单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,微生物的生理生化反应,微生物的生理生化反应,第1页,微生物生理生化反应,淀粉水解试验,糖发酵试验,吲哚、甲基红、,V-P,反应,微生物的生理生化反应,第2页,微生物对大分子淀粉不能直接利用，必须靠产生胞外淀粉酶将其分解后才能吸收利用。,微生物胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）将大分子物质分解过程,能够经过观察细菌菌落周围物质改变,来证实。,淀粉遇碘液呈蓝色，但在淀粉被细菌水解区域，遇碘不再呈蓝色，这可作为细菌产生淀粉酶证据。,1,、淀粉水解试验,微生物的生理生化反应,第3页,菌种：,枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。,培养基：,固体淀粉培养基。,溶液或试剂：,卢戈氏碘液。,器材：,无菌培养皿，接种环，试管架。,1,、淀粉水解试验,微生物的生理生化反应,第4页,操作步骤：,（,1,）无菌操作制备淀粉固定培养基平板。,（,2,）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平板不一样个别划线接种，在平板反面分别写上菌名。,（,4,）将平板倒置在,37,温箱中培养,24h,。,（,5,）观察各种细菌生长情况。滴入少许卢戈氏碘液于平皿中,轻轻旋转平板,使碘液均匀铺满整个平板。,1,、淀粉水解试验,+,+,枯草,大肠,微生物的生理生化反应,第5页,结果：,将结果填入下表。,“,”,表示阳性，,“,”,表示阴性。,菌名,枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,淀粉水解试验,1,、淀粉水解试验,微生物的生理生化反应,第6页,2,、糖发酵试验,糖发酵试验是常见判别微生物生化反应。一些细菌能利用糖类作为碳源和能源，使糖类分解而,产酸产气或产酸不产气,。不一样种细菌对于各种糖类利用能力不一样，分解产物也不一样。,大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；,普通变形杆菌只能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。,伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖。,微生物的生理生化反应,第7页,1.,菌种：大肠杆菌，普通变形杆菌斜面各一,支。,2.,培养基：葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发,酵培养基试管各,3,支（内装有倒置杜汉氏,小管）。,3.,仪器或其它用具：试管架，接种环等。,2,、糖发酵试验,微生物的生理生化反应,第8页,产酸指示剂、倒置小管,微生物的生理生化反应,第9页,1.,用标签纸在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称和所接种细菌菌名。,2.,取葡萄糖发酵培养基试管,3,支，分别接入大肠杆菌，普通变形杆菌，,第三支不接种，作为对照。,另取乳糖发酵培养基试管,3,支，一样分别接入大肠杆菌，普通变形杆菌，,第三支不接种，作为对照。,2,、糖发酵试验,微生物的生理生化反应,第10页,在接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，预防倒置小管进入气泡。,3.,将接种过和作为对照,6,支试管均置,37,培养,24,48h,。,4.,观察各试管颜色改变及杜汉氏小管中有没有气泡。,2,、糖发酵试验,微生物的生理生化反应,第11页,试验汇报,将结果填入下表。,“,+,”,表示产酸或产气，,“,-,”,表示不产酸或不产气。,糖类发酵,大肠杆菌,普通变形杆菌,对照,葡萄糖发酵,乳糖发酵,2,、糖发酵试验,微生物的生理生化反应,第12页,吲哚试验、甲基红试验与,V.P.,反应,吲哚试验（,indol test,）,甲基红试验（,methyl red test,）,V.P.,反应（,Voges-Prokauer test,）,微生物的生理生化反应,第13页,一、目标要求,了解试验原理及其在肠道菌判定中意义和方法。,微生物的生理生化反应,第14页,二、基础原理,吲哚试验、甲基红试验、伏,-,普试验主要用来判别大肠杆菌与产气肠杆菌（,Enterobacter aerogenes,）。,主要是用于水细菌学检验，因为大肠杆菌虽非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超出一定数量则表示受粪便污染；,而产气肠杆菌则广泛存在于自然界中，所以，检验水时要将二者区分开来。,微生物的生理生化反应,第15页,有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色玫瑰吲哚。,色氨酸水解反应,吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应,大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。,吲哚试验,微生物的生理生化反应,第16页,微生物的生理生化反应,第17页,一些细菌在糖代谢过程中，将培养基中糖分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基变酸，加入培养基中甲基红指示剂,pH4.2,（红色）,-6.3,（黄色）,，可使培养基由原来桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。,大肠杆菌发酵葡萄糖产酸,;,产气肠杆菌将有机酸转化为非酸性末端产物,如乙醇、丙酮酸等。,甲基红试验,微生物的生理生化反应,第18页,伏,-,普试验,一些细菌可利用葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进行缩合，脱羧变成乙酰甲基甲醇，此物在碱性条件下能被空气中氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸胍基作用，生成红色化合物，即伏,-,普反应阳性，没有红色化合物产生则为阴性。,产气肠杆菌伏,-,普反应阳性，大肠杆菌伏,-,普为阴性。,微生物的生理生化反应,第19页,微生物的生理生化反应,第20页,三、器材,菌种,大肠杆菌，产气肠杆菌；,培养基,蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基；,溶液或试剂,甲基红试剂，,40,KOH,，,5,-,萘酚，乙醚，吲哚试剂等。,微生物的生理生化反应,第21页,四、操作步骤,1,接种与培养,(1),将大肠杆菌、产气肠杆菌分别接种于,2,支蛋白胨水培养基中（做吲哚试验），置,37,温室中培养,2,天。,(2),将上述二菌分别接种于,2,支葡萄糖蛋白胨水培养基中（做甲基红试验与伏,-,普试验），置,37,温室培养,2,天。,微生物的生理生化反应,第22页,2,观察结果,(1),吲哚试验,于培养,48,小时后蛋白胨水培养物内加,3,4,滴乙醚，摇动数次，静置,1,3,分钟，待乙醚上升后，沿管壁渐渐加入,2,滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。,微生物的生理生化反应,第23页,(2),甲基红试验,培养,48,小时后，将葡萄糖蛋白胨水培养物分为两小管（其中一管留做伏,-,普试验），在一管内加甲基红试剂,2,滴，培养基变红色者为阳性，黄色者为阴性。,微生物的生理生化反应,第24页,(3),伏,普试验,培养两天后，将另一支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入,5,10,滴,40,KOH,，然后加入等量,5,-,萘酚溶液，用力振荡，再放入,37,温箱中保温,15,30min,，以加紧反应速度。培养物呈红色者，为阳性。,微生物的生理生化反应,第25页,五、试验汇报,1,结果,将试验结果填入下表。,“,+,”,表示阳性反应；,“,-,”,表示阴性反应。,菌名,吲哚试验,甲基红试验,伏,普试验,大肠杆菌,产气肠菌,对 照,微生物的生理生化反应,第26页,