,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一章 食品检测的基本知识,第七章 食品常见有害有毒物质的检测,第七章 食品常见有害有毒物质的检测,1,内容简介,本章讲述了食品食品中常见有害有毒物质如有机氯农药、有机磷农药、黄曲霉毒素等的测定方法以及各种测定方法的注意事项。,第七章 食品常见有害有毒物质的检测,内容简介第七章 食品常见有害有毒物质的检测,2,学习目的与要求：,1,、掌握,食品常见有害有毒物质如有机氯农药、有机磷,苯农药残留及黄曲霉毒素,等的测定操作方法,2,、熟练使用气相色谱和液相色谱仪,第七章 食品常见有害有毒物质的检测,学习目的与要求：第七章 食品常见有害有毒物质的检测,3,重点,：,有机氯农药、有机磷,苯农药残留及黄曲霉毒素,等的测定操作方法、,气相色谱和液相色谱仪的使用,难点,：,气相色谱和液相色谱仪的使用,第七章 食品常见有害有毒物质的检测,重点：有机氯农药、有机磷苯农药残留及黄曲霉毒素等的测定操作方,4,第一节 有机氯农药残留的测定,第二节 有机磷农药残留的测定,第三节 黄曲霉毒素的测定,本章目录,第七章 食品常见有害有毒物质的检测,第一节 有机氯农药残留的测定第二节 有机磷农药残留的,5,一、定性检验,1,、焰色法,2,、亚铁氨化银试纸法,二、定量检验,采用气相色谱法,第一节 有机氯农药残留的测定,一、定性检验第一节 有机氯农药残留的测定,6,二、定量检验,1,、农药提取,2,、净化,3,、测定,（,1,）气相色谱参考条件,色谱柱：内径,3,4mm,，长,1.2,2m,的玻璃柱，内装涂以,OV-7,（,15g/L,）和,QF-1,（,20g/L,）的混合固定液的,80,100,目硅藻土。,第一节 有机氯农药残留的测定,二、定量检验第一节 有机氯农药残留的测定,7,（,2,）电子捕获检测器,汽化室温度：,215,；色谱柱温度：,195,；检测器温度：,225,；载气,（,氮气,）,流速：,90ml/min,；,（,3,）色谱图,（,4,）计算,第一节 有机氯农药残留的测定,（2）电子捕获检测器第一节 有机氯农药残留的测定,8,一、定性检验,1,、刚果红法,2,、纸上斑点法,二、定量检测,采用气相色谱检测法,第二节 有机磷农药残留的测定,一、定性检验第二节 有机磷农药残留的测定,9,二、定量检测,1,、标准溶液的配制,2,、试样制备,3,、有机磷农药提取,4,、有机磷农药净化,5,、测定,第二节 有机磷农药残留的测定,二、定量检测第二节 有机磷农药残留的测定,10,5,、测定,（,1,）气相色谱条件；,色谱柱：,玻璃柱,2.6m3mm,（,id,），填装涂有,4.5,DC200,2.5,OV,17,的,ChromosorbWAW DMCS,（,80,100,目）的担体。,玻璃柱,2.6m3mm,（,id,），填装涂有,1.5,（质量分数）,DCOE,1,的,Chromosorb WAW DMCS,（,60,80,目）,气体速度：氮气（,N,2,）,50mL,min,、氢气（,H,2,）,100ml/min,、空气,50mL,min,。,温度：柱温,240,、汽化室,260,、检测器,270,第二节 有机磷农药残留的测定,5、测定第二节 有机磷农药残留的测定,11,（,2,）测定。吸取,2,5L,混合标准液及样品净化液，注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与标准比较定量。,6,、结果计算,第二节 有机磷农药残留的测定,（2）测定。吸取25L混合标准液及样品净化液，注入色谱仪,12,7,、,16,种有机磷农药的色谱图,第二节 有机磷农药残留的测定,7、16种有机磷农药的色谱图 第二节 有机磷农药残留的测定,13,黄曲霉毒素，是一组化学结构类似的化合物。,已分离鉴定出,12,种，包括,B1,、,B2,、,G1,、,G2,、,M1,、,M2,、,P1,、,Q,、,H1,、,GM,、,B2a,和毒醇。,第三节 黄曲霉毒素的测定,黄曲霉毒素,B1,黄曲霉毒素,B2,黄曲霉毒素,B3,黄曲霉毒素,B4,黄曲霉毒素,B5,黄曲霉毒素,B6,黄曲霉毒素，是一组化学结构类似的化合物。