Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Sterile Production Technical Forum,无菌生产车间的环境监控,微生物室,无菌生产车间的环境监控,背景知识,环境监控的目的、要求以及关键因素,环境监控实际情况,讨论,背景知识-法规文件,ISO 14644 洁净室及相关控制环境,美国联邦标准209E,FDA cGMP无菌药品的生产，2004版,USP 1116 洁净室及其它环境控制区的微生物学评价,欧盟GMP附录一“无菌药品的生产(2003),8-G41-2-M 环境监测指南,中国药品生产质量管理标准,背景知识-术语,空气悬浮粒子计数也称总悬浮粒子计数：检测粒径大于等于0.5m的粒子数。,空气活性粒子计数也称空气浮游菌计数：以总悬浮粒子数为依据的级区划分标准中所给定的相应空气浮游菌限度。,洁净室clean room：指空气悬浮粒子水平符合特定卫生级别要求的房间。,洁净区clean zone：指空气悬浮粒子及环境微生物均符合特定卫生级别要求的区域。,背景知识-术语,产品接触区：在环境控制区内与产品、容器或密封件直接接触的区域或外表，这些会导致产品和容器-密封件系统被微生物污染。,环境监控方案：通过SOP执行的书面性方案，对用于监测空气悬浮粒子及环境微生物如空气、设施设备外表及人员衣服的方法和规那么有详细规定。监控方案不仅包括取样点、取样频率，还包括超出警戒或纠偏标准时所要进行的调查和纠偏措施。还应说明监测数据的趋势分析方法。,背景知识-术语,纠偏标准：在SOP中规定的环境控制区的微生物和悬浮粒子限度，如果超出此限度，必须进行偏差调查并进而采取相应纠偏措施。,警戒标准：在SOP中规定的环境控制区的微生物和悬浮粒子限度，如果超出此限度，那么需要进行偏差调查，确认生产工艺仍处于受控状态。,趋势分析：对与时间、班次、设施等相关的环境取样结果进行汇总分析。这些资料可用于评估一个生产工艺是否处于受控状态，并确定环境控制区是否需要进行再验证或维修和消毒。,背景知识-洁净区的划分,背景知识-环境微生物的生态,空气微生物,即使空气中的水分和营养很少，但在未净化的空气中发现了大量的微生物。,细菌：产芽孢类芽孢杆菌属、生孢梭菌属,不产芽孢葡萄球菌属、链球菌属和棒杆菌属,霉菌：青霉、曲霉、毛霉等,酵母菌：红酵母菌属,空气中的微生物数量与环境内的活动和分布的颗粒数以及湿度有关。,微生物往往是由颗粒、皮肤、衣服、液滴以及讲话、咳嗽和喷嚏造成的唾液带入空气中的。,空气微生物的处理有三个方法：过滤、化学消毒和紫外消毒,背景知识-环境微生物的生态,水系统微生物,水中微生物的状况对制药企业尤其是无菌产品生产企业来说是至关重要的。,未经处理的水：假单胞菌属、产碱杆菌属、产黄菌属、沙雷氏菌属,主要特征：对营养要求比较低，适合较低温度成长的革兰染色阴性杆菌,背景知识-环境微生物的生态,皮肤微生物,细菌葡萄球菌属金黄色葡萄球菌、不动杆菌属、产碱杆菌属,真菌瓶形酵母、表皮藓菌属、小孢子菌属等,鼻腔微生物,含有大量的金黄色葡萄球菌和腐生性的链球菌,防止人员身上的微生物污染产品必须要对人员进行有效的卫生和工艺培训以及定期的身体检查。,环境监控的目的、要求以及关键因素,Monitoring:observations made by measurement in accordance with a defined method and plan to provide evidence of the performance of and installation.,(ISO 14644-2),环境监控目的：,对清洁、消毒措施的效果进行评估,对操作人员本身的行为标准进行评价,提供足够的环境信息以证明环境是否处于受控状态,及时确定污染的可能途径，以便在产品污染发生前采取措施来防止,环境监控根本要求,必须有一份符合法规要求的书面监控方案来对洁净室的环境进行监控，该方案的设计应考虑到该区域的工艺，并基于对该区域的风险评估。,环境监控方案必须由有资质的人员执行并进行结果分析。,使用的监控设备和仪表必须有严格的校验程序管理。,必须定期地提供报告，来描述环境监控的结果和纠偏的措施。