单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,GB 4789.7-2013,副溶血性弧菌检验,1,GB 4789.7-2013副溶血性弧菌检验 1,一、概述,二、生物学特性,三、检测方法,2,一、概述2,副溶血性弧菌,Vibrio parahaemolyticus,于,1950,年从日本一次暴发性食物中毒中发现。,该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。在,37,、,pH7.7,、,3,4%NaCl,环境中生长最好。,一、概 述,3,副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus于,概 述,本菌嗜盐畏酸怕冷,在无盐环境不能生长,,3%,6%,盐水繁殖迅速,低于,0.5%,或高于,10%,盐水中停止生长。对酸敏感,在,2%,醋酸或,50%,食醋中,1 min,即死亡。不耐热,,56,5 min,可杀死,,90,1 min,灭活。对高盐浓度抵抗力甚强。,5,以下容易死亡,。,4,概 述本菌嗜盐畏酸怕冷,在无盐环境不能生长,3%6%盐水,分类,:属弧菌科,(Vibrio),,弧菌属。,分布,:主要存在于近海岸的海水、海底沉积物和鱼类、虾类、贝类、牡蛎等海产品中。,人多因食用被本菌污染而又未煮熟的海产品和其他食品而引起中毒。,5,分类:属弧菌科(Vibrio),弧菌属。5,流行病学,季节分布:,8-9,月为高峰期,中毒食品:主要为海产品、其次为水产制品、淹制品、咸菜及污染食品,地区分布:沿海地区居多,临床症状:主要有腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热,潜伏期:,10,小时左右,6,流行病学季节分布:8-9月为高峰期 6,致病作用,主要引起,胃肠炎,,最常见的是食物中毒和感染性腹泻。由于病菌在食品中大量繁殖,侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素,引起剧烈的胃肠炎。,7,致病作用主要引起胃肠炎,最常见的是食物中毒和感染性腹泻。由于,二、生物学特性,-,菌体形态及染色特征,革兰氏,阴性杆菌,,无芽孢,0.30.726,m,两端浓染,呈多形态(棒状、弧状、球状、卵圆形等)排列不规则,液体培养基生长单鞭毛,固体培养基常有周生鞭毛(侧毛),8,二、生物学特性 -菌体形态及染色,二、,生物学特性,-,培养特性,需氧兼性厌氧,在含,NaCl 3-4%,的培养基中生长良好,无盐和,NaCl 10%,的培养基中均,不生长,最适培养温度为:,30-37,最适,pH,范围:,pH7.4-pH8.2,9,二、生物学特性 -培养特性需氧兼性厌氧,在固体培养基上,菌落通常隆起,圆形半透明,表面光滑、湿润、一般不产生色素。,在血平板和嗜盐性平板上,菌落生长良好。,肉汤、琼脂、生化管都应含有,3-4%,的,NaCl,含量。,10,在固体培养基上,菌落通常隆起,圆形半透明,表面光滑、湿润、一,神奈川现象,(Kanagawa phenomenon,,,KP),-,在特定条件下,某些菌株在含高盐,(7,),的人,O,型血球或兔血球及以,D,甘露醇作为碳源的,我妻琼脂平板,上产生,溶血的现象,神奈川现象与本菌的,致病性密切相关,11,神奈川现象(Kanagawa phenomenon,KP),血清分型,O,抗原(耐热的菌体抗原),O1-O13,共,13,种,K,抗原型(荚膜抗原),K1-K71,共,65,种,H,抗原(鞭毛抗原),无特异性,12,血清分型O抗原(耐热的菌体抗原)12,三、检测程序,食品安全国家标准 副溶血性弧菌检验,GB 4789.7-2013,13,三、检测程序 食品安全国家标准 副溶血性弧菌检,GB 4789.7-2013,14,GB 4789.7-201314,1,、样品制备,食品样品,鱼类:表面组织、肠、鳃,贝类:全部内容物(贝肉和体液),甲壳类:动物的中心部分,包括肠、鳃,水产制品,如为带壳贝类或甲壳类,应先在,自来水,中洗刷外壳并甩干表面水分,然后以无菌操作打开外壳,按上述要求取相应部分。,15,1、样品制备食品样品15,2,、增菌,-,3%,氯化钠碱性蛋白胨水,定性,-,取样品,25 g,(,mL,),加入,3%,氯化钠碱性蛋白胨水,225 mL,。,定量,-,选择,3,个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种,3,支含有,9 mL 3,氯化钠碱性蛋白胨水的试管,每管接种,1 mL,。置,36,1,恒温箱内,培养,8 h,18 h,。,16,2、增菌-3%氯化钠碱性蛋白胨水 定性-取样品,3,、分离,TCBS,平板、弧菌显色平板,对所有显示生长的增菌液,用接种环在距离液面以下,1 cm,内沾取一环增菌液,于,TCBS,平板,或,弧菌显色培养基,平板上划线分离。一支试管划线一块平板。于,36 1,培养,18 h,24 h,。,17,3、分离TCBS平板、弧菌显色平板对所有显示生长的增菌液,,TCBS,平板上典型特征,典型的副溶血性弧菌 在,TCBS,上,呈圆形、半透明、表面光滑的,绿色菌落,。,18,TCBS平板上典型特征典型的副溶血性弧菌 在TCBS上,呈,TCBS,平板上典型特征,19,TCBS平板上典型特征 19,科玛嘉弧菌显色平板,-,紫色菌落,20,科玛嘉弧菌显色平板-紫色菌落20,4,、纯培养,挑取,3,个或以上的可疑菌落,划线,3,氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板,,361,培养,18 h,24h,。,5,、初步鉴定,氧化酶试验,涂片镜检,3%,氯化钠三糖铁,嗜盐性试验,21,4、纯培养21,底层变黄不变黑,无气泡,斜面颜色不变,有动力,22,底层变黄不变黑,无气泡,斜面颜色不变,有动力22,6,、确定鉴定,甘露醇发酵试验,-,含,3%,氯化钠,的培养基,赖氨酸脱羧酶试验,V-P,试验,ONPG,试验,采用,3%,氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行,副溶血性弧菌:,甘露醇,+,赖氨酸脱羧酶,+,V-P -ONPG -,23,6、确定鉴定甘露醇发酵试验-含3%氯化钠的培养基23,ONPG,试验,挑取,1,满环新鲜培养物接种于,0.25 mL 3%,氯化钠溶液,在通风橱中,滴加,1,滴甲苯,摇匀后置,37,水浴,5 min,。加,0.25 mL ONPG,溶液,,36,培养观察,24 h,。,阳性结果呈黄色。阴性结果则,24 h,不变色。,ONPG-,邻硝基酚,-D-,半乳糖苷,24,ONPG 试验挑取1满环新鲜培养物接种于0.25 mL 3%,可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。,API 20E,25,可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系,7,、选做试验,血清学分型,-,11,种,O,抗原血清,神奈川试验,-,我妻氏血琼脂平板,26,7、选做试验血清学分型-11种O抗原血清26,8,、结果与报告,根据检出的可疑菌落生化性状,报告,25 g,(,mL,)样品中检出副溶血性弧菌。,27,8、结果与报告根据检出的可疑菌落生化性状,报告25 g(mL,如果进行定量检测,根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数,查最可能数(,MPN,)检索表,报告每,g,(,mL,)副溶血性弧菌的,MPN,值。,28,如果进行定量检测,根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数,查最,Thank You!,29,Thank You!29,