单击此处编辑母版样式,单击此处编辑幻灯片母版样式,第二层,第三层,第四层,第五层,*,第25章 流淌注射分析及微流控技术,25.1.概论,溶液化学分析或称湿法分析大约已有200多年的历史，是分析化学中最根本和最为经典的分析方法。,这些分析方法多承受手工操作完成。它费时、费力、分析速度慢，而且分析结果常常受到操作者主观因素的影响。,另一方面，在试验室完成一次分别、分析所需要的分析设备种类多、体积大、试样和试剂消耗量很大、难于操作，且不便于进呈现场分析。为此，人们尝试争论并进展了一系列自动分析方法及装置。,25.2.流淌注射分析,22.2.1.超临界流体和超临界流体色谱,流淌注射分析Flow Injection Analysis,FIA是在间歇式分析Discrete analysis，也称自动分析和连续流淌分析Continuous flow analysis，CFA的根底上，吸取了高效液相色谱的某些特点进展而来的。,间歇式分析，是通过机械式自动分析装置模拟手工分析步骤的技术。,连续流淌分析是将化学分析所使用的试剂和试样按确定挨次和比例用泵和管道输送到确定的区域进展混合，待反响完成之后再经由检测器检测反响产物并记录和显示分析结果。,25.2.流淌注射分析,25.2.流淌注射分析,连续流淌分析抑制了间歇式自动分析的缺乏，具有通用性强、分析速度快30 50样/h、易于自动化的优点。然而，连续流淌分析技术也因气泡的引入而带来一些缺陷：,1.气泡的可压缩性使液流产生脉动并导致液流流淌状态不稳定；,2.气泡体积不易把握；,3.有气泡存在时，压降和流速与管材种类有关；,4.塑料管道中的气泡有绝缘作用，易产生静电积存从而干扰一些传感器的正常工作；,5.载流运动不易把握，不易瞬间起停。,25.2.流淌注射分析,流淌注射分析废弃了用气泡间隔样品的方法，将试样溶液直接以“试样塞”的形式注入到管道的试剂载流中，化学分析可在非平衡的动态条件下进展。大量试验争论及应用成果说明，FIA具有更多优点：,1.操作简便。,2.重现性好。,3.试剂和试样消耗量小，环境友好。,4.分析速度快。,5.适用于物理和物理化学过程争论。,6.仪器简洁，易于自动化。,7.应用范围广。,25.2.流淌注射分析,一般可将FIA过程概括为：将确定体积的试样液以“塞子”plug的形式，间歇地注入处处于密闭的、具有确定组成的流淌液体试剂或水载流中，试样塞在被载流推入反响管道的过程中，因对流和集中作用而分散形成具有确定浓度梯度的试样带sample zone。该试样带与载流中的某些组分发生化学反响生成可被检测的物质，最终被载流带入检测器进展检测，并由记录仪连续记录响应信号随时间的变化状况。,25.2.1.流淌注射分析根本原理,25.2.1.1.物理混合过程及分散度,1.物理混合过程,在FIA中，在试样以“试样塞”进入反响管道并随载流向前移动的过程中，试样塞的分子与载流之间将产生分子集中和对流集中作用并导致试样“带”变宽，即试样的分散。在混合过程中，轴向对流和径向分子集中两种作用的竞争准备了输出峰的外形。,25.2.1.1.物理混合过程及分散度,2.分散度,所谓分散度，是指产生分析读数的液流组分在集中过程发生前后的浓度比值，即：,3.影响分散度的因素,25.2.1.2.化学动力学过程,假设在简洁FIA系统中，试剂R与试样中待测物A在管道中经混合分散并发生如下化学反响：,由于试剂R与试样中待测物A在管道中的分散混合和化学反响不完全，因此在物理和化学方面均存在动力学过程。,在任一时刻t，试样在管道中的化学反响、反响速率、产物形成速率与分散度之间的关系可用下式描述：,25.2.1.3.能量转换过程,FIA分析中的能量转换过程是通过FIA仪器中的检测系统完成的。,检测系统能将反响产物的特性或试样本身的性质转换为可测的电信号，并通过仪器仪表显示或记录。,检测器输出信号或记录仪的记录曲线，实质上是对试剂和试样间的物理混合、化学动力学和能量转换三种过程的综合反映。,FIA系统可与很多能量转换检测器联用到达多种分析目的。,25.2.2.流淌注射器的组成,25.2.2.1.蠕动泵,25.2.2.2.进样系统,25.2.2.3.反响器,反响器是被注入的“试样塞”在载流中分散，并与其中的待测组分发生化学反响生成可被检测的物质的场所。,1.开管式反响器 包括直管straight和盘管coiled反响器。前者实际上是一段具有确定长度的细管。,2.填充式反响器 包括填充层packed bed和单珠串single bead string反响器等。前者是按需要截取的一段填充惰性球状微粒玻璃珠的管子。,25.2.2.4.检测系统及响应曲线,FIA检测系统是将经过流通池的待测物的某种理化特性转换为可以识别并记录的信号，其组成与HPLC分析所使用的检测器类似，主要由流通池flow-cell、某些信号转换元件传感器和记录仪等组成。,原子吸取和放射光谱仪、荧光光度计、电化学检测器、折射仪以及分光光度计等均用于FIA过程的检测，其中以分光光度计的应用最为广泛。