单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,自身抗体的应用及研究进展,2,酶联免疫吸附法（,ELISA,）,1,间接免疫荧光法（,IFA,Indirect Fluorescent Assay,）,3,免疫印迹法（,IB,）,Westernblot,LIA,4,其它：,IDA,、,RIA,等,全自动自身抗体分析仪,自动化检测,检测定量化,单个项目随时检测,多个项目同时检测,45-90,分钟报告结果,原厂质控和校正血清,精确温度调控系统,五点定标、三重检测,风湿病的实验室诊断,血清学检查,自身抗体,特异性,非特异的免疫相关指标,滑液分析,一般的实验室检查项目,项目,检验方法,SLE,四项,ANA,间接免疫荧光,抗,DS,DNA,抗体,间接免疫荧光,抗组蛋白抗体,ELISA,抗核小体抗体,ELISA,ENA,系列,抗,RNP,免疫印迹、,ELISA,抗,SM,免疫印迹、,ELISA,抗,SSA,免疫印迹、,ELISA,抗,SSB,免疫印迹、,ELISA,抗,JO-1,免疫印迹、,ELISA,抗,SCL-70,免疫印迹、,ELISA,抗核糖体,P,蛋白,免疫印迹、,ELISA,RA,三项,AKA,（抗角质蛋白抗体）,间接免疫荧光,抗,RA33,ELISA,抗,CCP,（抗环瓜氨酸肽抗体）,ELISA,ANCA,四项,P-ANCA,（荧光模型为核周模型）,间接免疫荧光,C-ANCA,（荧光模型为细胞质模型）,间接免疫荧光,MPO-ANCA,（髓过氧化酶抗体）,ELISA,PR3-ANCA,（抗蛋白酶,3,抗体）,ELISA,常见的自身抗体及其检测方法,(1),(2),自身免疫肝炎七项,ANA,间接免疫荧光,抗,LMA,抗（肝细胞膜抗体）,间接免疫荧光,ASMA,（抗平滑肌抗体）,间接免疫荧光,抗,LKM,（抗肝肾微粒体抗体）,间接免疫荧光,抗,SLA,（抗可溶性肝抗原抗体）,间接免疫荧光,AMA,（线粒体抗体）,间接免疫荧光,抗,LSP,（抗肝脏特异性蛋白抗体）,间接免疫荧光,RF,三项,RF-IgG,ELISA,RF-IgA,ELISA,RF-IgM,ELISA,抗磷脂综合征三项（,ASP,）,ELISA,PT-IgG,（凝血素抗体）,ELISA,PT-IgM,ELISA,抗,2-,糖蛋白,1,抗体,ELISA,常见的自身抗体及其检测方法,抗,Ku,抗体（,Ku),抗,Mi,抗体（,Mi-2,）,抗,PM-Scl,抗体,抗,JO-1,抗体（,JO-1,）,多发性肌炎、皮肌炎,抗线粒体抗体,M2,型（,AMA-M2,）,原发性胆汁性肝硬化,抗,nRNP,抗体（,U1-snRNP,）,混合性结缔组织病（,MCTD,）,抗,Scl-70,抗体（,Scl-70,）,抗着丝点,B,抗体（,CENP-B,）,系统性硬化,抗,SSB/La,抗体,抗,SSA/R052,抗体,抗,SS-A/R060,抗体,干燥综合征,/,系统性红斑狼疮,抗核糖体,P,蛋白（,PO,）,抗增殖细胞核抗原抗体（,PCNA),抗,Sm,抗体,抗组蛋白抗体,抗核小体抗体,抗双链,DNA,抗体,IgG,抗体,系统性红斑狼疮,项 目 名 称,疾 病,ANA,谱,17,项（免疫印迹法）,(3),常见的自身抗体及其检测方法,(,一,),类风湿关节炎（,RA,）,类风湿因子（,RF,）,早期诊断的系列指标,抗,RA,33/36,抗体,抗核周因子（,APF,）,抗角蛋白抗体（,AKA,）,抗,Sa,抗体,抗环瓜氨酸抗体（抗,CCP,）,抗角蛋白抗体（,AKA,）,抗角蛋白抗体,(AKA),，,1979,年,Young,等发现类风湿性关节炎,(RA),血清中有一种能与鼠食管,角质层,反应的抗体，并对类风湿性关节炎,(RA),具有特异性，命名为,AKA,。,1989,年,Vincent,等提出应将,AKA,更名为,抗角质层抗体,更为恰当。,AKA,可以在,RA,发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。,AKA,检测方法：取,6,周龄雄性,Wistar,大鼠食管中下,1/3,段作为抗原，做冰冻切片，厚,4 m,5 m-70,保存备用。加,120,稀释血清，湿盒内,37,孵育,30,分钟，,PBS,漂洗，吹干，加,120,稀释的荧光素标记羊抗人,IgG,，,37,孵育,30,分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片荧光显微镜下观察。