,环境监控方案的关键因素,取样点和取样频率,取样类型,警戒标准、纠偏标准的设立,数据及趋势分析,细菌鉴定,取样点和取样频率确实定,取样点和取样频率,那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气及设备外表或是容器和密封件系统的外表，均应考虑取样。对于这些关键区域的取样，应尽量在工艺结束后进行，以防止直接接触无菌外表，带来外源性的污染。,在SOP中详细阐述所有环境监控取样点位置，以便可以对固定的监控点进行重复取样，使数据结果更具可比性和科学性。,USP 29,表 2.指导性取样频率依洁区的重要性而定,洁净区,取样频率,100,级或更高级别,每班一次,100,级区毗连的支持性区域(如：10,000级),每班一次,其它支持性区域(100,000级),每周二次,可能与产品/容器相接触的区域,每周二次,无菌生产区的其它支持性区域（该区域不与产品相接触，通常为100,000级或更低）,每周一次,取样类型,悬浮粒子,微生物,空气浮游菌取样,外表微生物取样,培养基及培养条件的选择,培养时间和温度,空气悬浮粒子,原理：光脉冲信号经光电二极管转变成电脉冲信号，电脉冲次数反映粒子数，幅值反响粒径。常见品牌为PMS,MetOne等。,空气浮游菌,主动采样器用来测定空气浮 游菌，它们主要分为离心式，撞击式和膜过滤式三种形式。,空气沉降菌,价廉、轻便,空气干扰较小,时间较长，至少为半小时，,但不应超过4小时,接触碟和棉拭子,接触碟适用于对平整的规那么性外表进行取样监测，取样面积为25cm2,属于定量测试法,拭子通常用于对不规那么外表(尤其是设备外表)进行取样，取样面积为2430cm2,警戒标准、纠偏标准的设立,纠偏限度：符合中国GMP和欧洲GMP的要求，并且按照较严的标准执行。另外，连续三次超过以下警戒限度视为超过一次纠偏限度。,警戒限度：警戒标准是根据验证和历史的运行监测结果制定的。,警戒限度,洁净级别,空气浮游菌,（CFU/m3）,表面微生物,一般/地面,（CFU/plate,25cm,2,）,B,2,2/5,C,a,10,5/10,C,b,20,5/10,人员监测,洁区内的主要污染源来自于其中的人员，所以，控制人员带来的污染是环境控制方案的最重要内容之一。,通过培训使所有在洁净室及环境控制区工作的人员掌握相关的微生物学知识。培训应包括无菌工艺的根本原理以及生产和操作程序与产品污染的相关性。,工作于环境控制区的所有人员，均应严格监测。被监测人员不限于生产操作人员，同时也包括环境监测人员。,对人员的监测一般应在生产开始前或生产结束后进行。,细菌鉴定,GCM 8G412M,A programme shall exist to determine the frequency of identifying environmental isolates.,必须制订细菌鉴定程序来对环境检出菌进行频率分析。,对关键区及其邻近区域内所发现的污染菌进行鉴别应优先于其他非关键区域的别离菌的鉴别。,培养基灌装,采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进行验证。此模拟工艺称之为“培养基灌封。将装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长，然后对结果进行评价，借以确定实际生产中产品污染的概率。培养基模拟灌封试验中由环境监控获得的数据，对评估生产线也是十分有益的。,接受标准：,批量,警戒限度,纠偏限度,报废限度,5000,1,1,1,5000,1,2,2,环境监控实际情况,无菌车间的级区划分和监测频率,环境监控程序,趋势分析及MRS2环境监控软件,标准化的取样步骤,及时的偏差报告流程,丰富的趋势分析,Thanks!,背景知识-法规文件,ISO 14644-1空气洁净度等级,ISO 14644-2洁净室测试和监测标准,ISO 14644-3仪器和测试方法,ISO 14644-4 设计、施工和启动,ISO 14644-5 洁净室的运行,ISO 14644-6 术语和定义,ISO 14644-7隔离设施洁净空气罩，手套箱，隔离器，微环境,ISO 14644-8 分子污染,ISO 14698-114698-3 生物污染控制,空气悬浮粒子取样仪,取样仪器介绍,空气浮游菌取样仪,