单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,欢迎光临指导,荧光猫,荧光基因,基因工程,具体流程,1.,在具体,操作,时,需要,用到哪些基本工具,？,获取荧光基因,荧光基因与载体结合,构建重组质粒,将重组质粒导入受精卵,限制性核酸内切酶（简称：限制酶）,限制酶,DNA,连接酶,载体,2.,这些工具有哪些特性，以及如何使用这些工具呢,？,专题一 基因工程,1,1,DNA,重组技术的基本工具,句容市实验高级中学 王璐琦,一轮复习,考,纲要求,等级,要求,新,课标要求,基因工程,的工具及其应用,B,大概念,5,基因工程赋予生物,新的遗传,特性,重要概念,5.1,基因工程是一种重组,DNA,技术,次级概念,5.1.2,阐明,DNA,重组技术的实现需要利用限制性核酸内切酶、,DNA,连接酶和载体三种基本工具,下,图中的图,1,和图,2,分别表示的是,EcoR,限制酶和,Sma,限制酶的作用示意图，据图分析：,【,限制酶,】,(1),请说出,Eco,R,限制酶和,Sma,限制酶识别的,脱氧核苷酸,序列及切割的位点。,(2),以上实例说明限制酶有何特性？,Eco,R,限制酶识别的碱基序列是,GAATTC,，切割位点在,G,和,A,之间；,Sma,限制酶识别的碱基序列是,CCCGGG,，切割位点在,G,和,C,之间。,限制酶具有专一性。,（,3,）限制酶具体切割下图中的哪个化学键？,连接两个相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,a,【DNA,连接酶,】,由下图所示,DNA,连接酶,催化,具有,黏性末端,的,DNA,片段之间,形成,键,。,相同,磷酸二酯,名称,作用部位,作用结果,DNA,连接酶,磷酸二酯键,将,连接为一个,DNA,分子,DNA,聚合酶,将,依次连接到,已有,核苷酸链,的,末端,【,归纳提升,】,比较,DNA,连接酶与,DNA,聚合酶,磷酸二酯键,单个脱氧核苷酸,两个,DNA,片段,【,典例,1,】,如图为,DNA,分子在不同酶的作用下所发生的变化，其中甲图为,酶，乙图为,酶，丙图为,酶。,乙,丙,甲,限制,DNA,聚合,DNA,连接,如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。,从图中可看出，质粒作为载体具备的基本条件有：,1,;,2,;,3,.,【,载体,】,限制酶切割位点,标记基因,复制原点,双链环状,DNA,分子,除以上条件外，还要具备对受体细胞无害等条件,便于,目的基因,的扩增,便于,目的基因,的插入,便于重组,DNA,的鉴定,和选择,载体上标记基因的作用,所以标记基因的作用是：,便于重组,DNA,的鉴定和选择,。,载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。,限制酶种类的,选择,方法,【,难点突破,】,下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图,1,、图,2,中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：,(1),用图中的质粒和外源,DNA,构建重组质粒，不能使用,Sma,切割，原因是,_,。,用,Sma,会破坏目的基因和质粒上的标记基因,(2),在构建重组质粒时，与只使用,EcoR,相比较，使用,BamH,和,Hind,两种限制酶同时处理质粒和外源,DNA,的优点在于可以防止（,先动手拼一拼，再回答,）,_,。,目的基因的自身环化及质粒的自身环化，还可以防止目的基因与质粒的反向连接,应选择切点位于目的基因两端的限制酶，不能选择切点位于目的基因内部的限制酶。,质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，若有多个标记基因的，则切割后至少要保留一个标记基因。,为避免目的基因和质粒的自身环化并确保目的基因能定向插入质粒，从而提高构建重组,DNA,分子,的效率，往往使用,两种,切割,形成不同黏性末端的限制酶,同时切割目的基因和质粒。,【,归纳总结,】,【,典例,2,】,基因工程中，须使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶,的识别序列和切点是,G,GATCC,，限制酶,的识别序列和切点是,GATC,。根据图示判断下列操作正确的是,(,),A,目的基因和质粒均用限制酶,切割,B,目的基因和质粒均用限制酶,切割,C,质粒用限制酶,切割，目的基因用限制酶,切割,D,质粒用限制酶,切割，目的基因用限制酶,切割,D,用限制酶,EcoR,单独切割某普通质粒，可产生,一条,14 kb(1 kb,即,1000,个碱基对,),的长链，而同时用限制酶,EcoR,、,Mbo,联合切割该质粒，可得到,三段,三种长度的,DNA,片段，,如下,图,(,其中,*,表示,EcoR,限制酶切割后的一个黏性末端,),。若用,Mbo,限制酶单独切割该普通质粒，则产生的,DNA,片段的长度,可以,为,（）,A.2.5,和,5.5 B.2.5,和,6 C.5.5,和,8 D.6,和,8,【,能力拓展,】,D,分子,手术刀,化学 本质,来源,作 用,结 果,识别双链,DNA,分子中特定的,，并切开特定部位的两个核苷酸之间的,。,主要来源于,限制酶,操作工具,基因工程,分子,缝合针,分子运输车,DNA,连接酶,载体,种 类,EcoliDNA,连接酶,和,连接酶,作用,种类,条 件,产生,或,平末端,稳定,存在,并能,有一个至多个,切,割,位点,具有特殊的,基因,常用,，,还有,噬菌体的衍生物、动植物病毒等,缝合,，,形成重组,DNA,分子,【,构建知识网络,】,蛋白质,核苷酸序列,原核生物,黏性末端,磷酸二酯键,T,4,DNA,双链,DNA,片段,质粒,限制酶,复制,标记,谢谢大家指导,