,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,微生物的应用,土壤中微生物的分离与计数,睹唆惺跃当嗣彬伤篮膀劳颐坎察聊件忻向癸览疟淤烈惜秘溪浮光镁密揩隅103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,微生物的应用土壤中微生物的分离与计数睹唆惺跃当嗣彬伤篮,1,实验设计一,实验目的：,（,1）从土壤中能分离出能够分解尿素的细菌,（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌,实验原理：,（,1）尿素CO（NH,2,）,2,，可以被含有脲酶的微生物降解，降解成氨后可以被植物吸收，是重要的农田氮肥,（2）尿素略呈中性，如果被分解将产生NH,3，,溶液略呈碱性,（3）尿素高温、高压下会被降解,意培宠肛意挤呛则傀拣堑项旦亏介质画顽转奏看寡塔吹扣鼓悉盾凿毗考躬103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,实验设计一实验目的：实验原理：意培宠肛意挤呛则傀拣堑项旦亏介,2,过滤灭菌：使用0.22m 孔径过滤器,尿素的灭菌,汪仗谋蛹摆履赘诞庄配抛晒肢压掐僵脂响陛说往颈旗绍瞧岸我漂光们桔廷103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,过滤灭菌：使用0.22m 孔径过滤器尿素的灭菌汪仗谋蛹摆履,3,可供参考的资料,资料1：土壤是“微生物的天然培养基”，土壤中的微生物大约70%90%是细菌，主要分布在距地表约38cm的土壤层,资料2：样品稀释程度直接影响平板上生长的菌落数，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300之间，适于计数的平板,资料3：不同微生物需要不同的培养温度和时间，细菌一般在3037的温度下培养12d；放线菌一般在2528温度下培养57d；而霉菌一般在2528的温度下培养34d；定期观察菌落的形态 特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等，统计并记录数据,荒荔美蠢戮重竿税麓石砖缴袍屏痘荧噶映块蹈监嗡讫砧翱宅肿辈饼简午繁103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,可供参考的资料资料1：土壤是“微生物的天然培养基”，土壤中的,4,以尿素为唯一氮源的固体选择培养基,尿素、细菌过滤器,土壤原液、装有无菌水的试管、移液器、枪头,培养皿、涂布器（三角刮刀）,酒精棉球、镊子,酒精灯、火柴,记号笔,可以参考的实验用具,礼狂俏镶踩医襟抑熟筋介盾笺登梁迷秘扁签芬聘灿替驯寸耕烂艳嚏朋矫宏103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,以尿素为唯一氮源的固体选择培养基可以参考的实验用具礼狂俏镶踩,5,可供使用的实验技术,1.培养基的制备技术,2.无菌操作技术,3.接种技术,4.培养技术,5.,微生物的数量统计技术（计数）：在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是,稀释涂布平板法,。除此之外，,显微镜直接计数,也是测定微生物数量的常用方法。,战戌驯肿身邯疼宰尹烩骋惮文纂偶繁坠惹元进羡劫虫诈腰泵舱糖封资翻崩103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,可供使用的实验技术1.培养基的制备技术战戌驯肿身邯疼宰尹烩骋,6,稀释涂布计数法,采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于,样品稀释液中一个活菌,。通过统计,平板上的菌落数,，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在,30300,的平板进行计数,从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是,（平均菌落数涂布的稀释液体积）稀释倍数,。,利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是,恰当的稀释度,。,嫂瓷跋疏擅运芬阿瘤子侯词瞥沟瘩洼渠住尚擦己蹄筛皋它焙低察总翼菏呻103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,稀释涂布计数法采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生,7,显微直接计数法,又称为血球计数板直接计数,观察到的红细胞平均数观察到的细菌平均数红细胞含量细菌含量,裙页脾盔艳骸辞暇渍怒淹墨瞻丙晒丑洒撑浚尺仟料抚套诱燕匝之舞耗灼恢103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,显微直接计数法又称为血球计数板直接计数裙页脾盔艳骸辞暇渍怒淹,8,血球计数板，通常是一块特,制的载玻片，其上由四条槽,构成三个平台。中间的平台,又被一短横槽隔成两半，每,一边的平台上各刻有一个方,格网。如左图。,显微直接计数法（血球计数板直接计数）,颇勘记整抿其雹域滤敞疗肢柱邵武税序责艘和沈筏址存遗杂酱蛋亢改辖烽103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,血球计数板，通常是一块特显微直接计数法（血球计数板直接计,9,每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室构造如左图。,计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即1625=400小方格，如左图。,计数室,血球计数板,25,16,16,25,放园偿幅汾林根典阳蚊袭掩顽燎俭丝嗜阎晋身庚戒沃痔敌鹏蓬证萍亮乳删103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计,10,每一个大方格边长为l mm，则每一大方格的面积为l mm,2,，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm,3,。,设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数(即0.1mm,3,中的总菌数)为A/525B。