,典型的FIA输出信号是一个尖形峰。,FIA分析中，待测物随着试样带的移动，可形成中间浓度高、两端浓度低的梯度曲线，此曲线实质上是试样浓度的分布图。,双峰、负峰和不规章峰的消逝可以通过转变试验条件得以避开。,25.2.3.流淌注射分析的应用,25.2.3.1.低分散度流淌注射分析体系,当需要快速测量试样本身性质时承受低分散度。由于不涉及化学反响，因此要求试样尽可能集中，不经稀释地流过检测器，即试样与载流的混合程度应尽可能地小。实际工作中，通过增加进样体积、减小注入点与检测器响应点之间的距离、降低泵速等措施降低试样的分散度，可获得较高的分析灵敏度。,蠕动泵P,样品S,AAS,反应盘管,RC,废液W,试剂R,载流,载流,图25-8.合并带注样-FIA-FAAS方法测定Mg,2+,示意图,25.2.3.2.中分散度流淌注射分析体系,当试样必需与一种或几种试剂进展化学反响转化为另一种可被检测的化合物时，需承受中度分散的方法如各种光度法与FIA系统的联用。该FIA分析系统中，试样带在管道内运行时须与试剂适当混合，并有足够的时间进展反响、产生确定量的可以被检测的化合物。,1.试剂预混合,25.2.3.2.中分散度流淌注射分析体系,2.FIA分别分析技术,25.2.3.2.中分散度流淌注射分析体系,3.停流技术Stopped-flow,事实上，当流淌完全停立刻，浓度的分散过程也几乎完全停顿。FIA停流法就是在试样带进入检测器的某一时刻停泵，通过观测静态条件下反响混合物进一步反响的参数如吸光度随时间的变化来完成某些分析的技术。停流法可用于争论反响机理、测定反响速率以及各种慢反响体系的流淌注射分析。,25.2.3.2.中分散度流淌注射分析体系,4.流淌注射催化分析,在很多化学反响中，反响速率随催化剂浓度的转变而发生相应的、显著的变化，通过测定反响物的削减速率或产物的生成速率可间接获得催化剂的浓度。基于此原理而建立的测定催化剂含量的高灵敏方法称之为催化分析法。例如水中微量I-的分析可基于I-对以下反响的催化作用：,25.2.3.3.高分散流淌注射分析体系,高分散流淌注射分析常用于滴定分析。,25.3.微流控分析,人们沿用微电子工业中加工集成电路的思路，通过微机电加工技术Micro electro-mechanical systems,MEMS，在方寸大小的玻璃、硅、石英和高聚物等材料薄片上，加工出具有确定构造的微细通道网络及其他相关分析器件，形成集成化的微流控芯片microfluidic chip，通过把握试样溶液和试剂溶液在芯片通道网络中的有序流淌，完成取样、稀释浓缩、反响、分别、检测等化学分析的根本操作。,25.3.微流控分析,一般来说，微流控分析系统具有以下分析特点：,1.分析速度极快。,2.试样与试剂消耗在nL L水平。,3.通过MEMS技术，不仅可以在芯片上制作微细通道网络，而且还可以在芯片上加工制作诸如微阀、微泵、微电极和微透镜等微分析器件，形成高度集成化的微流控芯片。,4.微流控芯片的微小尺寸使材料消耗甚微。,微流控分析系统的最终目标是通过化学分析设备的微型化与集成化，最大限度地把分析试验室的功能如取样、试样预处理、反响、分别、检测、数据处理等转移到以微流控分析芯片为核心的便携式器中。,25.3.2.微流控分析系统的液流驱动和把握,25.3.2.微流控分析系统的液流驱动和把握,25.3.3.微混合、反响和分别系统,微流控分析系统中，待测物质或其衍生物进入检测器前所需的混合、反响、分别等过程是在芯片的通道网络中完成的。,25.3.4.微流控分析系统的检测器,虽然常规流淌分析中所用到检测器原则上都可以用于微流控分析，但微流控分析本身的特殊性对检测器提出了一些特殊的要求，例如，(1).高的灵敏度和信噪比。(2).响应速度快。(3).体积小，易集成化。,完全满足以上要求的检测器并不多。目前在微流控分析中应用得最多的是激光诱导荧光检测器，其次是电化学检测器。,25.3.4.微流控分析系统的检测器,1.激光诱导荧光检测,由于激光可发出高强度的相干光，能聚焦成很小的光斑，因此，在微流控分析中，大多承受激光做光源的激光诱导荧光Laser induced fluorescence,LIF检测，其检测下限一般可到达10-910-12 mol.L-1。,25.3.4.微流控分析系统的检测器,2.电化学检测器,电化学检测是一类常用的分析测试方法。不管何种电化学检测法都承受电极作为传感器，直接将溶液中待测组分的化学信号转变为电信号。这一传感方式特殊符合微流控分析系统微型化、集成化的要求。,25.3.4.微流控分析系统的检测器,3.其他类型的检测器,电导检测器,紫外-可见光检测器,质谱检测器,化学发光检测器等,25.3.5.微流控分析系统的应用选例,1.荧光激发细胞分选,25.3.5.微流控分析系统的应用选例,2.芯片阵列毛细管电泳分别DNA片段,25.3.5.微流控分析系统的应用选例,3.微型DNA全分析系统,