装 加塞（附棉塞制作）,包扎,灭菌 摆斜面 无菌检查,1.,称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量。,2.,配制 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。,如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。一般要求琼脂沸腾,3,次，完全熔化后，补足所失水分。,3.,调节,pH,值 培养基溶解均匀后用,pH,试纸测,pH,，然后根据要求加酸或碱（一般用,1M HCl,和,1M NaOH,），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然,pH,时，不用调节。,4.,过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。,5.,分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。,分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量如下：（,1,）固体斜面培养基：装量为管长的,1/5,。（,2,）液体培养基：装量为管长的,1/4,。,（,3,）半固体培养基：装载量为管长的,1/3,。,6.,灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。培养基做完后，要求在,2-4,小时内灭菌，否则会被污染。,7.,摆斜面,灭菌完毕，冷却到,60,左右再摆斜面，以免产生过多冷凝水。,（五）注意事项：,1.,称量要准确，取药品的角匙不能混用。,2.,加热融化时要不断搅拌，以免糊底和溢出。（每加热,30s,看一次）,3.,蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速。,4.,培养基中如有微量成分，先配成浓缩溶液后再加入。,5.,节约药品。,牛肉膏蛋白胨培养基,(g/L),牛肉膏,3g,蛋白胨,10g,NaCl 5g,琼脂 固体培养基为,18g,；,半固体为,10g,；液体不加。,水,1000ml,pH 7.0-7.2,121,灭菌,20min,棉塞制作,二、消毒灭菌：,物理法：加热、过滤、照射,化学法：化学药品,灼烧,干热,湿热,加热,高压,间歇,煮沸,原理：,加热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质变性达到灭菌的目的。,干热：,160-170C 1.5-2h,湿热：,121.3C 15-30min,紫外线灭菌是诱导胸腺嘧啶二聚体的形成，而抑制了,DNA,的复制。另外，电离过程中生成的,O,3,和,H,2,O,2,均有杀菌作用。,适用范围,湿热主要用于各类培养基及液体物质,干热主要用于玻璃、金属等器皿、工具,紫外线主要用于接种箱、无菌室内空气及物体表面灭菌,操作步骤：,1.,湿热灭菌（高压蒸汽）,向锅内加入适量的水 装待灭菌物品 加盖,加热 排冷空气 升压、升温 维持所需,温度,20-30min,降压、降温 开盖取物,趁热摆斜面,2.,干热灭菌（干燥箱）,将待灭菌物品包好 装入待灭菌物品 升温,恒温 降温（,70,以下）开箱取物,3.,紫外线灭菌（接种箱或无菌室内）,放入待灭菌物品 甲醛（酒精）熏蒸,开紫外线灯（,30min,）关灯 工作,注意事项：,1.,高压灭菌：切勿脱水工作，排净冷空气，工作人员不能远离，当压力降到“,0”,时再开盖取物。,2.,干热灭菌：物品不要与烘箱内壁铁板接触；温度不能超过,170,；待温度降至,70,以下后，再开盖取物。,3.,紫外线灭菌：待灭菌物品要单摆开，不要直视紫外线光，更不能在紫外线光下工作。灭菌后通风，排出,O,3,。,