单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题,2,细胞工程,动物细胞融合与单克隆抗体,公道中学 蒋丽凤,专题2 细胞工程公道中学 蒋丽凤,动物细胞融合和单克隆抗体课件,产生抗体的细胞：,化学本质：,作用特点：,主要分布：,浆细胞,蛋白质,只能与相应的抗原发生特异性结合,血清,温故知新,产生抗体的细胞：浆细胞蛋白质只能与相应的抗原发生特异性结合血,抗体的传统生产方法,从,血清,中分离抗体,浆细胞,动物体内,抗体,抗原,B,淋巴细胞,抗体的传统生产方法从血清中分离抗体浆细胞动物体内抗体抗原 B,血清抗体的特点：,产量低,纯度低,特异性差,灵敏度低,如何获得,纯度高,、,产量大,的抗体呢,？,血清抗体的特点：产量低纯度低特异性差灵敏度低如何获得纯度高、,（,1,）怎么才能得到纯的抗体,?,要想获得单一的纯抗体，就必须从一个,B,淋巴细胞出发,让,B,淋巴细胞大量增殖（克隆）,B,淋巴细胞不能无限增殖。,怎么办？,骨髓瘤细胞！但是它不能产生抗体。,怎么办？,让两种细胞融合,（,2,）光纯还不行,还要大量。,怎么办,?,（,3,）存在,问题，事实上,:,（,4,）找，什么细胞能在体外培养下大量增殖呢,?,（,5,）思路,:,（1）怎么才能得到纯的抗体?要想获得单一的纯抗体，就必须从一,小鼠的,B,淋巴细胞,杂交瘤细胞,融合,小鼠的骨髓瘤细胞,克隆,产生大量的杂交瘤细胞，获得大量的单一抗体。,既能产生专一抗体,又能迅速大量增殖,小鼠的B淋巴细胞杂交瘤细胞融合小鼠的骨髓瘤细胞克隆产生大量的,单克隆抗体,1975,年,英国,米尔斯坦,德国,柯勒,获得了,1984,年的诺贝尔生理学,-,医学奖,单克隆抗体1975年英国米尔斯坦德国柯勒获得了198,单克隆抗体的制备,单克隆抗体的制备,骨髓瘤细胞,培养液中细胞有哪几种类型？,第,1,次筛选,B,淋巴细胞,融合,注射特定抗原蛋白,注射特定抗原的目的是什么？,筛选方法：,目的：,B-B,瘤,-,瘤,B-,瘤,杂交瘤,细胞,得到杂交瘤细胞,(,多种,）,骨髓瘤细胞培养液中细胞有哪几种类型？第1次筛选B淋巴细胞融合,如何筛选出杂交瘤细胞？,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,合成,DNA,合成,DNA,D,途径，,S,途径,D,途径,D,途径能被一种化合物,氨基嘌呤阻断,研究发现：,B,B-B,瘤,-,瘤,瘤,杂交瘤细胞,如何筛选出杂交瘤细胞？B淋巴细胞骨髓瘤细胞合成DNA,骨髓瘤细胞,培养液中细胞有哪几种类型？,第,1,次筛选,B,淋巴细胞,融合,注射特定抗原蛋白,注射特定抗原的目的是什么？,筛选方法：,目的：,用特定的选择培养基,得到杂交瘤细胞,(,多种,）,骨髓瘤细胞培养液中细胞有哪几种类型？第1次筛选B淋巴细胞融合,杂交瘤细胞继承了,双亲细胞,的遗传特性，既能,产生专一抗体,又能,迅速大量增殖,。,骨髓瘤细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,B,淋巴细胞,融合,注射特定抗原蛋白,杂交瘤细胞具有什么的特点呢？,杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能迅速,骨髓瘤细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,第,1,次筛选目的,B,淋巴细胞,融合,注射特定抗原蛋白,得到杂交瘤细胞（多种）,第,2,次筛选目的,克隆上述杂交细胞,筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞,目的：,方法：,骨髓瘤细胞在具有筛选作用的培养基上培养第1次筛选目的B淋巴细,各孔上清液中的抗体,特定的抗原,检测结果,阳性,阴性,阴性,有限稀释法,稀释多次,将细胞稀释至不超过,10,个,ml,，每孔加入,细胞稀释液,0.1ml,，使每个孔内不多于一个细胞，,以达到单克隆培养的目的。,各孔上清液中的抗体特定的抗原检测结果阳性阴性阴性有限稀释法,骨髓瘤细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,第,1,次筛选目的,B,淋巴细胞,融合,注射特定抗原蛋白,得到杂交瘤细胞（多种）,第,2,次筛选目的,克隆上述杂交细胞,筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞,专一抗体检验,（,抗原,抗体杂交技术,）,目的：,方法：,骨髓瘤细胞在具有筛选作用的培养基上培养第1次筛选目的B淋巴细,骨髓瘤细胞,B,淋巴细胞,融合,注射特定抗原蛋白,单克隆抗体,克隆单一的,杂交瘤细胞,所产生的大量的化学性质单一的抗体,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体,骨髓瘤细胞B淋巴细胞融合注射特定抗原蛋白 单克隆抗体,单克隆抗体制备过程,注射抗原,B,B,淋巴,骨髓瘤,B-B,瘤,-,瘤,杂交瘤,选择性,杂交瘤,所需抗体,杂交瘤,腹腔,单克隆抗体制备过程注射抗原BB淋巴骨髓瘤B-B瘤-瘤杂交瘤选,单抗制备过程分哪几步？