,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肌钙蛋白和肌红蛋白测定试剂盒介绍,胶乳增强免疫比浊法,太原川至生物工程有限公司,肌钙蛋白和肌红蛋白测定试剂盒介绍 胶乳增强免疫比浊法 太原,1,技术背景,心脑血管病现已成为我国人口死亡的主要原因，名列第一位，心血管疾病特别是心肌损伤的发病率逐年增加。因此早期进行诊断和积极的治疗，对挽救病人的生命有重要意义。,技术背景心脑血管病现已成为我国人口死亡的主要原因，名列第一位,2,技术,背景,WHO 1979,年制订的,AMI,的诊断标准,1.,有剧烈而持久的胸痛史：,2.,明确的心电图改变，包括,ST,段抬高和异常的,Q,波出现：,3.,系列酶的水平的改变，早期浓度升高，随后恢复正常浓度。,技术背景WHO 1979年制订的AMI的诊断标准,3,技术背景,随着医学科学研究的进展，心肌损伤的血液生化标志物已从早先的以,酶活性,为主的检测发展到目前的以,蛋白质质量浓度,为主的检测，包括多种标志物,。,AST,、,LD,及其同工酶以及,-,羟丁酸脱氢酶等以酶活性为主的检测项目在诊断心脏疾病时已逐渐少用以至不再应用。,技术背景随着医学科学研究的进展，心肌损伤的血液生化标志物已从,4,技术背景,25%,的,AMI,病人发病早期没有典型的临床症状；,约,30%,的,AMI,病人缺乏心电图（,ECG,）的特异改变；,CK-MB,的敏感性和特异性也不尽如人意。,技术背景25%的AMI病人发病早期没有典型的临床症状；,5,心肌损伤理想的生化标志物,在心肌细胞中的浓度很高；而在其它组织中的浓度很低。,特异性强,在心肌损伤后能很快释放入血。,敏感性高,在多日内保持异常。,窗口期长,检测所需时间短,。,肌钙蛋白是迄今为止，基本符合上述标准的标志物。,心肌损伤理想的生化标志物在心肌细胞中的浓度很高；而在其它组织,6,心肌损伤理想的生化标志物,国际临床化学联盟（,IFCC,）的心肌标志物标准化委员会（,CSCM,）和美国临床生化学院（,NACB,）建议：,在临床工作中运用两类心肌损伤标志物：一是有胸痛发生后几小时即增高的,早期,标志物；二是发病后持续增高的具有高度专一性的,确定,标志物。,心肌损伤理想的生化标志物国际临床化学联盟（IFCC）的心肌标,7,早期标志物,（心肌损伤后,6h,内血中就升高）,肌红蛋白（Mb）,优点,出现早（2h），敏感性高。阴性有助于排除AMI。,血中半衰期短，观察有无再梗死以及梗死有无扩展。,是AMI溶栓中评价再灌注与否的较敏感准确的指标。,缺点,特异性不高,早期标志物（心肌损伤后6h内血中就升高）肌红蛋白（Mb）,8,早期标志物,（心肌损伤后,6h,内血中就升高）,C反应蛋白,优点,早期即出现异常增高且“窗口期”较短，在心肌损伤的早期诊断和预后估计有较好的临床价值。,超敏CRP对心梗有一定预报价值。,缺点,特异性不高,早期标志物（心肌损伤后6h内血中就升高）C反应蛋白,9,晚期标志物,（发病后,6-9h,血中增高并持续数天，对心肌损伤的敏感性和特异性都较高）,心肌肌钙蛋白（cTn）,有cTnI和cTnT两种亚型。因cTn灵敏度高、特异性强、发病后持续时间长，是目前诊断心肌损伤较好的确定标志物。,晚期标志物（发病后6-9h血中增高并持续数天，对心肌损伤的敏,10,新修订MI的诊断标准,ESC和ACC于2000年联合发表文件，重新修订MI的诊断标准，最重要的是将检测到心肌损伤标志物（主要是cTn）的异常变化作为诊断MI急性发病的必要条件。,新修订MI的诊断标准,11,新修订MI的诊断标准,心肌损伤标志物升高,有剧烈而持久的胸痛史,明确的心电图改变,1+2 or 3 即可诊断,新修订MI的诊断标准心肌损伤标志物升高,12,胶乳增强免疫比浊法原理,使用特异抗体结合于胶乳颗粒表面，标本与胶乳试剂在缓冲液中混合，标本中的,cTnI,与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在,500600 nm,附近测量溶液浊度的增加，其增加的程度与标本中的,cTnI,浓度相关。