,判定标准：以,角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光,为阳性。,gene Filaggrin,类风湿因子（,RF,）,抗人,IgG,分子,Fc,片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为,IgM,、,G,、,A,、,E,型,RF,在,RA,中的阳性率为,70%,，是诊断,RA,的重要标准之一,RF,含量与,病情的活动性和严重性,成正比，持续高滴度的,RF,常提示,RA,病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。,类风湿因子（,RF,）,RF,并非,RA,独有的特异性抗体，对,RA,的诊断不具特异性,SLE 30%SS 70%90%,SSc 20%30%MCTD 50%60%,非风湿性疾病,5%,以下的正常人,RF,阳性不等于一定就是,RA,RF,阴性也不等于一定就不是,RA,RF,常用检测方法,RF 1,：,40,阳性,乳胶凝集法,（测,IgM-RF,）,RF 256 Iu/ml,双抗夹心,ElISA,法,(,测总,RF,）,RF-IgG 110IU/ml,-IgA 18IU/ml,ELISA,法,-IgM 200IU/ml,RA,早期诊断的系列指标,敏感性 特异性,抗,RA33/36,抗体,35.8%99.6%,APF 40%-80%70%-90%,AKA 40%-55%85%-95%,抗,Sa,抗体,40%-60%98.6%,抗,CCP,46%-70%96%,抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,）,瓜氨酸是,RA,血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关,抗体的主要抗原决定簇,对,RA,诊断具有高度特异性（,98%,）,可在,RA,早期出现,预测早期关节炎发展为,RA,RA,关节侵蚀破坏的早期识别及预测,(,二,),系统性红斑狼疮（,SLE,）,是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其,血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体,自身抗体,（,1,）抗核抗体谱,ANA,、抗,ds-DNA,、抗,ENA,抗体,（,2,）抗磷脂抗体,（,3,）抗组织细胞抗体,抗,RBC,抗体,抗血小板相关抗体,抗神经元抗体,（,4,）其它,RF,、,p-ANCA,抗核抗体（,ANA,）,定义,以细胞核内物质为抗原的抗体,临床意义,SLE,的筛查抗体,:,95%,阳性，但滴度与,SLE,活动性无相关,阴性基本可排除,SLE,阳性并非,SLE,特异,阳性并非风湿病特异,:,风湿病（,SLE,、,SSc,、,SS,、,RA),非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤）,服用某些药物（,INH,、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）,抗核抗体（,ANA,）,方法,间接免疫荧光法,结果判断,:,滴度,1,：,100,为阳性,常见核型,5,种,不同核型的临床意义不同,核膜型,与抗,ds-DNA,有关，,多见于,SLE,，特别是有肾炎者,均质型,与,AHA,（抗组蛋白抗体,）,、抗,DNA,有关，引起,LE,形成主要见于,SLE,、药物性狼疮,斑点型,与抗,ENA,有关，应进一步查特异性抗体,核仁型,多见于硬皮病,着丝点型,多见于,CREST,综合征,ANA,常见五种核型及临床意义,核膜型,与抗,ds-DNA,有关，,多见于,SLE,，特别是有肾炎者,均质型,与,AHA,、抗,DNA,有关，引起,LE,形成,主要见于,SLE,、药物性狼疮,斑点型,与抗,ENA,有关，应进一步查特异性抗体,核仁型,多见于硬皮病,着丝点型,多见于,CREST,综合征,ANA,检测方法,间接免疫荧光法,印迹法,ELISA,法,抗核抗体谱（,ANAs,）,定义：以细胞核内物质为抗原的抗体,抗,DNA,抗体,抗,ss-DNA,抗,ds-DNA,抗组蛋白抗体,H,1,，,H,2A,，,H,2B,，,H,3,，,H,4,抗非组蛋白抗体,抗,ENA,抗体,抗着丝点抗体,抗核仁抗体,其它,线粒体、溶酶体、高尔基体等,抗,ds-DNA,抗体,临床意义,对,SLE,的诊断有较高特异性,滴度与,SLE,活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标,与,SLE,肾损害有关,检测方法,放免法（,Farr),敏感，有利于早期预测,检测高亲合力的抗,ds-DNA,间接免疫荧光法,(IF),特异,ELISA,可检测低亲合力的抗,ds-DNA,有助于中枢狼疮的病情监测,金标免疫斑点法,抗,ENA,抗体,抗,RNP