,单击此处编辑母版标题样式,#,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第1页,一、试验目标,了解细胞融合原理,掌握细胞融合基础方法,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第2页,细胞融合概念,二、试验原理,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第3页,病毒诱导融合,聚乙二醇诱导融合,电场诱导融合,激光诱导融合,常见诱导融合伎俩有哪些？,二、试验原理,细胞融合概念,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第4页,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第5页,三、,仪器、材料与试剂,仪器：,离心机、,CO,2,培养箱、超净台、,37,恒温水浴锅、显微镜、血球计数板、解剖器械、烧杯、载玻片、盖玻片、离心管。,材料：,SP2/0,细胞、昆明小鼠,试剂：,Hanks,液、,45%PEG,，,75%,乙醇,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第6页,四、实 验步骤,（,1,）,小鼠摘眼球放血（可不做）,拉颈 处死，浸泡在,75%,酒精内，,3,5min,（,2,）无菌取脾脏，,Hanks,液洗一次，脾脏剪碎，培养液洗 一次，过不锈钢筛网，转移至,10mL,离心管,（,3,）,800g,离心,10,分钟，取沉淀细胞用,Hanks,液洗,2,次（每次加入,5mL,溶液，轻轻混匀,800g,离心,10,分钟）,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第7页,（,4,）细胞,计数，待用。,（,5,）,取对数生长骨髓瘤细胞，,800g,离心,10,分钟，取沉淀细胞用,Hanks,液,洗,2,次（每次加入,5mL Hanks,液，轻轻混匀,800g,离心,10,分钟）,（,6,）细胞,计数，待用。,（,7,）,将骨髓瘤细胞,(10,5-6,),与脾细胞,(10,6-7,),按,1,：,10,百分比混合在一起,800g,离心,10,分钟，弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（,PEG,）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。（每组混合两份样品,),（,8,）,90s,内加入,37,预温,1mL 45%PEG,（分子量,4000,）或,Hanks,液，边加边轻微摇动。,37,水浴,90s,。,（,9,）加,37,预温,Hanks,液,8mL,以终止,PEG,作用,（,10,）,800g,离心,10,分钟，弃上清，加入,1mL,Hanks,液,，镜检,实验细胞融合小鼠骨髓瘤sp20细胞与小鼠脾细胞融合,第8页,