单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,IGF-,基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究,钱静 姚登福,南通大学附属医院临床医学研究中心,IGF-基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究,研究背景,肝细胞癌,(HCC),是与慢性病毒感染密切相关,流行病调查，我国目前约,9 300,万乙肝病毒携带者，约,4 000,万丙型肝炎病毒感染者。,预后差，,5,年生存率约,11%,。,研究背景肝细胞癌(HCC)是与慢性病毒感染密切相关,遗传学,基因突变,基因杂合丢失,微卫星不稳定,原癌基因激活抑癌基因失活,肝癌,表观遗传学,DNA,甲基化,组蛋白修饰,染色体重塑,肝癌发病机制,遗传学原癌基因激活抑癌基因失活肝癌表观遗传学肝癌发病机制,DNA,甲基化原理,DNA,甲基化主要发生在,CpG,二核苷序列的胞嘧啶上,DNA 甲基化原理DNA甲基化主要发生在CpG二核苷序列的胞,胰岛素样生长因子,（,IGF-,）,IGF-,是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原，在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。,IGF-,在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量表达,但出生后基因迅速降低直至关闭,肝细胞癌变时,IGF2,呈胚胎性过量表达,并具有强烈的致有丝分裂剂作用,参与肿瘤细胞增生及分化。,胰岛素样生长因子（IGF-）IGF-是一种与肿瘤形成密,IGF-基因启动子甲基化状态与肝癌发生关系研究,IGF-,基因启动子与基因表达的关系,E1,E2,E3,E4,E5,E6,E7,E8,E9,P,1,P,2,P,3,P,4,人,P,2,IGF-基因启动子与基因表达的关系E1E2E3E4E5E6,IGF,-,信号途径与肝癌,IGF-,IRS,SHC,p,p,p,p,p,p,PI3K,Akt,Ras,Raf,MAPK,IGF-R,Proliferation Survival Metastasis,IGF-,IGF-,IGF-信号途径与肝癌IGF-IRSSHCpppppp,实验目的,本研究动态观察鼠肝细胞癌变过程中,IGF-,基因启动子甲基化状态改变及其与,IGF-,基因表达的关系；,同时分析人不同肝组织中,IGF-,基因启动子甲基化状态及与临床病理学特征之间的关系，探讨,IGF-,启动子甲基化状态改变在,HCC,形成中的作用机制。,实验目的,材料和方法,以,2-,乙酰氨基芴（,2-FAA,）喂饲雄性,Sprague-Dawley,（,SD,）鼠诱发肝细胞癌变，通过病理组织学方法（,HE,染色）观察肝细胞形态学动态变化；,以甲基化特异性聚合酶链反应（,MSP,）检测鼠,IGF-,基因,P2,甲基化状态；以酶联免疫吸附法（,ELISA,）定量检测鼠外周血和肝组织,IGF-,基因的蛋白表达水平；,以,MSP,检测人类肝细胞癌、癌旁以及正常肝脏组织,IGF-,基因,P3,甲基化状态。,材料和方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA,图,1,诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（,HE,染色,200,）,A,：正常；,B,：早期；,C,：中期；,D,：晚期,结果与讨论,图1 诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（HE染色200）,图,2,癌变过程中鼠,IGF-P2 CpG,岛甲基化状态电泳分析,M,：甲基化；,U,：非甲基化；,1,：正常肝；,2,：变性肝；,3,：癌前肝；,4,：癌变肝；,5,：部分甲基化,图2 癌变过程中鼠IGF-P2 CpG岛甲基化状态电泳分,表,1,诱癌过程中,IGF-P2,甲基化状态的动态观察,表1 诱癌过程中IGF-P2甲基化状态的动态观察,表,2,诱癌过程中鼠血和肝,IGF-,表达水平的定量分析,1,、,Pearson,相关显示，鼠肝和血,IGF-,蛋白浓度呈正相关（,r,=0.97,，,P,=0.000,）,2,、,Spearman,相关显示，,IGF-P,2,去甲基化与外周血（,r,s,=-0.89,，,P,=0.000,）和鼠肝蛋白浓度均呈正相关（,r,s,=0.84,，,P,=0.000,）,表2 诱癌过程中鼠血和肝IGF-表达水平的定量分析1、Pe,图,3,人肝癌组织,IGF-,基因,P3CpG,岛甲基化电泳图谱,U:,非甲基化；,M,：甲基化；,T:,癌；,NT,：癌旁；,N:,正常肝；,m:marker,图3 人肝癌组织IGF-基因P3CpG岛甲基化电泳图谱,表,3,人肝癌组织中,IGF-,基因,P3,甲基化率比较,表3 人肝癌组织中IGF-基因P3甲基化率比较,表,4,癌旁组织,IGF-P3,甲基化的临床病理学特征,表4 癌旁组织IGF-P3甲基化的临床病理学特征,结 论,1.,随着肝细胞癌变，,IGF-,基因启动子的甲基化率逐步降低，甲基化状态的改变贯穿肝细胞癌变过程，这有助于探讨肝癌发病机制。,2.,IGF-,基因启动子的去甲基化状态改变与蛋白表达水平呈现显著正相关，基因的去甲基化调控基因表达上调而导致蛋白水平增高，参与肝细胞癌变。,3.IGF-II,启动子,CpG,岛甲基化程度与,HBV,感染与否密切相关，而这对于,HBV,相关肝细胞癌发生的监测,/,预测具有潜在的应用前景。,结 论1.随着肝细胞癌变，IGF-基因启动子的甲,E-mail:,Thanks for your attention!,E-mail:Thanks,