单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,直抗阳性和免疫溶贫,直抗阳性和免疫溶贫,第1页,抗球,蛋白,试验,-,检测,IgG,经过抗人球蛋白抗体特异性桥连作用，促进红细胞凝集。可分为直接和间接抗球蛋白试验。,直抗阳性和免疫溶贫,第2页,直接抗球蛋白试验,检验受检者红细胞在机体内是否被抗体致敏,产生直抗阳性条件,本身免疫溶血性贫血,溶血性输血反应,新生儿溶血病,直抗阳性和免疫溶贫,第3页,间接抗球蛋白试验,证实红细胞在体外被抗体结合试验,是检验血清中,IgG,抗体特异性,或红细胞抗原主要伎俩,可用于,未知抗体检出与确认,交叉配合试验,确认抗原,直抗阳性和免疫溶贫,第4页,间接抗球蛋白试验,步骤1：致敏,步骤2：洗涤,步骤3：加入抗人球蛋白试剂（,AHG）,直抗阳性和免疫溶贫,第5页,增强介质,能够增强反应性和降低孵育时间,LISS,电解质增加溶液介电常数，减弱了抗原抗体静电作用。降低离子强度能够显著增加抗原抗体结合率,P,olybrene,碱性高分子物质，有效中和红细胞表面负电荷，降低,zeta,电位，缩短红细胞之间距离,P,eG,极强亲水性，降低红细胞与抗体周围水分,22,Bovine albumin,Enzymes,直抗阳性和免疫溶贫,第6页,增强介质,柱凝集（,Column agglutination,）,固相技术（,Solid-phase technology,）,复合方法,Red blood cells panel,Plasma or serum,Screen Diluent,NanoLys,Anti-Human Globulin(AHG),直抗阳性和免疫溶贫,第7页,2.,Incubation 20 at 37C,3.,Shake and Magnetize in the same time,12 l of serum or plasma,ScreenLys,H1,H2,H3,NanoLys,60 l of NanoLys,15 l of Hemascreen1,2,3,ScreenDiluent,60 l of Screen Diluent,抗体筛选方法,1.,Dispensing,直抗阳性和免疫溶贫,第8页,MAGNET,抗体筛选方法,MAGNET,MAGNET,MAGNET,直抗阳性和免疫溶贫,第9页,DAT,阳性血液标本搜集,EDTA,抗凝血,提供红细胞,DAT,测定，定型，洗脱，本身吸收,不抗凝血,提供血清,抗体筛选，抗体判定,直抗阳性和免疫溶贫,第10页,DAT,阳性血清学研究,多特异性抗球蛋白，抗,IgG,，抗,C3,测定附着在红细胞上免疫球蛋白类型,血清抗体筛选与判定,本身抗体，同种抗体,本身同种抗体,放散试验,确认附着抗体特异性,直抗（,IgG,）阳性，而血清与洗脱液皆无反应,需深入研究：,药品处理细胞，,A,和,B,细胞，酶处理细胞,直抗阳性和免疫溶贫,第11页,红细胞判定,定型,ABO/Rh,，磷酸氯奎放散，搜集网织红细胞,DAT,IgG,，,C3,放散,阴性：,A,和,B,细胞，酶处理，药品处理细胞,阳性：同种抗体，本身抗体，同种本身,本身吸收,直抗阳性和免疫溶贫,第12页,血清抗体判定,阳性,本身抗体 温抗体，冷抗体,同种抗体 特异性判定,本身吸收判定同种抗体,阴性,IgG,抗,A,，抗,B,抗体,酶处理细胞,药品依赖抗体,直抗阳性和免疫溶贫,第13页,抗体放散方法,方法,用途,关键点,Lui freeze-thaw,ABO HDFN,快速；红细胞用量少；其它抗体难放散,Heat(56,0,C,),ABO