MCTD100%,阳性，且滴度高,双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化,肾脏保护性抗体？,抗,Sm SLE,的标记性抗体，阳性率,30%,有助于早期、不典型及治疗缓解后,SLE,的回顾性诊断,抗,Sm,阳性一定伴抗,RNP,阳性，但抗,RNP,阳性可单独存在,抗,SSA ,原发性,SS,：,60-75%,SLE:40-50%,与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、,血管炎、紫癜相关,可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞,抗,SSB,原发性,SS,：,40%,，较抗,SSA,更特异,其它,CTD,伴抗,SSB,者常伴继发性,SS,抗,ENA,抗体,抗,Scl-70,硬皮病标记性抗体,抗,Jo-1,多肌炎,/,皮肌炎标记性抗体,抗,Rib,胞浆抗原,核糖体位于胞浆内,临床意义,是,SLE,的又一特异性抗体，阳性率,10-20%,多见于,SLE,活动期,与抗,ds-DNA,抗体的消长相平行,但不会随病情缓解立即消失,可持续,1-2,年后才转阴,抗核小体抗体（,AnuA,）,核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由,DNA,和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在,SLE,的诱导和致病中起重要作用,对,SLE,的早期诊断有重要意义,比抗,ds-DNA,、抗组蛋白抗体更早出现,阳性率：,50%90%,特异性,98%,(,三,),皮肌炎,/,多发性肌炎（,PM/DM,）,免疫学检查,ANA,ENA,抗,Jo-1,阳性,其它检查,肌酶谱,肌酸磷酸激酶（,CPK,）,:MM-,心肌和骨骼肌,MB-,心肌,BB-,平滑肌和脑内,乳酸脱氢酶（,LDH,）,谷草转氨酶（,AST,）,谷丙转氨酶（,ALT,）,碱性磷酸酶（,ALP,）,(,四,),干燥综合征（,SS,）,ANA,阳性率,40%70%,ENA,抗,SSA,抗体阳性率,70%96%,抗,SSB,抗体阳性率,50%87%,抗,-Fordrin,对于,pSS,或,sSS,的诊断有一,定意义，但特异性和敏感性并不理想。,RF,阳性率,75%100%,高球蛋白血症,WBC,下降,(,五,),系统性硬化病（,pSS,）,ANA,阳性率,50%55%,ENA,抗,Scl-70,阳性率,15%40%,抗着丝点抗体,(ACA),阳性,(,六,),混合性结缔组织病（,MCTD,）,ANA,阳性,ENA,抗,RNP,高滴度阳性,（七）血管炎,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA,）,荧光图谱分型,主要抗原成分,胞浆型,cANCA,核周型,pANCA,蛋白酶,3,（,PR,3,）,髓过氧化物酶（,MPO,）,非典型型（,cANCA,）,不清,ANCA,的临床意义,c-ANCA,和,PR,3,-ANCA,对韦格纳肉芽肿有高度特异性（,95%,），敏感性,80%,与病情活动性相关,常作为判断药物疗效和病情复发的指标,p-ANCA,和,MPO-ANCA,不如,c-ANCA,具有诊断特异性,阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关,主要与,显微镜下多血管炎,坏死性新月体肾小球肾炎,变应性肉芽肿性血管炎,相关,（八）抗磷脂抗体综合征（,APS,）,是一种非炎症性自身免疫病，临床上以动,/,静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体,血清