,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,黄酮类化合物,(flavanoids),第一节 概述,一、黄酮类化合物的定义及编号,两个取代芳香环通过中央三碳链连接而成的一系列化合物,取代基：,-OH,，,OCH,3,，,CH,3,，异戊烯基，糖,二、黄酮类化合物生物合成的基本途径,醋酸,-,丙二酸,莽草酸复合途径,三、黄酮类化合物的分类,依据：中央三碳链的氧化程度、,B-,环连接位置,(2-,位或,3-,位,),、以及三碳链是否成环,分类：,三、黄酮类化合物的分类,依据：中央三碳链的氧化程度、,B-,环连接位置,(2-,位或,3-,位,),、以及三碳链是否成环,分类：,四、黄酮苷类化合物,分类：氧苷（,3-,位黄酮醇苷，芳环羟基苷）、碳苷,单糖苷、双糖苷,单糖链苷、双糖链苷,五、各类黄酮类化合物的生物合成关系,六、黄酮类化合物的生物活性,对心血管系统的作用,银杏黄酮,抗肝脏毒作用,抗炎作用,芦丁、二氢槲皮素等,六、黄酮类化合物的生物活性,雌性激素样作用,抗菌及抗病毒作用,黄芩苷、木犀草素等,止咳、祛痰、平喘作用,六、黄酮类化合物的生物活性,抗氧化作用,抗癌作用,第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应,一、性状,固体，具旋光,(,二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、黄酮苷,),黄色、淡黄色、无色,二、溶解性,苷元：脂溶性,(,甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、稀碱水等,),水溶性：,1.,黄酮、黄酮醇、查耳酮等,(,平面,),甲氧基取代黄酮类,黄酮苷：水、甲醇、乙醇,三、酸碱性,酸性：酚羟基,与碱作用而溶于水中（用于提取）,碱性：,1-,位氧原子,与强酸成盐，表现出特殊颜色（用于鉴别）,四、显色反应,1,、还原试验,盐酸,-,镁粉(锌粉)反应：试样乙醇液+镁粉+浓盐酸（橙-紫-蓝）,NaBH,4,还原反应：试样乙醇液,+2%,NaBH,4,+,浓酸（紫红）,鉴别二氢黄酮,四、显色反应,2,、金属盐络合反应：,AlCl,3,、,Pb(OAc),2,、,Mg(OAc),2,3,、硼酸显色反应：,5-,羟基黄酮 或,2-,羟基查耳酮,4,、碱性试剂：氨气、,Na,2,CO,3,二氢黄酮,查耳酮，亮黄色,黄酮醇,黄色,通空气后棕色,多羟基黄酮,氧化（深红色）,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,一、提取,苷元：乙酸乙酯、乙醚、氯仿、乙醇、甲醇等有机溶剂,黄酮苷：丙酮、乙酸乙酯、乙醇、水或混合溶剂,注意：水解酶的灭活(提取黄酮苷),1.,植物冷冻处理,2.植物干燥,2.,热水提取,3.,有机溶剂提取,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,二、粗提物的精制（除叶绿素、多糖、蛋白质）,1,、溶剂萃取法,石油醚脱酯,醇沉除多糖及蛋白,2,、碱提酸沉法,黄酮苷类碱水提取、酸化后沉淀,注意：碱性过强,破坏黄酮母核,酸性过强,生成,氧,盐而溶解,3,、大孔树脂吸附法,黄酮苷水溶液大孔树脂吸附,水洗杂质,乙醇解吸,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,三、黄酮类化合物的分离纯化,1,、柱色谱法,薄层色谱确定分离条件：固定相及流动相,要求：样品不拖尾,Rf,值适中,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,三、黄酮类化合物的分离纯化,1,、柱色谱法,(1)硅胶柱色谱：,脂溶性黄酮类,：硅胶吸附层析,展开剂：乙酸乙酯-石油醚；氯仿-甲醇,多羟基黄酮苷元及黄酮苷,：硅胶分配层析,展开剂：氯仿-甲醇-水,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,三、黄酮类化合物的分离纯化,1,、柱色谱法,(2)聚酰胺柱色谱：适于分离黄酮类化合物,洗脱规律：,a,羟基多，吸附强，后洗出,b,由先至后：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇,C,芳核及共轭双键多易吸附,优点：不脱尾，不可逆吸附鞣质,缺点：弱碱性，破坏黄酮,类化合物母核或使其聚合,聚酰胺的再生：,5%,NaOH,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,三、黄酮类化合物的分离纯化,1,、柱色谱法,(3)葡聚糖凝胶柱色谱：,Sephadex-G,及,Sephadex-LH20(,羟丙基葡聚糖凝胶，-,OH -OCH,2,CH,2,CH,2,OH）,Sephadex-G:,排阻色谱，分子量大先流出,Sephadex-LH20,：排阻及吸附色谱,分离游离黄酮，吸附作用主导(酚羟基多，吸附强,),分离黄酮苷分子筛作用主导,洗脱剂：甲醇-水,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,三、黄酮类化合物的分离纯化,2,、梯度,pH,萃取法,分离酸性强弱不同的苷元（酚羟基数目及位置的不同）,提取物溶于有机溶剂后分别用,5,NaHCO,3,、,5%Na,2,CO,3,、,0.2%NaOH,、,4%NaOH,萃取,酸性:,7，4-,OH,7,或4-,OH,一般酚羟基 