,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血清尿素氮的测定,目的要求,了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。,复习尿素的生成机理及其意义。,实验原理,血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰,-,肟（,DAM,）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为,fearon,反应。其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。,实验材料,1.,器材 刻度吸管（,0.1ml,、,2ml,、,10ml,）恒温水浴箱 分光光度计,2.,试剂,（,1,）待测血浆,（,2,）尿素氮试剂,（,3,）二乙酰,-,肟试剂,（,4,）尿素氮标准液,操作步骤,取试管三支按下表操作,试管,试剂（,ml,）,测定管,标准管,空白管,1,：,4,稀释血清（或血浆）,0.1,尿素氮标准液,（,0.02mg/ml,）,0.1,蒸馏水,0.1,二乙酰,-,肟,0.5,0.5,0.5,尿素氮试剂,5.0,5.0,5.0,混匀，置沸水浴中加热,15min,，立即用自来水冷却,5,分钟。分光光度计选用,540nm,波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。,计算及结果分析,尿素（,mg%,）,=,尿,素氮标准液浓度*,5(mg/ml,；,mg/100ml),测定管吸光度,标准管吸光度,注意事项,1.,此法灵敏度高，用量极微（一般只需,0.02ml,血清即可）。本实验是先将血清用生理水以,1,：,4,加以稀释再取,0.1ml,，故最后计算时，应乘以稀释倍数“,5”,2.,试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于,5%/h,）。,3.,此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。,4.,吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。,5.,尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以,1:50,稀释。如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。,思考题,血清尿素氮测定的方法及临床意义。,