,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第七章 革兰阴性球菌,李向阳,奈瑟菌属（,Neisseria,）,布兰汉菌属（,Branhamella,）,概述,“伯杰鉴定细菌学手册”第9版,将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科,奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（,N.gonorrhoeae,）、,脑膜炎奈瑟菌（,N.meningitidis,）,以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌（,M.catarrhalis,）,是主要的致病菌。,目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论,一、分类,淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病,寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌,解乳糖奈瑟菌,、,干燥奈瑟菌,、,微黄奈瑟菌,、,粘,液奈瑟菌,、,浅黄奈瑟菌,、,灰色奈瑟菌,、,延长奈,瑟菌,、,去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌,第一节 奈瑟菌属,二、脑膜炎奈瑟菌临床意义,寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌,物或空气微滴核而传播。,流行性脑脊髓膜炎,冬末春初，多为学龄儿童、青少年,感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎,可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激,症阳性、甚至休克和,DIC,等；菌血症和细菌的损,伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑,脑膜炎奈瑟菌临床意义,尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染，急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。,主要致病物质是脂多糖,依据荚膜多糖的抗原成分可分为：,A、B、C、,等13个血清群，我国,A,群占95.8%，其余为,B、C,等群。,淋病奈瑟菌临床意义,淋病的病原菌,主要通过性接触直接感染,在分娩时通过产道感染新生儿,临床表现为：,单纯性淋病,盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病,淋菌性结膜炎,播散性淋病,致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多,糖和铁调节蛋白,1形态,革兰阴性双球菌,直径0.61.5,m,形似双肾或咖啡豆样，凹面相对,无动力，无芽胞，,某些菌种形成荚膜,三、生物学特性,2培养特性,需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏,感，在培养基中需加入可溶性淀粉。,需氧生长，初次分离需5%7%,CO,2,和高湿度,最适生长温度为3537，低于30不生长,血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、,透明或半透明、直径12,mm,的不溶血、圆形、灰兰色菌落,卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落,在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜,脑膜炎奈瑟菌于孵育24,h,后在培养基上发生自溶,3生化特性,氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）,对糖分解能力、硝酸盐还原能力和,DNA,合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据,奈瑟菌属,DNA,中,G+Cmol,%,为4654,4抵抗力,对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感,对青霉素敏感,但近年来由质粒介导的,内酰胺酶所致的耐,药在淋病奈瑟菌中产生较多,四、微生物检验,脑膜炎奈瑟菌,标本采集,无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本,采集后立即送往实验室,用血平板进行床边接种后置35孵育,血液标本接种在血液培养瓶中置35孵育,标本运送时需要35保温,标本直接检查,直接涂片检查,脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片,皮肤瘀点渗出液涂片,革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断,抗原检查,通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验,包括,A、C、Y、W125,血清型的多价抗体和血清型,B,抗体,检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断,分离培养鉴定,脑脊液标本,接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板,咽拭子或鼻咽拭子,接种在选择性培养基上如改良的,Thayer-,Martin(MTM)、GC-Lect、New,York City(NCY),等培养基,血液标本,经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上,置5%7%,CO,2,35,孵育，每隔24,h,观察平板,鉴定,初步确定为奈瑟菌属,直径12,mm，,灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落,涂片革兰染色见阴性双球菌,氧化酶试验阳性,进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖,类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌,用分型血清确定血清型别,平板上没有发现菌落需继续观察72,h,后无菌生长可报,告为阴性,（二）淋病奈瑟菌,1检验程序,2标本采集,阴道和宫颈分泌物,用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1,cm,处,停留1015秒时间，蘸取,采集尿道分泌物,弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本,尿液,直肠肛拭标本,废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物,新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物,3标本直接检查,标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查,男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多,革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断,女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革,兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄,居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告,新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎,4分离培养与鉴定,选择培养基如,MTM，Martin-Lewis（ML），,或,NYC,置于5%,CO,2,气体条件下3537孵育,每隔24,h,观察平板,（1）形态和生化学鉴定,可疑菌落,直径0.51,mm，,灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落,确认,将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌,氧化酶和触酶试验阳性,葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性,培养需观察72,h,后无菌生长可报告为阴性。,（2）免疫学鉴定,直接荧光染色,凝集试验或免疫渗滤技术,（3）分子生物学鉴定,检测靶片段的基因,隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌,胞嘧啶,DNA,甲基转移酶基因、透明蛋白(,opa,),基,因、菌毛,DNA,探针、,rRNA,基因探针和,por,A,假,基因。,基因探针杂交、核酸扩增,第二节 卡他莫拉菌,卡他莫拉菌（,M.catarrhalis,）,又称为卡他布兰汉菌（,Branhamaceae,catarrhalis,）,可存在于健康人群的上呼吸道,近十年来报道,导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎,在免疫抑制和,ICU,的患者可导致菌血症,是社区呼吸道感染的主要病原体之一。,临床分离,从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本,呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液,口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本,痰液标本直接涂片革兰染色,如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.51.5,m,革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染,卡他莫拉菌培养及鉴定,在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好,35 24,h,孵育后菌落直径13,mm，,灰白色、光滑，用接,种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动,氧化酶和触酶阳性,不发酵葡萄糖和其它糖类产酸,大多数菌株还原硝酸盐和产生,DNase,。,三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别,可产生诱导型,内酰胺酶,奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定,