5-,OH,溶于,NaHCO,3,溶于,Na,2,CO,3,溶于不同浓度,NaOH,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,三、黄酮类化合物的分离纯化,3,、铅盐沉淀法：,具邻二酚结构：醋酸铅沉淀,不具邻二酚结构：碱式醋酸铅沉淀,铅盐沉淀的后处理：硫酸盐或磷酸盐；阳离子交换树脂脱铅,4,、硼酸络合法,具邻二酚结构：与硼酸的络合物可溶于水中,5,、高效液相色谱法,用于较难分开的黄酮类化合物,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,一、色谱法在黄酮类化合物鉴定中的应用,薄层色谱：两个展开体系中，样品与对照品,Rf,值及颜色相同,高效液相色谱：保留时间及紫外光谱相同,二、紫外及可见光谱,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,一）,A,环质子,(1),、,5,，,7-,二羟基黄酮类化合物,H-6:,二重峰,;H-8:,二重峰,J,值,2.5,左右,H-6,比,H-8,高场,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,一）,A,环质子,2,、,7-,羟基黄酮类化合物,H-5,：,d,J=9.0Hz,8.0,H-6,：,dd,J=2.5,9.0Hz,H-8,：,d,，,J=2.5Hz,6.0-7.0,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,二）,B,环质子,1,、,4-,氧取代黄酮类化合物,H-2,（,H-6,）：,d,J=8.5Hz,H-3,（,H-5,）：,d,J=8.5Hz,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,二）,B,环质子,2,、,3,4-,二氧取代黄酮类化合物,H-2,：,d,J=2.5Hz,H-5,：,d,J=8.5Hz,H-6,：,dd,J=2.5,8.5Hz,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,二）,B,环质子,3,、,3,4,5-,三氧取代黄酮类化合物,R=H,H-2(H-6),：,s,R3=OCH,3,or R5=OCH,3,：,H2,：,d,J=2.0Hz,H6,：,d,J=2.0Hz,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,三）,C,环质子,1,、黄酮类,H-3,：,s,6.30,2,、异黄酮类,H-2,：,s,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,(,三）,C,环质子,3,、二氢黄酮类,H-2,：,dd,J=5.0,11.0Hz,5.2,H-3,：,dd,J=5.0,17.0Hz,2.8,dd,J=11.0,17.0Hz,2.8,4,、二氢黄酮醇类,H-2,：,d,J=11Hz,4.9,H-3,：,d,J=11Hz,4.3,5,、查耳酮类,H-,：,d,J=17Hz,H-,：,d,J=17Hz,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,(,四,),、糖上的质子,端基碳上质子：,其它碳上质子：,，鼠李糖上甲基,化合物,糖上,H-1,黄酮醇,-3-,O,-,葡萄糖苷,黄酮类,-7(or 4 or 5)-,O,-,葡萄糖苷,黄酮类,6(or 8)-C-,糖苷,二氢黄酮醇,-3-,O-,葡萄糖苷,黄酮醇,-3-,O-,鼠李糖苷,二氢黄酮醇,-3-,O-,鼠李糖苷,5.7,6.0,4.8,5.2,4.1,4.3,5.0,5.1,4.0,4.2,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,五,),、,6-,及,8-,位碳上的甲基,6-CH,3,比,8-CH,3,高场约,0.2ppm,，处于,(,六,),、乙酰氧基质子,黄酮类化合物乙酰化后测氢谱，用以判断糖及酚羟基的数目,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,三、,1,H NMR,的应用,(,七,),、甲氧基上的质子,四、,13,C NMR,的应用,1,、确定分子中,C,的个数,2,、确定分子中,C,的种类,2,、确定分黄酮苷中糖的种类及连接位置,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,五、质谱,EI-MS,:,电子轰击法质谱，样品需要气化，多得到碎片峰,H,2,O(18);CO(28);CH,3,(15);CH,3,O(31);CH,3,CH,2,(29),FAB-MS,：快速原子轰击电离质谱，直接电离，分子离子峰较强,ESI-MS,：电喷雾电离质谱，分级电离,例：黄酮苷类化合物的分析,芦丁（,3-,芸香糖,葡萄糖,-,鼠李糖,槲皮素）,第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定,六、黄酮类化合物构型的确定,（,一）圆二色谱法,方法：用立体结构相似化合物的谱图与未知化合物的谱图对比,例：二氢槲皮素,（二）,X-,射线单晶衍射法,