单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,实验一 免疫血清的制备,一、目的要求,1,、熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法,2,、制备兔抗牛血清白蛋白（BSA）的免疫血清,二、实验原理,免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。为制备抗体通常将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称为免疫血清。,高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂,(,如用于制备免疫标记抗体等,),，也可供特异性免疫治疗用。,三、实验材料,1.,动物：小白鼠8周左右体重18克，,2-3kg,的健康雄家兔或未怀孕的雌家兔,2.,抗原：小牛血清白蛋白（BSA）,3.,佐剂：完全福氏佐剂,(,抗原，羊毛脂,石蜡油,卡价苗75mgml),4.,器材：一次性注射器，碘酒酒精棉球，塑料管,镊子等,四、实验的步骤与方法,1,、抗原制备,1ml,BSA,1ml,完全福氏佐剂,搅拌（注射器交替推动）,完全乳化,滴于水中经久不,散,抗原,1,羊毛脂,5,石蜡油,1,卡价苗,0.5ml,2,、动物免疫,针头,使用,9#,12#,一次注入的剂量,0.5mg,kg,接种的部位,-,将完全乳化的抗原注射到兔子的双后足垫和背部皮下,4-6,点，每处约2,0-,5,0,ul,（接种处先用碘酒、酒精消毒）,第一次相隔,2,周，以后相隔,1,周，免疫,3-4,次。,3,、采血和分离血清：心脏采血法,家兔仰面，四肢由助手抓住四肢固定。,剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。,用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左推，使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏动最强的部位。,用,2-10,ml,注射器,(,连接,9,号针头,),，倾针,45,角度，对准心搏最强处刺入心脏抽血。,将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中或无菌离心管中，待凝固后将三角烧瓶的血置,37,温箱,1,小时，再置,4,冰箱,3,4,小时或直接过夜。然后用毛细滴管吸取血清，如还有红细胞则离心用,3000rpm,离心,15,分钟，取上清液。,抗血清保存有三种方法：,第一种 是,4,保存，将抗血清除菌后，可以液体状态保存于普通冰箱，存放,3,个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如需要长期保存时要加入,0.1,0.2,NaN3,以防腐和加入半量的甘油保存期延长。,第二种 是低温保存，放在,20,80,，一般保存,5,年效价不会有明显下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。,第三种 是冰冻干燥，最后制品内水分不应高于,0.2,，封装后可以长期保存，一般在冰箱中,5,10,年内效价不会明显降低,。,抗血清的鉴定,动物血采集后分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。,