第三节 黄曲霉毒素的,14,表,1,中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量,第三节 黄曲霉毒素的测定,食 物 名 称,最高允许含量,/(ug/kg),玉米、花生、花生油、坚果和干果,(,核桃、杏仁,),20(,黄曲霉毒素,B,1,),玉米、花生仁制品,(,按原料折算,),20(,黄曲霉毒素,B,1,),大米、其他食用油,(,香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油,),10(,黄曲霉毒素,B,1,),其他粮食,(,麦类、面粉、薯干,),、发酵食品,(,酱油、食用醋、豆豉、腐乳制品,),、淀粉类制品,(,糕点、饼干、面包、裱花蛋糕,),5,黄曲霉毒素,B,1,),牛乳及其制品,(,消毒牛奶、新鲜生牛乳、全脂牛奶粉、淡炼乳、甜炼乳、奶油,),、黄油、新鲜猪组织,(,肝、肾、血、瘦肉,),0.5(,黄曲霉毒素,M,1,),表1 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量 第三节 黄,15,一、薄层层析法,1,、仪器,小型粉碎机、样筛、电动振荡器、玻璃浓缩器、玻璃板,5cm20cm,、薄层板涂布器、展开槽,(25cm6cm4cm),、紫外光灯,100125W,、波长,365nm,滤光片、微量注射器。,2,、测定方法,(,一,),样品处理,(,二,),黄曲霉毒素提取,第三节 黄曲霉毒素的测定,一、薄层层析法 第三节 黄曲霉毒素的测定,16,(,三,),测定,1,单向展开法,(1),薄板制备：称取,3g,硅胶,G,，加,2,3,倍量的水，研磨,1,2min,呈糊状后，倒入涂布器推成,5cm20cm,，厚度约,0.25mm,的薄层板,3,块。在空气中干燥,15min,，在,100,活化,2h,，取出，放干燥器中保存。一般可保存,2,3d,，若放置时间较长，可再活化后使。,第三节 黄曲霉毒素的测定,(三)测定 第三节 黄曲霉毒素的测定,17,(2),点样,在距薄层板下端,3cm,的基线上用微量注射器或血红素吸管滴加样液。,第一点：,10l AFTB,标准使用液,(0.04g,ml),。第二点：,20l,样液。,第三节：,20l,样液,+10L0.04g,ml AFTB1,标准使用液。,第四点：,20l,样液,+10L0.02g,ml AFTB1,标准使用液。,第三节 黄曲霉毒素的测定,(2)点样第三节 黄曲霉毒素的测定,18,(3),展开与观察,在展开槽内加,10mL,无水乙醚，预展,12cm,，取出挥干。再于另一展开槽内加,10mL,丙酮,三氯甲烷,(8+92),，展开,10,12cm,，取出，在紫外光下观察结果,.,方法如下：,a,由于样液上加滴了,AFTB1,标准，可使,AFTB1,标准点与样液中,AFTB1,，荧光点重叠。若样液为阴性，薄板上第三点,AFTB1,为,0.0004g,，可用作检查样液中,AFTB1,最低检出量是否正常出现；若样液为阳性；则起定性作用。薄层板上第四点,AFTB1,标准为,0.002g,，主要起定位作用。,第三节 黄曲霉毒素的测定,(3)展开与观察第三节 黄曲霉毒素的测定,19,b,若第二点与,AFTB1,标准点的相应位置上无蓝色荧光点，则表示样品中,AFTB1,含量,5g,kg,；若在相应位置上有蓝色荧光点，则需进行确证试验。,(4),确证试验：为确认薄层样上样液荧光系由黄曲霉毒素,B1,产生的，加滴三氟乙酸，产生,AFTB1,的衍生物，展开后此衍生物的比移值约在,0.1,左右。于薄层板左边依次滴加两个点。,第一点：,10L 0.04g,mL AFTB1,标准使用液。,第二点：,20L,样液,第三节 黄曲霉毒素的测定,b若第二点与AFTB1标准点的相应位置上无蓝色荧光点，则表,20,于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上，反应,5min,后，用吹风机吹热风,2min(,板上温度不高于,40),，再于薄层板上滴加以下两点。