,*,单击此处编辑母版标题样式,精,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精,*,实验一 染色体玻片标本的制作与染色体观察,辽宁师范大学生命科学学院,张剑锋,精,1,实验一 染色体玻片标本的制作与染色体观察辽宁师范大学生命科,一、实验原理,植物根尖的分生细胞的有丝分裂,每天都有分裂高峰时间,(am9,pm3),,此时把根尖固定,经过染色和压片,再置放在显微镜下观察,可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。,精,2,一、实验原理 植物根尖的分生细胞的有丝分,二、实验目的,根尖染色体压片法是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。,精,3,二、实验目的 根尖染色体压片法是观察植物,三、实验材料,大蒜,(,Aillum sativum,)(2n=16),的鳞基。,精,4,三、实验材料 大蒜(Aillum sativum)(2,四、实验器具和药品,1.,用具:,染色板、载玻片、盖玻片、指管、温度计、试剂瓶、滴瓶、镊子、解剖针和毛边纸等。,2.,药品:,无水酒精、,70,酒精、冰醋酸、对二氯苯或秋水仙素、醋酸钠、碱性品红、石碳酸、甲醛、山梨醇、纤维素酶、果胶酶、中性树胶或油派胶,(Euparal),和二甲苯。,卡诺固定液的配制:,3,份无水酒精,加,1,份冰醋酸,(,现配现用,),。,酶液的配制:,以,0.1mol/L,醋酸钠为溶剂,配成纤维素酶,(2,),和果胶酶,(0.5,),的混和液。,精,5,四、实验器具和药品1.用具:染色板、载玻片、盖玻片、指管、,染色液的配制:,配方,:,石碳酸品红,(Carbol.fuchsin),染色液,先配母液,A,和,B,。,母液,A,:,称取,3,克碱性品红,溶解于,100,毫升的,70,酒精中,(,此液可长期保存,),。,母液,B,:,取母液,A 10,毫升,加入,90,毫升的,5,石碳酸水溶液,(2,周内使用,),。,石碳酸品红染色液:,取母液,B 45,毫升,加入,6,毫升冰醋酸和,6,毫升,37,的甲醛。此染色液含有较多的甲醛,在植物原生质体培养过程中,观察核分裂比较适宜,后来在此基础上,加以改良的配方,,称改良石碳酸品红,可以普遍应用于植物染色体的压片技术。,配方,:,改良石碳酸品红取配方,石碳酸品红染色液,2-10,毫升,加入,90-98,毫升,45,的醋酸和,1.8,克山梨醇,(sorbitol),。此染色液初配好时颜色较浅,放置二周后,染色能力显著增强,在室温下不产生沉淀而较稳定。,精,6,染色液的配制:配方:石碳酸品红(Carbol.fuch,五、实验说明,1.,根尖取材方便,是观察植物染色体最常用的材料,也可以用茎尖作为材料。,2.,植物细胞分裂周期的长短不同,在十到几十小时之间,温度影响分裂周期,对于一个不太熟悉的实验材料,最好在特定温度下长根,掌握有丝分裂高峰期,以便得到更多的有丝分裂的细胞。,3.,前处理的目的是降低细胞质的粘度,使染色体缩短分散,防止纺锤体形成,让更多的细胞处于分裂中期,一般在分裂高峰前,把根尖放到药剂中处理,3-4,小时。可处理的药剂很多,如秋水仙素、对二氯苯、,8-,羟基喹啉等。,4.,解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解,细胞壁软化或部分分解,使细胞和染色体容易分散压平,解离方法有酸解法和酶解法。,精,7,五、实验说明1.根尖取材方便,是观察植物染色体最常用的材料,六、实验步骤,(一),培养及前处理:,将大蒜鳞基置于盛水的小烧杯上,放在,25,温箱中,待根长到,2cm,左右时(见图,1-1,),在上午九时摘下根尖,放到对二氯苯饱或,0.02,秋水仙素溶液中,浸泡处理,3-4,小时。,精,8,六、实验步骤 (一)培养及前处理:将大蒜鳞基置于盛水的小,图,1-1,大蒜的培养,精,9,图1-1 大蒜的培养精9,(二),固定及保存:,经过前处理的根尖,再放到卡诺固定液中固定,24,小时。固定材料可以转入,70,酒精中,在,4,冰箱中保存,保存时间最好不超过二个月。,(三),解离,(,酸解,),:,从固定液中取出大蒜根尖,用蒸馏水漂洗,再放到,0.1mol/LHCl,中,在,60,水浴中解离,8-10,分钟,用蒸馏水漂洗后,放在染色板上,加上几滴改良石碳酸品红染色液,根尖着色后即可压片观察。,精,10,(二)固定及保存:经过前处理的根尖,再放到卡诺固定液中,(四),压片:,把染色后的根尖放在清洁的载玻片上,用解剖针把根冠及延长区部分截去,加上少量染色液,并盖上盖玻片。一个解离良好的材料,只要用镊子尖轻轻的敲打盖玻片,分生组织细胞就可铺展成薄薄的一层,再用毛边纸把多余的染色液吸干,经显微镜检查后,选择理想的分裂细胞,再在这个细胞附近轻轻敲打,使重叠的染色体渐渐分散,就能得到理想的分裂相,要达到这个目的,必需掌握以下几点:,1.,压片材料要少,避免细胞紧贴在一起,细胞和染色体没有伸展的余地。,2.,用镊子敲打盖玻片时,用力要均匀,若在压片时稍不留意,使个别染色体丢失,而被迫放弃一个良好的分裂相的细胞。,(五),封片:,把压好的玻片标本,放在干冰或冰箱结冰器里冻结。然后用刀片迅速把盖玻片和载玻片分开,用电吹风把玻片吹干后,滴上油派胶加上盖玻片封片,或经二甲苯透明后,滴中性树胶,加盖玻片封片,做成永久封片。,精,11,(四)压片:把染色后的根尖放在清洁的载玻片上,用解剖,七、结果,拍摄并绘制根尖染色体的各分裂相。,精,12,七、结果拍摄并绘制根尖染色体的各分裂相。精12,图,1-2,有丝分裂模式图,精,13,图1-2 有丝分裂模式图精13,图,1-3,低倍镜下,大蒜根尖细胞,有丝分裂各期,精,14,图1-3 低倍镜下大蒜根尖细胞有丝分裂各期精14,图,1-4,大蒜根尖细胞有丝分裂后、末期,精,15,图1-4 大蒜根尖细胞有丝分裂后、末期精15,八、作业,1.,绘制大蒜根尖细胞有丝分裂各时期图象。,2.,说明某一影响制片效果因素的方法、目的和原理。,精,16,八、作业1.绘制大蒜根尖细胞有丝分裂各时期图象。精16,