,胶乳增强免疫比浊法原理使用特异抗体结合于胶乳颗粒表面，标本与,13,胶乳增强免疫比浊法原理,胶乳增强免疫比浊法原理,14,方法学特性 （,cTnI,）,该试剂灵敏度为0.3ng/ml;,线性范围为25ng/ml;,批内及批间精密度均小于10%；,以99%单侧界值1.7,ng/ml,，敏感性86%，特异性99%，阳性结果预示值97.7%，临床符合率96%。,方法学特性 （cTnI）该试剂灵敏度为0.3ng/ml;,15,线性范围,校准曲线：,采用速率法多点校准，多参数曲线方程（如,logit/log,）拟合。线性范围达,25ng/ml,。校准曲线至少稳定,30,天，测试条件变化时应重新校准，以免试验结果出现偏差。,线性范围校准曲线：,16,线性范围,图1 cTnI浓度与吸光度线性相关图,线性范围,17,方法学特性 （,cTnI,）,精密度：,水平,质控,1,质控,2,均值（,ng/ml,）,5.3,16.7,%CV（批内）,4.0,1.4,%CV（批间）,4.7,2.0,方法学特性 （cTnI）精密度：水平质控1质控2均值（ng,18,方法学特性 （,cTnI,）,回收实验,不含,Tn I,的血清加入已知浓度的,cTn I,混合，,n=5,加入的,Tn I,（,ng/ml,）,实测,Tn I,（,ng/ml,）,回收率（,%,）,4,4,100,9,9.3,103,20,20.8,104,方法学特性 （cTnI）回收实验加入的Tn I（ng/ml,19,方法学特性 （,cTnI,）,灵敏度,用0.00 ng/ml校准品重复测定20次，计算结果如下：,X=0.067 SD=0.019,X+2.58 SD=0.1ng/ml,方法学特性 （cTnI）灵敏度,20,方法学特性 （,cTnI,）,稳定性,37放置5天后，测定值变化10%试剂有良好的稳定性，实测效期为两年。,方法学特性 （cTnI）稳定性,21,方法学特性 （,cTnI,）,抗凝剂及,VC,影响,抗凝剂,浓度,测定值（x）(ng/ml),回收率(%),-,-,15.0,-,肝素,12.5U/ml,14.3,95.1,枸橼酸钠,3.2mg/ml,15.1,100.2,EDTA-K,2,3.2ng/ml,13.2,87.6,V,c,50ug/dl,15.0,99.8,V,c,100 ug/dl,15.2,101.1,方法学特性 （cTnI）抗凝剂及VC影响抗凝剂浓度测定值（,22,方法学特性 （,cTnI,）,抗干扰容量：,在以知浓度血清中，加入下列物质对,cTn I,的干扰,10,%,。,人血清白蛋白,3000 mg/dl,甘油三脂,25 mg/dl,-,球蛋白,5000 mg/dl,严重溶血或黄疸可造成负干扰，应予避免。,方法学特性 （cTnI）抗干扰容量：,23,临床评价,预期值,：,149,例健康成人血清标本经本法测定，,95%,单侧分布为1.1,ng/ml,，,99%,单侧,分布为,1.7 ng/ml,，此范围仅供参考。,各试验室应确定自己的参考值及诊断标准。,临床评价预期值：,24,临床评价,不同分布下的诊断界值,单侧上限（%）,临界值(ng/ml),86.5,0.80,95.0,1.10,97.5,1.36,99.0,1.68,99.5,1.89,临床评价不同分布下的诊断界值 单侧上限（%）临界值(,25,不同诊断界值的临床诊断效率,50例确诊心梗病人和149例对照标本,临界值(ng/ml),特异性（%）,灵敏性（%）,符合率（%）,0.80,89.3,96,91.0,1.10,94.6,94,94.5,1.36,97.3,90,95.5,1.68,99.3,86,96.0,1.89,99.3,86,96.0,不同诊断界值的临床诊断效率 50例确诊心梗病人和149例对照,26,ROC 曲线,ROC 曲线,27,注意事项,标本处理,用血清或血浆标本（肝素抗凝），在,4,小时内测定。