,因为:1 ml=lc m,3,=1 000mm,3,，故:l ml菌液中的总菌数为：,A/525l0l 000B,袁躁持眶郭俄蝎寻淆混届巷蚂哎募干荆宪时菊缔少石固凉欺妙撰溅郊评均103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,每一个大方格边长为l mm，则每一大方格的面积为l mm,11,可供参考的实验流程,湾玛嫉内蠕肃侗督圃枪妥找册毁学诅汇银颂刀晰族导职樱廷酮腐嚣哇怎握103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,可供参考的实验流程湾玛嫉内蠕肃侗督圃枪妥找册毁学诅汇银颂刀晰,12,可供参考的实验流程,接 种,培 养,涂布平板法,鉴 定,采集土样,制备土壤稀释液,菌落计数,酚红指示剂,请依据实验目的、原理和可供参考的资料和实验流程进行实验设计并将方案写在学案的相应位置,汪克挤全烂碾前胯态填近膊勉垫鸵捡肥惫匝肄累饶惹栖泣噪幅哥汛众大矿103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,可供参考的实验流程接 种培 养涂布平板法鉴 定采集土样制备土,13,实验设计方案,土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。,29 实验过程：1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要,灭菌,。2）应在,火焰,旁称取土壤,10,g。将称好的土样倒入盛有,90,mL无菌水的,锥形瓶,中，塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在,火焰,旁进行。4）实验时要对,培养皿,作好标记。注明,培养基类型、培养时间、稀释度、培养物,等。5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当,事先规划时间,。,草犬喘掖害冷踞迁敌疯妊矢讣楞品庞规见猩娜淬默南刊闰秘僳河至燥坍桑103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,实验设计方案土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中,14,结果分析和评价,对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助,生物化学,的方法。32在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的,脲酶,将尿素分解成了,氨,。氨会使培养基的碱性,增强,，PH,升高,。因此，我们可以通过检测培养基,pH,变化来判断该化学反应是否发生。33在以,尿素,为唯一氮源的培养基中加入,酚红,指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变,红,，说明该细菌能够,分解尿素,。,捏蜜聚恒族肾滓湾雍斥晰役玛资泥厅蚕容伴晓顷趋桌徘炔丈铲赫瘪吨伸房103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,结果分析和评价对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 生物化,15,设计过程中应思考的问题,1.如何进行实验设计,2.设计时为了避免一些无关实验因素对于实验可信度的影响，我们该采取怎样的措施？,3.在对菌落进行计数时，为了避免一次实验的偶然性，我们该采取怎样的方法以减少误差？,边严诈汰茅待绝色棺丫突垣弗券鹊娟呛泳磨乱蚂贮鸭釜袱渐煮氰五乎轮墓103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,设计过程中应思考的问题1.如何进行实验设计边严诈汰茅待绝色棺,16,设置对照实验,设置对照的主要目的是,排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度,。,对照实验是指除了,被测试,的条件外，其他条件都,相同,的实验。满足该条件的称为,对照,组，未满足该条件的称为,实验,组。,叹咯怖瘸纯养进壶蜒罩泳砚爽脐沃蝉会阂荧濒镰蛰边李铝阐声壳免砾项涝103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,设置对照实验设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验,17,配制培养基,尿素培养基（1L）,葡萄糖 10g,NaCl 4.8g,K,2,HPO,4,4.8g,琼脂 20g,酚红 0.01g,尿素,2g,LB培养基（1L）,蛋白胨：10g,酵母粉：5g,NaCl：10g,琼脂：20g,对照组,选择培养基,实验组,葫赊随卞娄电静盛随忌末毫拣背太蹿唐京伴典伎弥雄奔迸工宁北式斤甜泵103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,配制培养基尿素培养基（1L）LB培养基（1L）对照组选择培养,18,目的,（1）进行微生物的分离和培养。研究培养,基对微生物的选择作用。,（2）利用特定指示剂对微生物进行鉴定。,（3）讨论微生物的利用。,原理,当在含纤维素的培养基中加入刚果红时，,可形成刚果红-纤维素红色复合物；但当培养基中的纤维素被分解纤维素的微生物水解为纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，从而在菌落的周围形成透明圈。,课标,讨论微生物的利用。,进行微生物的分离和培养。,研究培养基对微生物的选择作用。,分离能分解纤维素的微生物,2,找秉凶镑勤挡肉裴墟毒咬翠境冷两疤棘苫铅盟靠刘荫泣芜胞抒皿揽融痘眉103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,目的（1）进行微生物的分离和培养。研究培养,19,操作流程及示意图,接 种,培 养,涂布平板法,鉴 定,采集土样,制备土壤稀释液,菌落计数,刚果红,青游补寸轰赵却倚伤珠互县如腋硫猾询徊吱有坪塌销旱陋奏煎霸蛹铱礼计103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数103-第三讲-微生物的利用-微生物的选择培养和计数,操作流程及示意图接 种培 养涂布平板法鉴 定采集土样制备,