HDFN,；,IgM,凝集抗体,轻易；IgG同种和本身抗体难放散,酸放散试剂盒,温本身和同种抗体,轻易；当高效价抗体存在时放散液有假阳性,洋地黄皂苷酸,温本身和同种抗体,洗涤消耗时间,乙醚放散,温本身和同种抗体,直抗阳性和免疫溶贫,第14页,红细胞疾病,红细胞增多,红细胞降低,红细胞生成降低,红细胞破坏过多（溶血性贫血）,红细胞丢失过多,直抗阳性和免疫溶贫,第15页,溶血性贫血,红细胞内在缺点,遗传性红细胞增多症,红细胞酶缺乏贫血,珠蛋白生成障碍性贫血,异常血红蛋白病,阵发性睡眠性血红蛋白尿症,红细胞外来原因,免疫溶血性贫血,机械性溶血性贫血,其它原因引发溶血性贫血,直抗阳性和免疫溶贫,第16页,免疫溶血性贫血分类,本身免疫溶血性贫血,（,AIHA,）,Warm AIHA (WAIHA),Cold Agglutinin Syndrone (CAS),Mixed-type AIHA,Paroxysmal Cold Hemoglobinura (PCH),DAT-negative AIHA,同种免疫溶血性贫血,Hemolytic Transfusion Reaction,Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn(HDFN),药品诱发免疫溶血性贫血,Drug-dependent,Drug-independent,直抗阳性和免疫溶贫,第17页,本身免疫溶血性贫血血清学特征,WAIHA,CAS,Mixed-type AIHA,PCH,DAT,IgG,IgG+C3,C3,C3 only,IgG+C3,C3,C3 only,免疫抗体类型,IgG,IgM,IgG,IgM,IgG,放散液,IgG,抗体,没有反应,IgG,抗体,没有反应,血清,IAT,；在,20 C,，,35%,未凝集,IgM,凝集抗体，,4 C,效价,1000(60%),IgG IAT-,反应抗体和,IgM,凝集抗体,在,DLT,试验中,IgG,双相溶血,特异性,广范围反应；各种特异性报道,通常为抗,I,通常未知,抗,P,直抗阳性和免疫溶贫,第18页,温抗体型本身免疫溶血性贫血,(WAIHA),发病率,1/80000,，女性比男性高，年纪多数,40,病因分类,网状内皮细胞肿瘤 慢性淋巴瘤,;,霍奇金病,;,非霍奇金淋巴瘤病,胶原病 系统性红斑狼疮,;,类风湿性关节炎等,免疫性疾病 免疫缺点综合症,;,低球蛋白血症等,胃肠道疾病,一些良性肿瘤,直抗阳性和免疫溶贫,第19页,WAIHA,发病机制,免疫调整紊乱,免疫器官对本身红细胞失去识别能力,红细胞膜损伤，改变膜抗原性,直抗阳性和免疫溶贫,第20页,WAIHA,诊疗标准,临床表现,起病慢，数月后才发觉贫血，表现为全身虚弱及头昏。,各有,1/3,患者皮肤粘膜苍白及黄胆，半数以上有脾肿大。,试验室检验,1.,贫血：程度不一，可暴发急性溶血现象。外周血涂片上可见,多量球形细胞及数量不等幼红细胞，；,2.,骨髓涂片：呈幼红细胞增生象；,3.,再生危象：网织红细胞极度降低，骨髓象呈细胞再生障碍，,血象呈全细胞降低；,4.DAT,试验阳性，为抗,IgG,和抗,C3,型。,直抗阳性和免疫溶贫,第21页,WAIHA,诊疗依据,直抗阳性,患者近,4,个月无输血或特殊药品服用史，结合临床表现和试验室检验，可诊疗为,温抗体型本身免疫溶血性贫血。,直抗阴性,但临床表现较符合本病症状，肾上腺皮质激素或切脾术有效，其它溶血性贫血除外，可诊疗为抗球蛋白蛋白试验阴性温抗体型本身免疫溶血性贫血。,直抗阳性和免疫溶贫,第22页,WAIHA,疗效标准,缓解,患者临床症状消失,个别缓解,患者临床症状基础消失。