单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,涂片技术,是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。,涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液,1,血涂片制备,推片,载玻片,血液,一张满意的血涂片应厚薄均匀,头 体 尾鲜明,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头,部写上姓名和编号,李四,B,1 2 3,血涂片制备推片载玻片血液一张满意的血涂片应厚薄均匀涂片干燥后,2,方法与步骤,推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧,方法与步骤推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧,3,再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。,再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻,4,实验二 血涂片制备 白细胞分类计数课件,5,3045,两玻片的角度以30-45为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。,3045两玻片的角度以30-45为宜，轻轻将双凹片向前,6,血涂片,血涂片,7,不良血涂片,实验二 血涂片制备 白细胞分类计数课件,8,实验用品,器材:医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片、双凹片（推片）。,试剂:,Wrights（瑞氏）染液：Wrights色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。,实验用品器材:医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载,9,瑞氏染色原理,瑞氏粉,是由,伊红,和,美蓝,混合后组成的一种中性盐染料。伊红是,一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱,性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以,E-代表伊红。将适量的ME溶解在,甲醇,中，即成为,瑞氏染液,。,瑞氏染色原理 瑞氏粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性,10,甲醇的作用,可使ME溶解，解离为M+和E，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。,各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。,细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色；当细胞含酸、碱性物质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡紫红色。,瑞氏染色原理,甲醇的作用可使ME溶解，解离为M+和E，这,11,血涂片染色,勿冲洗再加,瑞氏染色液5-8滴后将液和液充分混匀静置10分钟,直接流水冲洗3-5分钟,（,切勿先倒掉染液,）,涂片经水洗干燥后用油镜,分类计数100个白细胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆盖整个血膜1分钟,血涂片染色勿冲洗再加瑞氏染色液5-8滴后将液和液充分混,12,染色,浓染：待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wrights染液盖满血膜为止，染色35 min。,淡染：然后滴加等量缓冲液，使其与染液均匀混合，静置1015 min。用流水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。,染色浓染：待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wrights,13,血涂片的观察,低倍镜观察,1.染色情况,(满意、偏酸、偏碱）,2.细胞分布情况,油镜下分类计数：体尾交界处。,油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计数100个白细胞）,李四123,血涂片的观察低倍镜观察李四123,14,体尾交界处,理想区,域,细胞重叠,细胞太稀,理想区域,体尾交界处理想区域 细胞重叠,15,各类成熟白细胞的形态学：,中性粒细胞（Ne）,：,在瑞氏染色血涂片上呈,圆形,，,直径1013m,，,胞浆,染粉红色,，,核形,一叶（杆状核）至五叶不等，,以三叶者多见,，,染成深紫红色,，,胞浆,中有许多,细小均匀紫红色颗粒,。,各类成熟白细胞的形态学：中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂,16,嗜酸性粒细胞（Eo）：,较中性粒细胞稍大,，,胞核,多为两叶，呈眼镜、八字形,，,核染色质,粗糙染深紫红色,，,胞浆,内充满,粗大均匀的嗜酸性颗粒,，瑞氏染色时呈,桔红色,，有折光性。,嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜,17,嗜碱性粒细胞（Ba）：,胞浆,中含有大小不等的,嗜碱性颗粒,，瑞氏染色时呈,兰黑色,。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；,核,呈,淡紫红色常看不清,，呈杆状或分叶状。,嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染,18,淋巴细胞（Ly）：,胞体,呈圆形，直径介于,615m,之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径69m，,核,大呈深紫色致密而浓染,，,胞浆,量极少,；大淋巴细胞,胞浆,量较多，呈,清澈的淡蓝色,，可见,少量嗜苯胺蓝颗粒,，,胞核,圆或椭圆,，,常偏向细胞一侧,，染色较深。,淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于615m之间，在成,19,单核细胞（Mo）：,在瑞氏染色涂片上为,1220m,，,胞体,圆形、椭圆形或不规则形,；,核形,多种多样，最重要的特点是,染色质,较细致疏松，呈丝网状或条缕状,，,着色较淡,胞浆,较多，淡兰色,，含大量,细小尘土样颗粒,。,单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形,20,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,淋巴细胞,嗜碱性粒细胞（右）,单核细胞,血小板,中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）单核细胞血小,21,使用时，直接删除本页！,精品课件，你值得拥有,！,精品课件，你值得拥有,！,使用时，直接删除本页！精品课件，你值得拥有！精品课件，你值得,22,使用时，直接删除本页！,精品课件，你值得拥有,！,精品课件，你值得拥有,！,使用时，直接删除本页！精品课件，你值得拥有！精品课件，你值得,23,涂片制备的注意事项,染色操作注意事项,染色质量的控制,涂片制备的注意事项,24,