标本于使用前离心，,4000,转,/,分，,15,分钟。,28,贮存的标本应在,24,小时内测定，如标本存放超过,24,小时，应于,20,以下冻存，融化后必须离心，避免反复冻,融。,注意事项标本处理,28,注意事项,标本避免溶血及黄疸。,血清分离胶有明显负干扰。,慎用抗凝剂。,胶乳试剂避免冰冻。,注意事项标本避免溶血及黄疸。,29,方法学特性 （,Myoglobin,）,试剂灵敏度为1.0 ng/ml;,线性范围为500 ng/ml;,批内及批间精密度小于5.6%；,95%临界值 为57,ng/ml,时，敏感性96.1%，特异性93.0%，阳性结果预示值94.6%，临床符合率94.7%。,方法学特性 （Myoglobin）试剂灵敏度为1.0 ng,30,方法学特性 （,Myoglobin,）,校准曲线,方法学特性 （Myoglobin）校准曲线,31,方法学特性 （,Myoglobin,）,精密度,方法学特性 （Myoglobin）精密度,32,方法学特性 （,Myoglobin,）,灵敏度,用0.00 ng/ml校准品重复测定20次，计算结果如下：,X=0.020 SD=0.007,X+2.58 SD=0.037 ng/ml,方法学特性 （Myoglobin）灵敏度,33,回收试验：,（,Myoglobin,）,血清中加入已知浓度的纯化,Mb,，,20,次重复试验，计算结果如下：,加入（,ng/ml,）,实测,(ng/ml,）,回收率（,%,）,500,484.9,97,250,245.8,98,125,122.7,98,62.5,62,99,31.2,31.5,101,回收试验：（Myoglobin）血清中加入已知浓度的纯化Mb,34,抗干扰容量,（,MYO,）,在以知浓度血清中，下列物质,I,的干扰,10,%,。,抗干扰容量（MYO）在以知浓度血清中，下列物质I的干扰,35,方法学特性 （,Myo,）,稳定性,37放置5天后，测定值变化10%试剂有良好的稳定性，实测效期为两年。,方法学特性 （Myo）稳定性,36,方法比较,校准曲线比较,方法比较校准曲线比较,37,两法相关性,两法相关性,38,临床评价,预期值,：,100,例非相关人血清标本经本法测定，,95%,单侧分布为57,ng/ml,，,99%,单侧,分布为,79 ng/ml,，此范围仅供参考。,各试验室应确定自己的参考值及诊断标准。,临床评价预期值：,39,临床评价,不同分布下的诊断界值,单侧上限（%）,界值(ng/ml),88.9,50.0,95.0,57.0,97.5,62.6,99.0,70.0,99.5,75.6,临床评价不同分布下的诊断界值 单侧上限（%）界值(ng/,40,不同诊断界值的临床诊断效率,127例已确诊心梗病人和100例对照标本,界值(ng/ml),特异性（%）,灵敏性（%）,符合率（%）,50.0,88.0,97.6,93.4,57.0,93.0,96.1,94.7,62.6,95.0,93.7,94.3,70.0,98.0,91.3,94.3,75.6,98.0,87.4,92.1,不同诊断界值的临床诊断效率 127例已确诊心梗病人和100例,41,ROC 曲线,ROC 曲线,42,允许的生物学变异,肌红蛋白：5.6%,CK-MB质量：9.3%,cTn：10%,允许的生物学变异,43,标准化问题,标准化问题,44,标准化问题,肌红蛋白、CK-MB质量、cTn均,尚未标准化,标准化问题肌红蛋白、CK-MB质量、cTn均尚未标准化,45,讨论,cTnI,测定标准化问题,结构稳定性、,释放形式,蛋白水解、磷酸化、氧化还原、抗原决定簇,外周血中存在形式 90%为I-C复合物。,测定校准品,不同方法之间无可比性,讨论cTnI测定标准化问题,46,讨论,TnI 与 TnT 的问题,TnT独家专利，无标准化问题。但其特异性尚不如TnI.,Mb 与Tns