,请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？,你学会了吗？,单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步,利用,技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞,利用,技术大量培养杂交瘤细胞,单克隆抗体最主要的优点：,可大量制备,特异性强,灵敏度高,动物细胞融合,动物细胞培养,小结：,利用 技术将两种细胞融合获,科学家从某些能无限增殖的细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因,(prG),。该基因能激发许多动物细胞的分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。,请根据这一信息试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的一条途径。,延伸拓展,科学家从某些能无限增殖的细胞的细胞质中分离出无,单克隆抗体的应用,作为诊断试剂,准确识别各种抗原物质的微细差异，并与其特异性结合。具有准确、高效、简易、快速的优点。,诊断乙肝病毒等病原体的感染,定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病,单克隆抗体的应用作为诊断试剂 准确识别各种抗原物质的,用于,治疗疾病,2009-2010,年全球最畅销十大药品,用于治疗疾病2009-2010年全球最畅销十大药品,主要用于,癌症,治疗,主要用于癌症治疗,运载药物：,制成,“,生物导弹,”,=,抗癌细胞 的单克隆抗体,+,药物,药物：,放射性同位素、化学药物和毒素等物质,优点：疗效高、,毒副作用小,单抗,导向,，药物为,弹头,运载药物：制成“生物导弹”=抗癌细胞,1,、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和,B,淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）,B,淋巴细胞,小鼠骨髓瘤细胞,B,淋巴细胞自身融合细胞,小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞,杂交瘤细胞,A,B,C,D,当堂训练,C,1、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，,2,、由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”，下列对此描述正确的是,(,多选,),（）,A.“,瞄准装置”是由识别肿瘤的单克隆抗体构成,B.“,弹头”是由放射性同位素、化学药物和毒素 等物质构成,C.“,弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能,D.“,生物导弹”是利用细胞工程制备出来的,ABD,2、由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄,（,1,）单克隆抗体制备的基础技术是,_,（,2,）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是,_,（,3,）,动物细胞融合的原理是,，与植物细胞原生质体融合的原理（相同或不同），常用的诱导方法与植物细胞原生质体融合的方法类似，除此外还可以采用,_,。,（,4,）上述实验过程能否达到实验目的？为什么？,_,如何改进？,不能,4,、请根据下图回答以下问题,动物细胞培养,特异性强，灵敏度高，并可能大量制备,灭活的病毒,细胞膜具有一定的流动性,对小鼠注射特定抗原,（1）单克隆抗体制备的基础技术是_,（,5,）,生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是,_,（,6,）细胞融合是随机的过程，若考虑两两融合，会得到,种融合细胞，可通过,培养基选出的,细胞既具备骨髓瘤细胞的,_,特点，又具备淋巴细胞的,_,特点。,（,7,）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从,HAT,培养基上筛选出的细胞稀释到,7,10,个细胞,ml,，每孔滴入,0.1ml,细胞稀释液，其目的是,_,使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的,杂交瘤,选择性,分泌特异性抗体,在体外大量增殖,高度分化的细胞无分裂能力,3,（5）生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是_,谢谢,谢谢,