,第三点：,10L 0.04g,mL AFTB1,标准使用液。,第四点：,20L,样液。,按上法展开并观察，样液是否产生与,AFTB1,标准点相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四两点，可依次作为标准与标准的衍生物空白对照。,第三节 黄曲霉毒素的测定,于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上，反应5min后，,21,（,5,）稀释定量：样液中的,AFTB1,荧光点的荧光强度，如与,AFTB1,标准点最低检出量（,0.0004g,）的荧光强度一致，则样品中,AFTB1,含量为即为,5g,kg,。,若样液中荧光强度比最低检出量强，则根据强度估计，减少滴加微升数，或将样液稀释后再滴加不同微升数，直至样液的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。滴加式样如下：,第一点：,10LAFTB1,标准使用液（,0.04g,mL,）。,第二点；根据情况滴加,10L,样液。,第三点：根据情况滴加,15L,样液。,第四点：根据情况滴加,20L,样液。,第三节 黄曲霉毒素的测定,（5）稀释定量：样液中的AFTB1荧光点的荧光强度，如与AF,22,（,6,）结果计算,第三节 黄曲霉毒素的测定,式中,X,样品中,AFTB1,的含量，,y/kg,；,V,1,加入苯一乙睛混合液的体积，,mL,；,V,2,出现最低荧光时滴加样液的体积，,mL,；,D,样液的总稀释倍数；,m,1,加入苯一乙腈混合液溶解时相当样品的质量，,g,；,0.0004AFTB1,的最低检出限量，,g,。,（6）结果计算 第三节 黄曲霉毒素的测定式中 X样品中,23,2,双向展开法,(1),点样：取薄层板三块，在距下端,3cm,基线上，在距左边缘,0.8,lcm,处，各滴加,10LAFTB1(0.04g,mL),标准液，在距左边缘,2.8,3cm,处，各滴加,20L,样液。然后在第二块板的样液点上加滴,10L AFTB1(0.04g,mL),标准液，在第三块板的样液点上加滴,10L AFTB1(0.02g,mL),标准液。,第三节 黄曲霉毒素的测定,2双向展开法 第三节 黄曲霉毒素的测定,24,(2),展开,a,横向展开：在展开槽内的长边置一玻璃支架，加,10mL,无水乙醇，将上述点好的薄层板靠标准点的长边，置于展开槽内展酗，展至板端后，取出挥干。根据情况，需要时，可再重复,1,2,次。,b,纵向展开：挥干的薄层板以丙酮,三氯甲烷,(8:92),展开至,10,l2cm,为止。丙酮与氯甲烷的比例，根据不同条件自行调节。,第三节 黄曲霉毒素的测定,(2)展开第三节 黄曲霉毒素的测定,25,(3),观察与评定结果,:,a,在紫外光下观察第一、二块板，若第二块板在,AFTB1,标准点的相应处出现最低检出量，而在第一板与第二板的相同位置上未出现荧光，则样品中,AFTB1,含量,5g,kg,。,b,若第一块板与第二块板的相同位置上出现荧光点，则将第一块板与第三块板比较，着第三块板上第二点与第一块板上第二点的相同位置上的荧光点是否与,AFTB1,标准点重叠，如果重叠，再进行确证试验。在具体测定中，三块板可以同时做，也可按顺序做。当第一块板出现阴性时，第三块板可以省略，如第一块板为阳性,则第二块板可省略，直接做第三块。,第三节 黄曲霉毒素的测定,(3)观察与评定结果:第三节 黄曲霉毒素的测定,26,(4),确认试验：另取薄层板二块，于第四、五两板距左边缘,0.8,1cm,处，各滴加,10LAFTB1(0.04g,mL),标准液及,1,小滴三氟乙酸；在距左边缘,2.8,3cm,处，于第四板滴加,20L,样液及,1,小滴三氟乙酸；于第五板滴加,20L,样液、,10LAFTB1,标准液及,1,小滴三氟乙酸，反应,5min,后，用热风吹,2min,（板上温度不高于,40,）。,再用双向展开法展开后，观察样液是否产生与,AFTB1,标准点重叠的衍生物。观察时，可将第一板作为样液的衍生物空白板。若样液,AFTB1,含量较高时，则将样