单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,项目九 综合实训,-,水中总大肠菌群的测定,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定,任务二,水中大肠菌群数的测定,综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定任务二,水中总大肠菌群的测定,检验依据：,GB/T5750.12-2006,方法：,多管发酵法,水中总大肠菌群的测定检验依据：GB/T5750.12-200,总大肠菌群,总大肠菌群,37,、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢杆菌,粪大肠菌群（耐热,-,）,总大肠菌群,非粪大肠菌群,EC,肉汤,44.5,士,0.5,总大肠菌群总大肠菌群EC肉汤,总大肠菌群,MPN,（,most probable number,）,最可能数或最近似数,总大肠菌群,MPN,100mL,水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数,总大肠菌群MPN（most probable number,指示菌（总大肠菌群）,指示菌,应具有的条件,和肠道致病菌的来源相同,在外界环境中的生存时间长,检验方法比较简便,指示菌（总大肠菌群）指示菌应具有的条件和肠道致病菌的来源相同,实验目标,掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法,掌握水源水总大肠菌群的测定方法,判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量,实验目标掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法,实验内容,1,乳糖发酵试验,4,证实试验,5,结果分析与报告,1,培养基制备,2,乳糖发酵试验,3,分离培养,实验内容1乳糖发酵试验4证实试验5结果分析与报告1培养基制备,实验器材,水样,生活饮用水、水源水,培养基,乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基,试剂,革兰氏染色液、稀释剂等,实验器材水样,实验器材,其他,无菌工作台、,酒精灯,、,稀释液,、,灭菌吸管,、,灭菌试管,、小倒管、,试管架,、,接种环,、恒温,培养箱,、,高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油、平皿、天平、电炉等,实验器材其他,培养基制备,乳糖发酵管,双料管,单料管,伊红美兰平板,放置小倒管并排气,培养基制备乳糖发酵管放置小倒管并排气,检验程序,生活饮用水接种,乳糖发酵试验,分离培养,证实试验,结果报告,水源水,稀释,与接种,检验程序生活饮用水接种乳糖发酵试验分离培养证实试验结果报告水,一、乳糖发酵（初发酵）试验,自来水,直接接种,10mL,水样于双料培养基，每个水样共接种,5,管,水源水,加大稀释度，每个稀释度接种,5,管，每个水样共接种,15,管,一、乳糖发酵（初发酵）试验自来水,各,10ml,1ml,各,1ml,水样,1:10,稀释水,各,1ml,乳糖发酵试验,各10ml1ml各1ml水样1:10稀释水各1ml乳糖发酵试,一、乳糖发酵（初发酵）试验,培养,36,士,l,24h,士,2h,观察产酸产气情况,不产酸产气,产酸产气,一、乳糖发酵（初发酵）试验培养,第二天,任务二水中大肠菌群数的测定课件,二、分离培养,产酸产气的发酵管分别转种,EMB,平板,（分区划线）,36,士,l,24h,士,2h,二、分离培养产酸产气的发酵管分别转种EMB平板（分区划线）,第三天,任务二水中大肠菌群数的测定课件,三、证实试验（复发酵试验）,观察,EMB,平板菌落形态,深紫黑色、具有金属光泽的菌落,紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落,淡紫红色、中心较深的菌落,三、证实试验（复发酵试验）观察EMB平板菌落形态,一半进行涂片、染色、镜检,另一半进行接种,（证实试验用）,一半进行涂片、染色、镜检另一半进行接种,三、证实试验（复发酵试验）,只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种乳糖蛋白胨管,36,士,l,24h,士,2h,三、证实试验（复发酵试验）只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,第四天,任务二水中大肠菌群数的测定课件,四、结果报告,观察乳糖发酵管产气情况,产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在,查,MPN,检索表,根据证实为总大肠菌群阳性的管数,报告每,100ml,水样中的总大肠菌群最可能数（,MPN,）,四、结果报告观察乳糖发酵管产气情况,四、结果报告,5,管法结果见表,1,，,15,管法结果见表,2,四、结果报告5管法结果见表1，15管法结果见表2,四、结果报告,表,1,用,5,份,10mL,水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（,MPN),5,个,10mL,管中阳性管数,最可能数（,MPN,）,0,16.0,四、结果报告表1 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组,四、结果报告,表,2,总大肠菌群,MPN,检索表,(,部分）,（总接种量,55.5mL,，其中,5,份,10mL,水样，,5,份,1mL,水样，,5,份,0.1mL,水样）,接种量,/mL,总大肠菌群,/(MPN/100mL),接种量,/mL,总大肠菌群,/(MPN/100mL),10ml,管,1ml,管,0.1ml,管,10ml,管,1ml,管,0.1ml,管,0,0,0,2,1,0,0,2,0,0,1,2,1,0,1,4,0,0,2,4,1,0,2,6,0,0,3,5,1,0,3,8,0,0,4,7,1,0,4,10,0,0,5,9,1,0,5,12,四、结果报告表2 总大肠菌群MPN检索表(部分）总大肠菌群,四、结果报告,稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数,表,2,采用,3,个稀释度（,10mL,、,1mL,和,0.1mL),每个稀释度,5,管,表,2,内所列接种量如改用,100mL,、,10mL,和,1mL,时，表内数字应相应降低,10,倍；如改为,1mL,、,0.1mL,和,0.01mL,时,则表内数字应相应增加,10,倍。其余可类推。,四、结果报告稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数,四、结果报告,所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大肠菌群未检出。,四、结果报告所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大肠菌群未检出。,注意事项,1.,无菌操作。,2.,每递增稀释一次，即换一支,1mL,灭菌吸管。,3.,培养基使用前应先检查培养基内小倒管中有无气泡。,4.,接种量在,1ml,及以下时用单料培养基，接种量超过,1ml,时用双料培养基。,5.,检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过,15min,。,注意事项1.无菌操作。,习题作业,1.,判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，该指示菌应具备的条件有哪些。,2.,总大肠菌群和粪大肠菌群有什么区别？如何区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。,习题作业 1.判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程,习题作业,3.,检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过,15min,，为什么？,4.,单料和双料培养基有什么区别？什么时候使用双料培养基？,5.,生活饮用水的菌落总数、总大肠菌群标准是多少？畜禽饮用水总大肠菌群标准是多少？,习题作业 3.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15,