单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,海洋沉积物中可培养微生物的多样性,汇报人：卢婧雯,指导老师：吴敏,海洋沉积物中可培养微生物的多样性汇报人：卢婧雯,1,报告内容,一、国内外研究动态,二、研究目的与意义,三、主要研究内容,四、研究材料、方法与主要技术路线,五、研究条件、可行性与困难,六、研究进度安排,七、预期结果,八、参考文献,报告内容一、国内外研究动态,2,海洋沉积物概况,地球上最复杂的微生物栖息地,海洋沉积物是海洋历史的记录，包括软泥沙、灰尘、动植物的遗骸、宇宙尘埃等。,为开发利用微生物资源提供重要的参考依据,为人类了解生命的起源和进化提供重要的先说,海洋沉积物概况地球上最复杂的微生物栖息地,3,一、国内外研究进展,在已报道的微生物物种中，海洋微生物不到总数的10%,在整个海洋环境中只有0.01-10的微生物是可培的，而可培的深海微生物则更少。,一、国内外研究进展在已报道的微生物物种中，海洋微生物不到总,4,全球沉积物采样点,From National Oceanic and Atmospheric Administration，United Stateshttp:/www.noaa.gov,全球沉积物采样点From National Oceanic,5,海洋沉积物中存在的微生物,细菌：proteobacteria 包括、变型菌纲；,Holophaga/Acidobacteria；,Planctomycetales,古菌：Euryarchaeota和Crenarchaeota,海洋沉积物中存在的微生物细菌：proteobacteria,6,二、研究目的与意义,分离培养海洋沉积物中的微生物，为微生物种质资源开发提供材料，分析海洋沉积物中可培养微生物群落结构，评价其多样性。,对海洋微生物的生物活性物质进行筛选，寻找具有潜在工业应用价值的生物材料。,对疑似新种进行多相分类学研究。,二、研究目的与意义分离培养海洋沉积物中的微生物，为微生物种,7,三、主要研究内容,海洋沉积物中微生物的分离,可培养微生物多样性分析,微生物活性物质筛选,疑似新种的多相分类学研究,三、主要研究内容海洋沉积物中微生物的分离,8,四、研究材料、方法与主要技术路线,研究材料：,海洋沉积物样品,（海洋二所提供）,中国南海,西南印度洋,四、研究材料、方法与主要技术路线研究材料：海洋沉积物样品中国,9,技术路线：,海洋沉积物样品,悬浮,16S rDNA 测序,疑似新种,多相分类学研究,活性物质的筛选,微生物的分离纯化,培养基设计,挑取单菌落,多样性分析,涂平板,菌株保藏,短时间 充分,富集,富集,涂平板,菌株保藏,菌株保藏,技术路线：海洋沉积物样品悬浮16S rDNA 测序疑似新种,10,五、可行性与困难,可行性：,1.实验室有较成熟的微生物培养和鉴定平台；,2.可获得较丰富的沉积物样品；,困难：,1.微生物分离鉴定实验方法不熟悉；,2.深海微生物的可培养率较低。,五、可行性与困难可行性：,11,经费预算,生化试剂：2000 元,序列测定：3000 元,指标测定（电镜、脂肪酸、GC含量）：2000 元,标株购买：2000 元,其他耗材：1000 元,总计：10000 元左右,经费预算生化试剂：2000 元,12,六、研究进度安排,2009.11-2010.2 微生物筛选、分离、纯化；,2010.2-2010.3 16S rDNA序列测定和分析；,2010.3-2011.1 多相分类学研究及活性物质筛选,2011.1以后 完成论文,六、研究进度安排2009.11-2010.2 微生物筛选,13,七、预期结果,构建海洋沉积物菌株库，完成相关生物信息的描述（多样性、活性物质等）；,参与分离鉴定微生物新物种1-2个；,建立海洋微生物新种1-2个。,七、预期结果构建海洋沉积物菌株库，完成相关生物信息的描述（,14,八、参考文献,1 Byung-Yong Kim.International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology(2006),56,26532656,2 S.Shivaji.International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology(2005),55,14531456,3 Jung-Hoon Yoon.International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology(2004),54,17991803,4 Fengqin Sun,Baojiang Wang,Xiupian Liu,Qiliang Lai,Yaping Du,Guangyu Li,Jie Luo and Zongze Shao.IJSEM Papers in Press(2009),5 So-Jeong Kim,Soo-Je Park,Dae-No Yoon,Byoung-Joon Park,Bo-Ram Choi,Dong-Hun Lee,Yul Roh and Sung-Keun Rhee.Marinobacterium maritimum sp.nov.,a marine bacterium,isolated from the Arctic Sediment.IJSEM Papers in Press(2009),6 Parkes R J,Cragg B A,Bale S J,et al.Deep bacterial bio-sphere in Pacific Ocean sediments.Nature,1994,371:410-413.,7Newberry C J,Webster G,Cragg B A,et al.Diversity of pro-karyotes and Methanogenesis in deep subsurface sediments from the Nankai Trough,Ocean Drilling Program Leg 190.Environmental Microbiology,2004,6(3):274-287.,8王鹏.深海沉积物微生物多样性及其与环境相互关系的研究D青岛:中国海洋大学,2005,9 许飞，戴欣等.南沙海区沉积物中细菌和古细菌16SrDNA多样性的研究.2004,35(1):89-94.,10Sorensen K B,Teske A.Stratified communities of active ar-chaea in deep marine subsurface sediments.Applied and En-vironmental Microbiology,2006,72(7):4596-4603,八、参考文献1 Byung-Yong Kim.Int,15,谢 谢,16,培养基：,1、常规2216或寡营养的2216,2、M2,3、ISP2,4、改良培养基：,（1）微量元素（Mo 等）（2）维生素（烟酸等）（3）C、N源多样化（设计碳氮源配方）（4）电子受体（厌氧微生物）（Fe,3+,）（5）缓冲剂（pH精确控制）,培养基：,17,微生物的分离鉴定：,1、根据菌落形态的不同，进行初步挑选。,2、对纯培养菌株的16S rDNA进行RFLP分析，挑选谱型不同的菌株进行16S rDNA测序。,微生物的分离鉴定：,18,微生物多相分类学研究方法,糖醇利用,产酸实验,酶学实验,抗生素敏感性,极性脂分析,脂肪酸分析,醌分析,细胞壁分析,温度、pH梯度NaCl浓度梯度,革兰氏染色,电镜观察,16S rDNA测定,G+C含量测定,DNA杂交,微生物多相分类学研究方法糖醇利用极性,19,