血红蛋白量在,80g/L,以上，网织红细胞数在,5,以下，血清总胆红素测定,1000,；,4.,DAT,试验阳性，为,C3,型,直抗阳性和免疫溶贫,第28页,PCH,发病机制,以全身或局部受严寒刺激后突然发生大量血管内溶血和血红蛋白尿为特征，罕见,原发性发病者极为罕见,继发性主要由梅毒尤其是先天性梅毒及晚期梅毒静止期所引发，现在此病大多出现于一些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、传染性单核细胞增多症等传染病之后，以儿童居多,直抗阳性和免疫溶贫,第29页,PCH,诊疗标准,临床表现,患者多数受寒后即有急性发作，表现为寒战、发,热（体温可高达,40,0,C,），全身无力及腰背痛，随即即,有血红蛋白尿，多数连续几小时，偶有几天,试验室检验,1.,发作时贫血严重，进展快速，外周血有红细胞大,小不一及畸形，并有球形红细胞、红细胞碎片、,嗜碱性点彩细胞及幼红细胞；,2.,重复发作者有含铁血黄素尿；,3.,DL,试验阳性；,4.,DAT,试验阳性，为,C3,型,直抗阳性和免疫溶贫,第30页,DL,冷溶血试验,Donath-Landsteiner test,DL,冷溶血素,IgG,冷反应性抗体，能结合于几乎全部正常人红细胞都有,P,血型抗原，是一个冷温双相温度冷溶血素，含有强烈溶血作用。体外最适反应温度,0,0,C-4,0,C,，,15,0,C,以下补体不能按序最终激活，故不发生补体溶血，回升,37,0,C,时抗体与细胞解离，但补体却依次激活，造成溶血。,先置于冰水中约,30,分钟，再置于,37,0,C,水浴中,2,小时，溶血，,DL,抗体存在。,直抗阳性和免疫溶贫,第31页,冷本身免疫溶血性贫血输血,慢性冷凝集素病极少需要输血，不过发生大量溶血时，病人温度约,40,0,C,环境。当,红细胞输入开始,10,分钟红细胞快速在病人血液中破坏，然后破坏速度变慢,阵发性严寒性血红蛋白尿患者极少需要输血，因抗体反应温度常只到,20,0,C,，所以极少引发溶血，当抗体反应温度如上升到,30,0,C,即可引发溶血。输,P,阴性血，但有些人成功输予没洗涤，没加温，,P,阳性细胞,直抗阳性和免疫溶贫,第32页,本身吸收区分本身和同种抗体,患者血清：本身抗体,+,同种抗,K,洗涤患者细胞，,56,0,C,水浴中孵育,5,分钟，洗脱个别本身抗体,酶处理洗脱红细胞，可增大吸附抗体能力,37,0,C,吸附患者血清，移去本身抗体，只留下同种抗体,直抗阳性和免疫溶贫,第33页,直抗阳性和免疫溶贫,第34页,Blood-Matching Goes Genetic,Hoping to prevent adverse transfusion reactions and save lives,European researchers are lobbying to replace serology-based blood typing with matchingbased on DNA tests,14 MARCH VOL 319 SCIENCE,www.sciencemag.org,直抗阳性和免疫溶贫,第35页,配血步入基因时代,为了预防输血不良反应和挽救生命，欧州学者们正在呼吁用,DNA,检测替换血清学方法来判定血型,14 MARCH VOL 319 SCIENCE,www.sciencemag.org,直抗阳性和免疫溶贫,第36页,Blood-Matching Goes Genetic,Two decades ago,a 20-year-old man entered Duke University hospital for a hip replacement.He had sickle cell disease and because he was anemic,he needed a blood transfusion before the operation.As with most sickle cell patients,he had received transfusions before.But on this occas