单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五 食品中大肠菌群的测定,一、实验目的,1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法；,2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。,二、实验材料,1、设备和材料,温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针,2、培养基及试剂,乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（,EMB）、,远腾氏琼脂、革兰氏染色液,三、实验方法与,步骤,1、采样及稀释,以无菌操作将检样25,g（,或25,ml）,放于含有225,ml,灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器，以800,r/min1000r/min,的速度处理1,min，,做成1：10的稀释液。,用1,ml,灭菌吸管吸取1：10稀释液1,ml，,注入含有9,ml,灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支1,ml,灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液,根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。也可直接用样品接种。,2.乳糖初发酵试验,即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。,将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1,ml,以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1,ml,及1,ml,以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置（361）,0,C,温箱内，培养（242）,h，,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行,3.分离培养,将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（361）,0,C,温箱内，培养18,h24h，,然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和复发酵试验。,4.乳糖复发酵试验,即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。,在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群12个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（361）,0,C,的温箱内培养（242）,h，,观察产气情况。,凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。,5.,报告,根据证实为大肠菌群阳性的管数，查,MPN,检索表，报告每100,ml（g）,食品中大肠菌群的最可能数。,水质或食品的大肠菌群检测,实验小结,实验安排,水样采取,初发酵试验（第,10,周完成）,平板分离 （第,10,周完成）,涂片，革兰氏染色，镜检（第,11,周完成）,复发酵试验（第,11,周完成）,